(11) | 017456 (13) B1 |
    Разделы: A B C D E F G H  |
(21) | 201000076 |
(22) | 2008.06.26 |
(51) | C12N 15/09 (2006.01)
C12N 15/86 (2006.01)
C07K 14/11 (2006.01)
C12N 7/04 (2006.01)
A61K 39/39 (2006.01) |
(31) | 60/946,651; 07450177.6 |
(32) | 2007.06.27; 2007.10.05 |
(33) | US; EP |
(43) | 2010.06.30 |
(86) | PCT/EP2008/058182 |
(87) | WO 2009/000891 2008.12.31 |
(71) | (73) АВИР ГРИН ХИЛЗ БАЙОТЕКНОЛОДЖИ РИСЕРЧ ДИВЕЛОПМЕНТ ТРЕЙД АГ (AT) |
(72) | Волшек Маркус, Егоров Андрей, Бергманн Михаэль, Мустер Томас, Киттель Христиан (AT) |
(74) | Саломатина И.С. (RU) |
(54) | НОВЫЕ КОНСТРУКТЫ ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ВИРУСА ГРИППА |
(57) 1. Линейный экспрессирующий конструкт, не содержащий никаких последовательностей для амплификации и/или селекции, который содержит промотор РНК-полимеразы I (polI) и сигнал терминации polI, вставленные между промотором РНК-полимеразы II (polII) и сигналом полиаденилирования.
2. Линейный экспрессирующий конструкт по п.1, содержащий дополнительные защитные последовательности на N- и/или С-концах конструкта.
3. Линейный экспрессирующий конструкт по любому из пп.1 или 2, в котором защитные последовательности могут быть любыми последовательностями, не вовлеченными прямо в транскрипцию вирусной РНК.
4. Линейный экспрессирующий конструкт по любому из пп.1-3, содержащий по меньшей мере один сегмент вирусного гена, вставленный между polI-промотором и polI-терминатором.
5. Линейный экспрессирующий конструкт по п.4, в котором вирусный сегмент происходит из вируса гриппа типов А, В или С.
6. Линейный экспрессирующий конструкт по любому из пп.4 или 5, в котором сегмент вирусного гена выбирается из группы, состоящей из генных сегментов PA, PB1, РВ2, НА, NA, NP, M, NS или их части вируса гриппа.
7. Линейный экспрессирующий конструкт по любому из пп.4-6, в котором сегмент вирусного гена NS экспрессирует нефункциональный белок NS1.
8. Линейный экспрессирующий конструкт по любому из пп.4-7, в котором вирусный генный сегмент является кДНК-копией или продуктом амплификации ОТ-ПЦР вышеупомянутого сегмента.
9. Набор линейных экспрессирующих конструктов, содержащий по меньшей мере два экспрессирующих конструкта, по пп.1-8.
10. Набор из восьми линейных экспрессирующих конструктов по п.9, каждый из которых содержит по меньшей мере один вирусный генный сегмент PA, PB1, РВ2, НА, NA, NP, M и NS или их часть вируса гриппа.
11. Клетка-хозяин, содержащая по меньшей мере один линейный экспрессирующий конструкт по любому из пп.1-8.
12. Способ получения линейного экспрессирующего конструкта по любому из пп.1-8, в котором
первый фрагмент ДНК, содержащий вирусный сегмент, вставленный между последовательностью, гомологичной polI-промотору, и последовательностью, гомологичной polI-терминатору,
второй фрагмент ДНК, содержащий в следующем порядке защитную последовательность, последовательность сигнала полиаденилирования, последовательность polI-промотора и перекрывающуюся последовательность по меньшей мере из 12 нуклеотидов, комплементарных вирусному сегменту, и
третий фрагмент ДНК, содержащий в следующем порядке защитную последовательность, CMV-промотор, последовательность polI-терминатора и перекрывающуюся последовательность по меньшей мере из 12 нуклеотидов, комплементарных вирусной последовательности,
сшиты вместе с помощью перекрывающейся ПЦР и очищены.
13. Способ получения содержащего РНК с негативной цепью вириона, включающий культивирование клетки-хозяина из п.11 в условиях, которые позволяют получение вирусных белков, вирусной РНК или кРНК.
14. Способ для генерации частиц вируса гриппа, в котором по меньшей мере один линейный экспрессирующий конструкт трансфицируется напрямую в животные клетки-хозяева и в котором вышеупомянутые клетки-хозяева культивируются в условиях, в которых экспрессируется вирус гриппа, а вирусные частицы собираются и очищаются.
15. Способ по любому из пп.12 или 13, содержащий по меньшей мере два этапа очистки.
16. Способ по любому из пп.12-14, в котором вышеупомянутые вирусные частицы смешиваются, при необходимости, после аттенуирования или инактивации с фармацевтически приемлемым носителем, с получением фармацевтической композиции.
17. Применение вирусных частиц, полученных с помощью экспрессирующего конструкта по любому из пп.1-8, для производства лекарственного средства для терапевтического или профилактического лечения инфекционных заболеваний.
18. Способ вакцинирования пациентов против инфекции РНК-содержащими вирусами с негативной цепью, включающий введение пациенту интраназально или парентерально защитной дозировки фармацевтической композиции, содержащей частицы вируса гриппа, полученные способом по п.14.
| 
