(57) 1. Антитело, которое связывает транстиретин, содержащее три CDR тяжелой цепи по Кабату: CDR-H1 с последовательностью SEQ ID NO: 67, CDR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 68 и CDR-H3 с последовательностью SEQ ID NO: 69, и три CDR легкой цепи по Кабату: CDR-L1 с последовательностью SEQ ID NO: 77, CDR-L2 с последовательностью SEQ ID NO: 78 и CDR-L3 с последовательностью SEQ ID NO: 79.
2. Антитело, которое связывает транстиретин, содержащее три CDR тяжелой цепи по Кабату: CDR-H1 с последовательностью SEQ ID NO: 67, CDR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 68 и CDR-H3 с последовательностью SEQ ID NO: 69, и три CDR легкой цепи по Кабату: CDR-L1 с последовательностью SEQ ID NO: 80, CDR-L2 с последовательностью SEQ ID NO: 78 и CDR-L3 с последовательностью SEQ ID NO: 79.
3. Антитело, которое связывает транстиретин, содержащее три CDR тяжелой цепи по Кабату: CDR-H1 с последовательностью SEQ ID NO: 67, CDR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 14 и CDR-H3 с последовательностью SEQ ID NO: 69, и три CDR легкой цепи по Кабату: CDR-L1 с последовательностью SEQ ID NO: 77, CDR-L2 с последовательностью SEQ ID NO: 78 и CDR-L3 с последовательностью SEQ ID NO: 79.
4. Антитело, которое связывает транстиретин, содержащее три CDR тяжелой цепи по Кабату: CDR-H1 с последовательностью SEQ ID NO: 67, CDR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 14 и CDR-H3 с последовательностью SEQ ID NO: 69, и три CDR легкой цепи по Кабату: CDR-L1 с последовательностью SEQ ID NO: 80, CDR-L2 с последовательностью SEQ ID NO: 78 и CDR-L3 с последовательностью SEQ ID NO: 79.
5. Антитело по любому из пп.1-4, отличающееся тем, что содержит CDR-Н1 по Кабату-Чотия (SEQ ID NO: 118).
6. Антитело по любому их пп.1-4, отличающееся тем, что содержит CDR-Н1 по Кабату-Чотия (SEQ ID NO: 117).
7. Антитело по любому из предыдущих пунктов, которое представляет собой моноклональное антитело.
8. Антитело по любому из предыдущих пунктов, которое представляет собой мышиное, химерное, гуманизированное или венированное антитело.
9. Антитело по любому из предыдущих пунктов, которое имеет изотип IgG1 человека.
10. Антитело по любому из пп.1-8, которое имеет изотип IgG2 или IgG4 человека.
11. Антитело по любому из пп.1-10, которое является гуманизированным или химерным антителом при этом позиция Н69 представляет собой F или I, где позиция пронумерована по Кабату.
12. Антитело по п.11, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область гуманизированной зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 5-12, и вариабельную область гуманизированной зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90 % идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 19-23, при этом позиция H19 представляет собой R или K, позиция Н40 представляет собой А или Т, позиция Н44 представляет собой G или R, позиция Н49 представляет собой S или А, позиция Н77 представляет собой S или Т, позиция Н82а представляет собой N или S, позиция Н83 представляет собой R или K, позиция Н84 представляет собой А или S, и позиция Н89 представляет собой V или М, где позиции пронумерованы по Кабату.
13. Антитело по п.12, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором по меньшей мере одна из следующих позиций занята аминокислотой, как указано в позиции Н42 находится Е, в позиции Н47 находится L, в позиции Н69 находится F, в позиции Н82 находится S, в позиции Н82b находится L, в позиции H108 находится L, в позиции L8 находится А, в позиции L9 находится Р, в позиции L18 находится S, в позиции L19 находится V, в позиции L36 находится F, в позиции L39 находится R, в позиции L60 находится S, в позиции L70 находится А, и в позиции L74 находится R, где позиции пронумерованы по Кабату.
14. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н47, Н69 и Н82 находятся соответственно L, F и S, где позиции пронумерованы по Кабату.
15. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н47, Н69, Н82 и Н82b находятся соответственно L, F, S и L, где позиции пронумерованы по Кабату.
16. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н42, Н47 и H108 находятся соответственно Е, L и L, где позиции пронумерованы по Кабату.
17. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н69, Н82, и Н82b находятся соответственно F, S и L, где позиции пронумерованы по Кабату.
18. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н47 и H108 находится L, где позиции пронумерованы по Кабату.
19. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н82 и Н82b находятся соответственно S и L, где позиции пронумерованы по Кабату.
20. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н42, Н47 и Н82b находятся соответственно Е, L и L, где позиции пронумерованы по Кабату.
21. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позиции L36 находится F, где позиции пронумерованы по Кабату.
22. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позиции L60 находится S, где позиции пронумерованы по Кабату.
23. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях L8, L9, L19, L36, L39, L60, L70 и L74 находятся соответственно А, Р, V, F, R, S, А и R, где позиции пронумерованы по Кабату.
24. Антитело по п.13, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях L8, L9, L18, L19, L36, L39, L60, L70 и L74 находятся соответственно А, Р, S, V, F, R, S, А и R, где позиции пронумерованы по Кабату.
25. Антитело по п.12, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 5-12, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 19-23, при этом позиция H19 представляет собой R или K, позиция Н40 представляет собой А или Т, позиция Н44 представляет собой G или R, позиция Н49 представляет собой S или А, позиция Н77 представляет собой S или Т, позиция Н82а представляет собой N или S, позиция Н83 представляет собой R или K, позиция Н84 представляет собой А или S, и позиция Н89 представляет собой V или М, где позиции пронумерованы по Кабату.
26. Антитело по п.25, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 5-12, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 19-23, при этом позиция H19 представляет собой R или K, позиция Н40 представляет собой А или Т, позиция Н44 представляет собой G или R, позиция Н49 представляет собой S или А, позиция Н77 представляет собой S или Т, позиция Н82а представляет собой N или S, позиция Н83 представляет собой R или K, позиция Н84 представляет собой А или S, и позиция Н89 представляет собой V или М, где позиции пронумерованы по Кабату.
27. Антитело по п.26, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 5-12, а вариабельная область зрелой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 19-23.
28. Антитело по п.27, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, а вариабельная область зрелой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
29. Антитело по п.11, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область гуманизированной зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 64-66, и вариабельную область гуманизированной зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90 % идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 74-76, при этом позиция Н82а представляет собой N или S, позиция Н83 представляет собой R или K, позиция Н84 представляет собой А или S, позиция Н89 представляет собой V или М, и позиция L18 представляет собой S или Р, где позиции пронумерованы по Кабату.
30. Антитело по п.29, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором по меньшей мере одна из следующих позиций занята указанной аминокислотой: в позиции H1 находится Е, в позиции Н47 находится L, а в позиции L36 находится F, где позиции пронумерованы по Кабату.
31. Антитело по п.30, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях H1 и Н47 находятся соответственно Е и L, где позиции пронумерованы по Кабату.
32. Антитело по п.30, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позиции L36 находится F, где позиции пронумерованы по Кабату.
33. Антитело по любому из пп.29-32, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором по меньшей мере одна из следующих позиций занята указанной аминокислотой: в позиции Н3 находится K, в позиции H105 находится Т, в позиции L8 находится А, в позиции L9 находится Р, в позиции L19 находится V, в позиции L26 находится S, в позиции L60 находится S, а в позиции L70 находится А, где позиции пронумерованы по Кабату.
34. Антитело по п.33, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях Н3 и H105 находятся соответственно K и Т, где позиции пронумерованы по Кабату.
35. Антитело по п.33, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях L8, L9, L19 и L70 находятся соответственно А, Р, V и А, где позиции пронумерованы по Кабату.
36. Антитело по п.33, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором в позициях L26 и L60 находится S, где позиции пронумерованы по Кабату.
37. Антитело по п.29, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 64-66, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 74-76, при этом позиция Н82а представляет собой N или S, позиция Н83 представляет собой R или K, позиция Н84 представляет собой А или S, позиция Н89 представляет собой V или М, и позиция L18 представляет собой S или Р, где позиции пронумерованы по Кабату.
38. Антитело по п.37, которое представляет собой гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 64-66, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 74-76, при этом позиция Н82а представляет собой N или S, позиция Н83 представляет собой R или K, позиция Н84 представляет собой А или S, позиция Н89 представляет собой V или М, и позиция L18 представляет собой S или Р, где позиции пронумерованы по Кабату.
