(11)	032560 (13) B1	Разделы: A B C E F G H
(21)	201690355
(22)	2014.08.06
(51)	A01H 5/00 (2006.01) A01H 1/00 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01)
(31)	61/863,761; 61/863,763
(32)	2013.08.08
(33)	US
(43)	2016.06.30
(86)	PCT/US2014/049923
(87)	WO 2015/021139 2015.02.12
(71)	(73) ПАЙОНИР ХАЙ-БРЕД ИНТЕРНЭШНЛ, ИНК. (US)
(72)	Абад Андре Р., Вулф Томас Чэд, Чжоу Лань (US)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	ИНСЕКТИЦИДНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ С ШИРОКИМ СПЕКТРОМ АКТИВНОСТИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

(57) 1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая инсектицидный полипептид, выбранная из группы, состоящей из:

(a) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13 или комплементарной ей последовательности полной длины;

(b) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14;

(c) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14; и

(d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14.

2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит синтетическую нуклеотидную последовательность, включающую кодоны, способные экспрессировать в растении.

3. ДНК-конструкция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 и гетерологичный регуляторный элемент, функционально связанный с молекулой нуклеиновой кислоты.

4. Клетка-хозяин, содержащая ДНК-конструкцию по п.3.

5. Клетка-хозяин по п.4, где клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку.

6. Клетка-хозяин по п.4, где клетка-хозяин представляет собой растительную клетку.

7. Трансгенное растение, устойчивое к насекомым-вредителям, содержащее клетку-хозяина по п.6.

8. Трансгенное растение по п.7, где указанное растение выбрано из группы, состоящей из маиса, сорго, пшеницы, капусты, подсолнечника, томата, крестоцветных, разновидностей перца, картофеля, хлопчатника, риса, сои, сахарной свеклы, сахарного тростника, табака, ячменя и масличного рапса.

9. Семя растения, содержащее ДНК-конструкцию по п.3.

10. Выделенный инсектицидный полипептид, выбранный из группы, состоящей из:

(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14;

(b) полипептида, кодируемого нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13;

(c) полипептида с последовательностью, по меньшей мере на 90% идентичной полипептидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14; и

(d) полипептида с последовательностью, по меньшей мере на 95% идентичной полипептидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14.

11. Инсектицидная композиция, содержащая полипептид по п.10.

12. Композиция по п.11, содержащая от 1 до 99 вес.% указанного полипептида.

13. Способ контроля популяции чешуекрылого или жесткокрылого вредителя, предусматривающий контакт указанной популяции с эффективным количеством полипептида по п.10.

14. Способ уничтожения чешуекрылого вредителя, предусматривающий обеспечение указанному вредителю эффективного количества полипептида по п.10.

15. Способ получения полипептида с пестицидной активностью, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п.4 в условиях, обеспечивающих экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты, и получение указанного полипептида, который выбран из группы, состоящей из:

(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14;

(b) полипептида, кодируемого нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13;

(c) полипептида с последовательностью, по меньшей мере на 90% идентичной полипептидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14; и

(d) полипептида с последовательностью, по меньшей мере на 95% идентичной полипептидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14.

16. Растение или растительная клетка со стабильно встроенной в их геном ДНК-конструкцией, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, обладающий инсектицидной активностью, где указанная молекула нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из:

(a) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13 или комплементарной ей последовательности полной длины;

(b) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14;

(c) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14; и

(d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14,

где указанная нуклеотидная последовательность функционально связана с промотором, который управляет экспрессией, кодирующей последовательности в растительной клетке.

17. Способ получения трансгенного растения или растительной клетки, устойчивых к вредителю, предусматривающий введение в указанные растение или растительную клетку вектора экспрессии, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует инсектицидный полипептид, где указанная молекула нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из:

(a) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13 или комплементарной ей последовательности полной длины;

(b) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14;

(c) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14; и

(d) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14.

18. Способ защиты растения от вредителя, предусматривающий введение в указанное растение или растительную клетку вектора экспрессии, содержащего нуклеотидную последовательность, которая кодирует инсектицидный полипептид, где указанная нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из:

(a) молекулы нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13 или комплементарной ей последовательности полной длины;

(b) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14;

(c) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14; и

(d) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14.

19. Способ по п.18, где полипептид обладает инсектицидной активностью в отношении чешуекрылого вредителя.

20. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, способная кодировать инсектицидный полипептид и выбранная из группы, состоящей из:

(a) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность с SEQ ID NO: 15 или комплементарную ей последовательность полной длины;

(b) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 16;

(c) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 16; и

(d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 16.

21. ДНК-конструкция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.20 и гетерологичный регуляторный элемент, функционально связанный с молекулой нуклеиновой кислоты.

22. Трансгенное растение, содержащее ДНК-конструкцию по п.21.

23. Семя растения, содержащее ДНК-конструкцию по п.21.

24. Выделенный инсектицидный полипептид, выбранный из группы, состоящей из:

(a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 16;

(b) полипептида, кодируемого нуклеотидной последовательностью с SEQ ID NO: 15;

(c) полипептида с последовательностью, по меньшей мере на 90% идентичной полипептиду с SEQ ID NO: 16; и

(d) полипептида с последовательностью, по меньшей мере на 95% идентичной полипептидной последовательности с SEQ ID NO: 16.

25. Инсектицидная композиция, содержащая полипептид по п.24.

26. Способ уничтожения или контроля популяции чешуекрылого или жесткокрылого вредителя, предусматривающий контакт указанной популяции с пестицидно эффективным количеством полипептида по п.23.

27. Способ получения трансгенного растения или растительной клетки, устойчивых к вредителю, предусматривающий введение в указанные растение или растительную клетку вектора экспрессии, содержащего нуклеотидную последовательность, которая кодирует инсектицидный полипептид, где указанная нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из:

(a) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность с SEQ ID NO: 15;

(b) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 16;

(c) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 16; и

(d) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 16.

28. Способ защиты растения от вредителя, предусматривающий обеспечение вредителю растения или растительной клетки, содержащих вектор экспрессии, включающий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.20.