(57) 1. Липид, экстрагированный из семени сафлора, при этом липид включает триацилглицерины (TAG), которые состоят из жирных кислот, этерифицированных до глицерина, причем:
i) жирные кислоты включают пальмитиновую кислоту и олеиновую кислоту;
ii) по крайней мере 95% в весовом отношении липида составляет TAG;
iii) 90-95% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет олеиновая кислота;
iv) менее чем 3,1% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет пальмитиновая кислота;
v) липид характеризуется долей десатурации олеиновой кислоты (ODP), составляющей менее чем 0,037, и/или значением отношения пальмитиновая кислота + линолевая кислота/олеиновая кислота (PLO), составляющим менее чем 0,063.
2. Липид по п.1, который имеет одно или более или все из следующих свойств:
a) 0,1-3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляют полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA);
b) менее чем 0,5% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет a-линоленовая кислота (ALA);
c) значение ODP липида составляет от 0,01 до 0,033;
d) значение PLO липида составляет от 0,020 до 0,063;
e) липид находится в форме очищенного масла и
f) липид является негидрогенизированным.
3. Липид по п.2, где PUFA представляет собой линолевую кислоту.
4. Липид по любому из пп.2 или 3, причем 90-96% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляют мононенасыщенные жирные кислоты.
5. Липид по любому из пп.1-4, причем 55-80% от содержания TAG в липиде составляет триолеин.
6. Липид по любому из пп.1-5, причем менее чем 5% от содержания олеиновой кислоты в липиде находится в форме диацилглицеринов (DAG).
7. Липид по любому из пп.1-6, где менее чем 3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет пальмитиновая кислота.
8. Липид по п.7, где менее чем 2,75% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет пальмитиновая кислота.
9. Липид по п.8, где менее чем 2,5% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет пальмитиновая кислота.
10. Липид по любому из пп.1-9, где менее чем 3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет линолевая кислота.
11. Липид по п.10, где менее чем 2,5% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет линолевая кислота.
12. Липид по п.10, где менее чем 2,25% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет линолевая кислота.
13. Липид по любому из пп.1-12, который дополнительно включает один или более стеролов.
14. Липид по п.13, который находится в форме масла и который включает менее чем 5 мг стеролов/г масла.
15. Липид по п.14, в котором:
a) 1,5-4,5% от общего содержания стеролов составляет эргост-7-ен-3b-ол; и/или
b) 0,5-3% от общего содержания стеролов составляет тритерпеновый спирт; и/или
c) 8,9-20% от общего содержания стеролов составляет D7-стигмастерол/стигмаст-7-ен-3b-ол; и/или
d) 1,7-6,1% от общего содержания стеролов составляет D7-авенастерол.
16. Способ получения масла, включающий получение семени сафлора, которое включает масло, и экстрагирование масла из семени сафлора, причем масло содержит липид по п.1.
17. Способ по п.16, причем семя сафлора включает первый экзогенный полинуклеотид, который кодирует первую вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна уменьшить экспрессию гена D12-десатуразы (FAD2) в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, причем этот полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
18. Способ по любому из пп.16 или 17, причем семя сафлора включает второй экзогенный полинуклеотид, который кодирует вторую вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна уменьшить экспрессию гена пальмитоил-АСР-тиоэстеразы (FATB) в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, причем этот полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
19. Способ по любому из пп.16-18, причем семя сафлора включает третий экзогенный полинуклеотид, который кодирует третью вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна уменьшить экспрессию гена пластидной десатуразы w6 жирных кислот (FAD6) в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, причем этот экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
20. Способ по любому из пп.17-19, где ген FAD2 выбирают из гена CtFAD2-1, гена CtFAD2-2 и гена CtFAD2-10.
21. Способ по п.20, где ген CtFAD2-1 кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 27.
22. Способ по п.20, где ген CtFAD2-2 кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 28.
23. Способ по п.20, где ген CtFAD2-10 кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 36.
24. Способ по п.18, где геном FATB является ген CtFATB-3.
25. Способ по п.24, где ген CtFATB-3 кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 45.
26. Способ по п.19, где ген FAD6 кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 48.
27. Способ по любому из пп.16-26, причем масло содержит липид, который имеет один или более или все из следующих признаков:
a) менее чем 3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляет пальмитиновая кислота;
b) 0,1-3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляют полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA);
c) менее чем 3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляет линолевая кислота (LA);
d) менее чем 0,5% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет a-линоленовая кислота (ALA);
e) 90-96% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляют мононенасыщенные жирные кислоты;
f) значение ODP для липида составляет от 0,01 до 0,033;
g) значение PLO для липида составляет от 0,020 до 0,26.
28. Способ по п.27, причем PUFA является линолевая кислота.
29. Способ по любому из п.27 или 28, причем a-линоленовая кислота не обнаруживается в составе жирной кислоты в липиде.