39. Антитело по п.38, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 64-66, а вариабельная область зрелой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 74-76.
40. Антитело по п.39, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, а вариабельная область зрелой легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76.
41. Антигенсвязывающий фрагмент антитела по любому из пп.1-40, который связывает транстиретин.
42. Антигенсвязывающий фрагмент антитела по п.41, который представляет собой Fab или Fab'2-фрагмент.
43. Антигенсвязывающий фрагмент антитела по п.41, который представляет собой одноцепочечное антитело.
44. Антитело по любому из пп.11-40, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, а вариабельная область зрелой тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи.
45. Антитело по п.44, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором константная область тяжелой цепи содержит мутацию в одной или нескольких позициях 234, 235, 236 и 237 по нумерации ЕС.
46. Антитело по п.44 или 45, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором константная область тяжелой цепи является таковой изотипа IgG1.
47. Антитело по п.44, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи, имеющей последовательность SEQ ID NO: 103 с С-концевым лизином или без него, и/или вариабельная область зрелой легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, имеющей последовательность SEQ ID NO: 104 или 105.
48. Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь и легкую цепь антитела, как описано в любом из пп.1-40 и 44-47, или антигенсвязывающего фрагмента, как описано в любом из пп.41-43.
49. Нуклеиновая кислота по п.48, имеющая последовательность, содержащую любую из SEQ ID NO: 40, 42, 44-56, 87, 89, 91-96 и 106-108.
50. Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.48 или 49.
51. Клетка-хозяин, трансформированная рекомбинантным вектором экспрессии по п.50.
52. Способ гуманизации мышиного антитела по п.8, включающий:
а) выбор одного или больше акцепторных антител;
б) идентификацию аминокислотных остатков каркаса мышиного антитела по п.8, подлежащих сохранению;
в) синтез нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную тяжелую цепь, содержащую CDR тяжелой цепи антитела мыши, и нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную легкую цепь, содержащую CDR легкой цепи антитела мыши; и
г) экспрессию нуклеиновых кислот в клетке-хозяине для продуцирования гуманизированного антитела;
причем антитело мыши представляет собой 9D5 или 14G8, при этом 9D5 характеризуется вариабельной областью зрелой тяжелой цепи SEQ ID NO: 1 и вариабельной областью зрелой легкой цепи SEQ ID NO: 16, a 14G8 характеризуется вариабельной областью зрелой тяжелой цепи SEQ ID NO: 61 и вариабельной областью зрелой легкой цепи SEQ ID NO: 70.
53. Способ продуцирования гуманизированного, химерного или венированного антитела по п.8, включающий:
а) культивирование клеток, трансформированных нуклеиновыми кислотами, кодирующими тяжелую и легкую цепи антитела по п.8, так что клетки секретируют антитело; и
б) очистку антитела от клеточной культуральной среды.
54. Способ создания клеточной линии, продуцирующей гуманизированное, химерное или венированное антитело по п.8, включающий:
а) введение вектора, кодирующего тяжелую и легкую цепи указанного антитела по п.8 и маркер селекции в клетки;
б) размножение клеток в условиях, позволяющих отбирать клетки, имеющие увеличенное количество копий вектора;
в) выделение отдельных клеток из выбранных клеток; и
г) создание банка клеток, клонированных из одной клетки, выбранной на основе выхода антитела.
55. Способ по п.54, дополнительно включающий размножение клеток в селективных условиях и скрининг для обнаружения линий клеток, естественно экспрессирующих и секретирующих антитело в количестве по меньшей мере 100 мг/л/10⁶ клеток/24 ч.
56. Способ ингибирования или снижения агрегации транстиретина у субъекта, имеющего транстиретинопосредованный амилоидоз или подверженного риску его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43, тем самым ингибируя или уменьшая агрегацию транстиретина у субъекта.
57. Способ ингибирования или снижения формирования фибрилл транстиретина у субъекта, имеющего транстиретинопосредованный амилоидоз или подверженного риску его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43, тем самым ингибируя или уменьшая накопление транстиретина у субъекта.
58. Способ уменьшения количества отложений транстиретина у субъекта, имеющего транстиретинопосредованный амилоидоз или подверженного риску его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43, тем самым уменьшая количество отложений транстиретина у субъекта.
