(11)	022539 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201171325
(22)	2010.04.30
(51)	C12N 15/09 (2006.01) A61K 31/00 (2006.01)
(31)	09006028.6; 10000635.2
(32)	2009.04.30; 2010.01.22
(33)	EP
(43)	2012.05.30
(86)	PCT/EP2010/002659
(87)	WO 2010/124874 2010.11.04
(71)	(73) НОКСОН ФАРМА АГ (DE)
(72)	Зелль Зимоне, Морих Франк, Мааш Кристиан, Клуссманн Свен, Динзе Николь, Бухнер Клаус, Швебель Франк (DE)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С ГЕПСИДИНОМ

(57) 1. Нуклеиновая кислота, способная связываться с гепсидином, выбранная из группы, включающей нуклеиновую кислоту, связывающуюся с гепсидином типа B, нуклеиновую кислоту, связывающуюся с гепсидином типа C, и нуклеиновую кислоту, связывающуюся с гепсидином типа A, где

нуклеиновая кислота содержит в направлении 5'®3' первый концевой нуклеотидный фрагмент, центральный нуклеотидный фрагмент и второй концевой нуклеотидный фрагмент или содержит в направлении 5'®3' второй концевой нуклеотидный фрагмент, центральный нуклеотидный фрагмент и первый концевой нуклеотидный фрагмент, где центральный нуклеотидный фрагмент содержит от 32 до 40 нуклеотидов;

центральный нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа B, содержит нуклеотидную последовательность 5'-RKAUGGGAKUAAGUAAAUGAGGRGUWGGAGGAAR-3' или 5'-RKAUGGGAKAAGUAAAUGAGGRGUWGGAGGAAR-3'; и

центральный нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа C, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GRCRGCCGGVGGACACCAUAUACAGACUACKAUA-3' или 5'-GRCRGCCGGARGGACACCAUAUACAGACUACKAUA-3';

центральный нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит в направлении 5'®3' нижеследующие нуклеотидные фрагменты: бокс А, линкерный нуклеотидный фрагмент и бокс В или бокс В, линкерный нуклеотидный фрагмент и бокс А, где бокс А содержит нуклеотидную последовательность 5'-WAAAGUWGAR-3', линкерный нуклеотидный фрагмент содержит от 10 до 18 нуклеотидов, а бокс В содержит нуклеотидную последовательность 5'-RGMGUGWKAGUKC-3'.

2. Нуклеиновая кислота по п.1, где

первый концевой нуклеотидный фрагмент и второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, необязательно, гибридизуются друг с другом, и после такой гибридизации образуется двухцепочечная структура; и

первый концевой нуклеотидный фрагмент содержит от 5 до 8 нуклеотидов; и

второй концевой нуклеотидный фрагмент содержит от 5 до 8 нуклеотидов.

3. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1, 2, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSBC-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GVBVYX₄X₅X₆-3', где X₁ представляет собой А или отсутствует, Х₂ представляет собой G или отсутствует, Х₃ представляет собой В или отсутствует, Х₄ представляет собой S или отсутствует, Х₅ представляет собой С или отсутствует, Х₆ представляет собой U или отсутствует.

4. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-3, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSBC-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GVBVBX₄X₅X₆-3', где:

a) X₁ представляет собой А, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой В, Х₄ представляет собой S, Х₅ представляет собой С, Х₆ представляет собой U; или

b) Х₁ отсутствует, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой В, Х₄ представляет собой S, Х₅ представляет собой С, Х₆ представляет собой U; или

c) X₁ представляет собой А, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой В, Х₄ представляет собой S, Х₅ представляет собой С, Х₆ отсутствует.

5. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-3, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSBC-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GVBVYX₄X₅X₆-3', где:

a) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой В, Х₄ представляет собой S, Х₅ представляет собой С, Х₆ отсутствует; или

b) X₁ отсутствует, Х₂ отсутствует, Х₃ представляет собой В, Х₄ представляет собой S, Х₅ представляет собой С, Х₆ отсутствует; или

с) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой В, Х₄ представляет собой S, Х₅ отсутствует, Х₆ отсутствует.

6. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-3, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSBC-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GVBVYX₄X₅X₆-3', где X₁ отсутствует, Х₂ отсутствует, Х₃ представляет собой В или отсутствует, Х₄ представляет собой S или отсутствует, Х₅ отсутствует, Х₆ отсутствует.

7. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-6, где нуклеиновая кислота, связывающаяся с гепсидином типа В, содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую любой из последовательностей SEQ ID NO: 115-119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 175 или SEQ ID NO: 176.

8. Нуклеиновая кислота по п.1, где

первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, и второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, необязательно, гибридизуются друг с другом и после гибридизации образуют двухцепочечную структуру;

первый концевой нуклеотидный фрагмент содержит от 4 до 7 нуклеотидов;

второй концевой нуклеотидный фрагмент содержит от 4 до 7 нуклеотидов.

9. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSN-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-NSVSX₄X₅X₆-3', где X₁ представляет собой А или отсутствует, Х₂ представляет собой G или отсутствует, Х₃ представляет собой R или отсутствует, Х₄ представляет собой Y или отсутствует, Х₅ представляет собой С или отсутствует, Х₆ представляет собой U или отсутствует.

10. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8 и 9, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSN-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-NSVSX₄X₅X₆-3', где:

a) Х₁ представляет собой А, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой R, Х₄ представляет собой Y, Х₅ представляет собой С, Х₆ представляет собой U; или

b) Х₁ отсутствует, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой R, Х₄ представляет собой Y, Х₅ представляет собой С, Х₆ представляет собой U; или

с) X₁ представляет собой А, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой R, Х₄ представляет собой Y, Х₅ представляет собой С, Х₆ отсутствует.

11. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8 и 9, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSN-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-NSVSX₄X₅X₆-3', где:

a) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой R, Х₄ представляет собой Y, Х₅ представляет собой С, Х₆ отсутствует; или

b) Х₁ отсутствует, Х₂ отсутствует, Х₃ представляет собой R, Х₄ представляет собой Y, Х₅ представляет собой С, Х₆ отсутствует; или

c) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой G, Х₃ представляет собой R, Х₄ представляет собой Y, Х₅ отсутствует, Х₆ отсутствует.

12. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8 и 9, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃SBSN-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность 5'-NSVSX₄X₅X₆-3', где X₁ отсутствует, Х₂ отсутствует, Х₃ представляет собой R или отсутствует, Х₄ представляет собой Y или отсутствует, Х₅ отсутствует, Х₆ отсутствует.

13. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 8-12, где нуклеиновая кислота, связывающаяся с гепсидином типа С, содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую любой из SEQ ID NO: 122-126, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 163 или SEQ ID NO: 174.

14. Нуклеиновая кислота по п.1, где линкерный нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит в направлении 5'®3' первый линкерный нуклеотидный субфрагмент, второй линкерный нуклеотидный субфрагмент и третий линкерный нуклеотидный субфрагмент, где предпочтительно первый линкерный нуклеотидный субфрагмент и третий линкерный нуклеотидный субфрагмент, необязательно, гибридизуются друг с другом, и после такой гибридизации образуется двухцепочечная структура.

15. Нуклеиновая кислота по п.14, где первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, и третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, независимо друг от друга содержат от 3 до 6 нуклеотидов.

16. Нуклеиновая кислота по любому из пп.14, 15, где:

а) первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 5'-GGAC-3', 5'-GGAU-3' и 5'-GGA-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GUCC-3'; или

b) первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GCAG-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-CUGC-3'; или

c) первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GGGC-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GCCC-3'; или

d) первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GAC-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GUC-3'; или

e) первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-ACUUGU-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 5'-GCAAGU-3' и 5'-GCAAGC-3'; или

f) первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-UCCAG-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-CUGGA-3', предпочтительно первый линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GAC-3', а третий линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-GUC-3'.

17. Нуклеиновая кислота по любому из пп.14-16, где второй линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит от 3 до 5 нуклеотидов.

18. Нуклеиновая кислота по любому из пп.14-17, где второй линкерный нуклеотидный субфрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 5'-VBAAW-3', 5'-AAUW-3' и 5'-NBW-3'.

19. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 14-18, где

первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, и второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, необязательно, гибридизуются друг с другом, и после такой гибридизации образуется двухцепочечная структура;

первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит от 4 до 7 нуклеотидов;

второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит от 4 до 7 нуклеотидов.

20. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 14-19, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃BKBK-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-MVVVX₄X₅X₆-3', где X₁ представляет собой G или отсутствует, Х₂ представляет собой S или отсутствует, Х₃ представляет собой V или отсутствует, Х₄ представляет собой В или отсутствует, Х₅ представляет собой S или отсутствует, Х₆ представляет собой С или отсутствует.

21. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 14-20, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃BKBK-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-MVVVX₄X₅X₆-3', где:

a) X₁ представляет собой G, Х₂ представляет собой S, Х₃ представляет собой V, Х₄ представляет собой В, Х₅ представляет собой S, Х₆ представляет собой С; или

b) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой S, Х₃ представляет собой V, Х₄ представляет собой В, Х₅ представляет собой S, Х₆ представляет собой С; или

c) X₁ представляет собой G, Х₂ представляет собой S, Х₃ представляет собой V, Х₄ представляет собой В, Х₅ представляет собой S, Х₆ отсутствует.

22. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 14-20, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃BKBK-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-MVVVX₄X₅X₆-3', где:

a) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой S, Х₃ представляет собой V, Х₄ представляет собой В, Х₅ представляет собой S, Х₆ отсутствует; или

b) X₁ отсутствует, Х₂ отсутствует, Х₃ представляет собой V, Х₄ представляет собой В, Х₅ представляет собой S, Х₆ отсутствует; или

c) X₁ отсутствует, Х₂ представляет собой S, Х₃ представляет собой V, Х₄ представляет собой В, Х₅ отсутствует и Х₆ отсутствует.

23. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 14-20, где первый концевой нуклеотидный фрагмент нуклеиновой кислоты, связывающейся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность 5'-X₁X₂X₃BKBK-3', а второй концевой нуклеотидный фрагмент содержит нуклеотидную последовательность 5'-MVVVX₄X₅X₆-3', где X₁ отсутствует, Х₂ отсутствует, Х₃ представляет собой V или отсутствует, Х₄ представляет собой В или отсутствует, Х₅ отсутствует и Х₆ отсутствует.

24. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1 и 14-23, где нуклеиновая кислота, связывающаяся с гепсидином типа А, содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую любой из SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 39-41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 137-141 или SEQ ID NO: 173.

25. Нуклеиновая кислота, способная связываться с гепсидином, где нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую любой из SEQ ID NO: 127-131.

26. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-25, где нуклеиновая кислота представляет собой антагонист гепсидина.

27. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-26, где нуклеиновая кислота содержит модифицирующую группу и где скорость экскреции молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей модифицирующую группу, из организма ниже, чем скорость экскреции нуклеиновой кислоты, не содержащей такой модифицирующей группы.

28. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-26, где нуклеиновая кислота содержит модифицирующую группу и где молекула нуклеиновой кислоты, содержащая указанную модифицирующую группу, имеет более длительное время пребывания в организме по сравнению с временем пребывания нуклеиновой кислоты, не содержащей такой модифицирующей группы.

29. Нуклеиновая кислота по любому из пп.27, 28, где модифицирующая группа связана с указанной нуклеиновой кислотой посредством линкера, где предпочтительным линкером является биологически разлагаемый линкер.

30. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-29, где указанными нуклеотидами или нуклеотидами, образующими указанную нуклеиновую кислоту, являются L-нуклеотиды.

31. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-29, где указанной нуклеиновой кислотой является L-нуклеиновая кислота.

32. Фармацевтическая композиция, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-31 и, при необходимости, дополнительный компонент, где дополнительный компонент выбран из группы, включающей фармацевтически приемлемые наполнители, фармацевтически приемлемые носители и фармацевтически активные средства, где фармацевтическая композиция предназначена для лечения и/или профилактики анемии, гипоферремии, парорексии, состояний, связанных с повышенным уровнем гепсидина, состояний, связанных с повышенным уровнем железа, и/или состояний, связанных с избыточным содержанием железа.

33. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31 для получения лекарственного препарата для лечения и/или профилактики анемии, гипоферремии, парорексии, состояний, связанных с повышенным уровнем гепсидина, состояний, связанных с повышенным уровнем железа, или состояний, связанных с избыточным содержанием железа.

34. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31 для получения препарата для диагностики анемии, гипоферремии, парорексии, состояний, связанных с повышенным уровнем гепсидина, состояний, связанных с повышенным уровнем железа, или состояний, связанных с избыточным содержанием железа.

35. Применение по п.33, где лекарственный препарат используется отдельно или в комбинации с другим лекарственным препаратом или способом лечения, где лекарственный препарат включает дополнительное фармацевтически активное соединение, а способ включает введение указанного дополнительного фармацевтически активного соединения, где указанное дополнительное фармацевтически активное соединение выбрано из группы, состоящей из железосодержащих добавок, витаминных добавок, стимуляторов продукции эритроцитов, антибиотиков, противовоспалительных биологических средств, ингибиторов иммунной системы, антитромболитических средств, статинов, сосудосуживающих средств и инотропных соединений.

36. Комплекс, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-31 и гепсидин, где указанным комплексом предпочтительно является кристаллический комплекс.

37. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31 для детекции гепсидина.

38. Способ скрининга антагониста или агониста гепсидина, включающий следующие стадии:

получение антагониста-кандидата и/или агониста-кандидата гепсидина;

получение нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31;

получение тест-системы, которая продуцирует сигнал в присутствии антагониста и/или агониста гепсидина;

определение, является ли антагонист-кандидат антагонистом гепсидина и/или является ли агонист-кандидат агонистом гепсидина.

39. Набор для детекции гипсидина, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-31, где предпочтительным гепсидином является гепсидин человека.

40. Способ детекции нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31 в образце, где способ включает следующие стадии:

a) получение образца, содержащего нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению;

b) получение зонда для захвата, где зонд для захвата является, по меньшей мере, частично комплементарным первой части нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31, и зонда для детекции, где зонд для детекции, по меньшей мере, частично комплементарен второй части нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31 или, альтернативно, зонд для захвата, по меньшей мере, частично комплементарен второй части нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31, а зонд для детекции, по меньшей мере, частично комплементарен первой части нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31;

c) необязательно, определение способности зонда для захвата гибридизироваться с нуклеиновой кислотой по любому из пп.1-31, полученной на стадии (а); и

d) детекция комплекса, полученного на стадии (с) и состоящего из нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-31, а также зонда для захвата и зонда для детектирования.