30. Способ по любому из пп.16-29, причем 55-80% от содержания TAG в липиде составляет триолеин.
31. Способ по любому из пп.16-30, причем менее чем 5% от содержания олеиновой кислоты в липиде находится в форме диацилглицеринов (DAG).
32. Способ по любому из пп.16-31, где липид дополнительно включает один или более стеролов.
33. Способ по п.32, где липид включает менее чем 5 мг стеролов/г липида.
34. Способ по п.33, где:
a) 1,5-4,5% от общего содержания стеролов составляет эргост-7-ен-3b-ол; и/или
b) 0,5-3% от общего содержания стеролов составляет тритерпеновый спирт; и/или
c) 8,9-20% от общего содержания стеролов составляет D7-стигмастерол/стигмаст-7-ен-3b-ол; и/или
d) 1,7-6,1% от общего содержания стеролов составляет D7-авенастерол.
35. Способ по любому из пп.16-34, причем стадия экстракции масла включает отжим семени сафлора.
36. Способ по любому из пп.16-35, который дополнительно включает стадию очистки масла, экстрагированного из семени сафлора, которая включает по меньшей мере одно или более из следующего: рафинирование гидратацией, дезодорация, обесцвечивание, сушка и/или фракционирование экстрагированного масла и/или удаление некоторых восков и/или восковых эфиров из экстрагированного масла.
37. Способ по любому из пп.16-36, где менее чем 2,75% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет пальмитиновая кислота.
38. Способ по п.37, где менее чем 2,5% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет пальмитиновая кислота.
39. Способ по любому из пп.16-38, где менее чем 2,5% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет линолевая кислота.
40. Способ по п.39, где менее чем 2,25% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляет линолевая кислота.
41. Семя сафлора, содержащее масло, которое содержит липид по п.1, причем семя сафлора включает первый экзогенный полинуклеотид, который кодирует первую вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна уменьшить экспрессию гена D12-десатуразы (FAD2) в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, причем указанный полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
42. Семя сафлора по п.41, содержащее масло, содержащее один или более из следующих признаков:
a) менее чем 3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляет пальмитиновая кислота;
b) 0,1-3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляют полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA);
c) менее чем 3% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот липида составляет линолевая кислота (LA);
d) 90-96% в весовом отношении от общего содержания жирных кислот в липиде составляют мононенасыщенные жирные кислоты;
e) значение ODP для липида составляет от 0,01 до 0,033;
f) значение PLO для состава масла семени составляет от 0,020 до 0,063.
43. Семя сафлора по любому из пп.41, 42, причем липид имеет один или более из признаков, описанных в пп.3-14.
44. Семя сафлора по любому из пп.41-43, которое дополнительно включает второй экзогенный полинуклеотид, который кодирует вторую вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна уменьшить экспрессию гена пальмитоил-АСР-тиоэстеразы (FATB) в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, причем этот экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
45. Семя сафлора по любому из пп.41-44, которое дополнительно включает третий экзогенный полинуклеотид, который кодирует третью вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна уменьшить экспрессию гена пластидной десатуразы w6 жирных кислот (FAD6) в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, причем этот экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
46. Семя сафлора по любому из пп.41-45, причем первая вызывающая генный сайленсинг РНК молекула уменьшает экспрессию более чем одного эндогенного гена, кодирующего FAD2, в развивающемся семени сафлора, и/или причем вторая вызывающая генный сайленсинг РНК молекула уменьшает экспрессию более чем одного эндогенного гена, кодирующего FATB, в развивающемся семени сафлора.
47. Семя сафлора по любому из пп.44-46, причем первый экзогенный полинуклеотид, второй экзогенный полинуклеотид и третий экзогенный полинуклеотид ковалентно соединены в одной молекуле ДНК.
48. Семя сафлора по п.47, причем первый экзогенный полинуклеотид, второй экзогенный полинуклеотид и третий экзогенный полинуклеотид находятся под контролем одного промотора, так что, когда первый экзогенный полинуклеотид и второй экзогенный полинуклеотид и/или третий экзогенный полинуклеотид транскрибируются в развивающемся семени сафлора, первая вызывающая генный сайленсинг РНК молекула и вторая вызывающая генный сайленсинг РНК молекула и/или третья вызывающая генный сайленсинг РНК молекула ковалентно связаны в виде частей одного РНК-транскрипта.
49. Семя сафлора по любому из пп.41-48, где геном включает одну транспортную ДНК (Т-ДНК), введенную из клеток Agrobacterium sp., содержащих первый экзогенный полинуклеотид и один из двух или оба из второго экзогенного полинуклеотида и третьего экзогенного полинуклеотида.
50. Семя сафлора по п.49, которое является гомозиготным по указанной транспортной ДНК.
51. Семя сафлора по любому из пп.41-50, причем каждую из первой вызывающей генный сайленсинг РНК молекулы, второй вызывающей генный сайленсинг РНК молекулы и третьей вызывающей генный сайленсинг РНК молекулы независимо выбирают из антисмыслового полинуклеотида, смыслового полинуклеотида, микроРНК и двухцепочечной РНК.