59. Способ устранения агрегатов транстиретина у субъекта, имеющего транстиретинопосредованный амилоидоз или подверженного риску его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43, тем самым устраняя агрегаты транстиретина у субъекта по сравнению с субъектом, имеющим транстиретинопосредованный амилоидоз или находящимся под риском его развития, который не получал антитела или антигенсвязывающего фрагмента.
60. Способ стабилизации нетоксичной формы транстиретина у субъекта, имеющего транстиретинопосредованный амилоидоз или подверженного риску его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43, тем самым стабилизируя нетоксичную форму транстиретина у субъекта.
61. Способ замедления начала проявления транстиретинопосредованного амилоидоза у субъекта, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43.
62. Способ диагностирования транстиретинопосредованного амилоидоза у субъекта, включающий приведение в контакт биологического образца от субъекта с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43 и обнаружение связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с транстиретином, причем присутствие связанного антитела или антигенсвязывающего фрагмента указывает на то, что субъект имеет транстиретинопосредованный амилоидоз.
63. Способ по п.62, дополнительно включающий сравнение связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с биологическим образцом с связыванием антитела или антигенсвязывающего фрагмента с контрольным образцом, полученным от здорового субъекта, при этом повышенное связывание антитела или антигенсвязывающего фрагмента с биологическим образцом относительно контрольного образца указывает на то, что субъект имеет транстиретинопосредованный амилоидоз.
64. Способ по п.63, отличающийся тем, что биологический образец и контрольный образец содержат клетки одинакового тканевого происхождения.
65. Способ по любому из пп.62-64, отличающийся тем, что биологический образец и/или контрольный образец представляют собой кровь, сыворотку, плазму или плотную ткань.
66. Способ по п.65, отличающийся тем, что плотная ткань представляет собой ткань из сердца, периферической нервной системы, вегетативной нервной системы, почек, глаз или желудочно-кишечного тракта.
67. Способ по любому из пп.56-66, отличающийся тем, что транстиретинопосредованный амилоидоз представляет собой наследственный транстиретиновый амилоидоз или спорадический транстиретиновый амилоидоз.
68. Способ по п.67, отличающийся тем, что наследственный транстиретиновый амилоидоз представляет собой наследственную амилоидную кардиомиопатию (FAC), наследственную амилоидную полинейропатию (FAP) или селективный амилоидоз центральной нервной системы (CNSA).
69. Способ по п.67, отличающийся тем, что спорадический транстиретиновый амилоидоз представляет собой старческий системный амилоидоз (SSA) или старческий сердечный амилоидоз (SCA).
70. Способ по любому из пп.56-66, отличающийся тем, что транстиретинопосредованный амилоидоз связан с накоплением амилоида в сердце, периферической нервной системе, вегетативной нервной системе, почках, глазах или желудочно-кишечном тракте субъекта.
71. Способ выявления присутствия или отсутствия отложений транстиретина у субъекта, включающий приведение в контакт биологического образца от субъекта, подозреваемого в наличии амилоидного накопления, с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43 и обнаружение связывания антитела с транстиретином, причем обнаружение связанного антитела или антигенсвязывающего фрагмента указывает на наличие отложений транстиретина.
72. Способ по п.71, дополнительно включающий сравнение связывания антитела или антигенсвязывающего фрагмента с биологическим образцом со связыванием антитела или антигенсвязывающего фрагмента с контрольным образцом, полученным от здорового субъекта, при этом повышенное связывание антитела или антигенсвязывающего фрагмента с биологическим образцом относительно контрольного образца указывает на то, что субъект имеет транстиретинопосредованный амилоидоз.
73. Способ по п.72, отличающийся тем, что биологический образец и контрольный образец содержат клетки одинакового тканевого происхождения.
74. Способ по любому из пп.70-73, отличающийся тем, что биологический образец и/или контрольный образец представляют собой кровь, сыворотку, плазму или плотную ткань.
75. Способ по п.74, отличающийся тем, что плотная ткань представляет собой ткань из сердца, периферической нервной системы, вегетативной нервной системы, почек, глаз или желудочно-кишечного тракта.
76. Способ определения количества отложений транстиретина у субъекта, включающий введение антитела по любому из пп.1-40 и 44-47 или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.41-43 и обнаружения присутствия связанного антитела или антигенсвязывающего фрагмента у субъекта, где присутствие связанного антитела или антигенсвязывающего фрагмента определяется с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ).

---