52. Семя сафлора по любому из пп.41-51, причем любой один или более из указанных промоторов являются специфическими для семени.
53. Семя сафлора по любому из пп.41-52, которое имеет одну или более мутаций в одном или более генах FAD2, выбранного из CtFAD2-1 гена, CtFAD2-2 гена и CtFAD2-10 гена, причем мутации уменьшают активность одного или более генов FAD2 в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, в котором отсутствуют мутации.
54. Семя сафлора по п.53, где указанная мутация представляет собой делецию, вставку, инверсию, сдвиг рамки считывания, стоп-кодон преждевременной трансляции или одну или более неконсервативных аминокислотных замен.
55. Семя сафлора по п.53 или 54, причем указанной мутацией является нуль-мутация в гене FAD2.
56. Семя сафлора по любому из пп.53-55, причем по крайней мере одна из мутаций находится в гене CtFAD2-1.
57. Семя сафлора по любому из пп.53-56, где CtFAD2-1 ген включает ol или ol1 ген или оба аллеля.
58. Семя сафлора по п.57, причем аллель ol или аллель ol1 находится в гомозиготном состоянии.
59. Семя сафлора по любому из пп.41-58, причем первая вызывающая генный сайленсинг РНК молекула уменьшает экспрессию обоих генов CtFAD2-1 и CtFAD2-2.
60. Семя сафлора по любому из пп.44-59, причем геном FATB является ген CtFATB-3.
61. Семя сафлора по любому из пп.45-60, причем геном FAD6 является ген CtFAD6.
62. Растение сафлора, способное образовывать семя по любому из пп.41-61.
63. Растение по п.62, которое является трансгенным и гомозиготным по каждому экзогенному полинуклеотиду и/или включает первый экзогенный полинуклеотид и один из двух или оба из второго экзогенного полинуклеотида или третьего экзогенного полинуклеотида.
64. Способ создания трансгенного растения сафлора, образующего семя, содержащее масло, содержащее липид по п.1, где способ включает:
i) введение в клетку растения сафлора по крайней мере одного полинуклеотида, имеющего последовательность, которая при экспрессии в развивающем семени сафлора:
1) снижает экспрессию эндогенного гена, кодирующего олеат-D12 десатуразу (FAD2), в развивающемся семени сафлора, причем FAD2 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 27, 28 или 36,
2) снижает экспрессию эндогенного гена, кодирующего пальмитоил-АСР-тиоэстеразу (FATB), в развивающемся семени сафлора, причем FATB имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 45, и/или
3) снижает экспрессию гена, кодирующего десатуразу w6 жирных кислот (FAD6), в развивающемся семени сафлора, причем FAD6 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, и/или по крайней мере одного химерного вектора, содержащего указанный полинуклеотид, функционально связанный с промотором; и
ii) регенерацию трансгенного растения из клетки.
65. Способ по п.64, который дополнительно включает получение одного или более растений-потомков трансгенного растения или его семени.
66. Способ по п.65, причем одно или более растений-потомков или его семя включает:
i) первый экзогенный полинуклеотид, который кодирует первую вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна снижать экспрессию гена FAD2 в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, у которого отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, где этот полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора; и/или
ii) второй экзогенный полинуклеотид, который кодирует вторую вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна снижать экспрессию гена FATB в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, у которого отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, где этот экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора; и/или
iii) третий экзогенный полинуклеотид, который кодирует третью вызывающую генный сайленсинг РНК молекулу, которая способна снижать экспрессию гена FAD6 в развивающемся семени сафлора по сравнению с соответствующим семенем сафлора, у которого отсутствует указанный экзогенный полинуклеотид, где этот экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, который управляет его экспрессией в развивающемся семени сафлора.
67. Растение сафлора, полученное способом по любому из пп.64-66, где растение содержит липид по п.1.
68. Потомство растения сафлора по п.67, содержащее указанный липид.
69. Семя растения сафлора по п.67 или потомства по п.68, содержащее указанный липид.
70. Способ получения семени растения сафлора, где семя содержит масло, которое содержит липид по п.1, где способ включает выращивание растения сафлора по п.67 и сбор урожая семян.
71. Масло, полученное способом по любому из пп.16-40.
72. Способ производства топлива, включающий осуществление реакции одного или более из липида по любому из пп.1-15 со спиртом для образования алкиловых эфиров.
73. Способ по п.72, где реакцию липида со спиртом осуществляют в присутствии катализатора.
74. Способ по п.72 или 73, где способ дополнительно включает смешивание алкиловых эфиров с топливом на нефтяной основе.
75. Способ по любому из пп.72-74, причем алкиловыми эфирами являются метиловые эфиры.
76. Способ производства пищевого продукта, включающий смешивание липида по любому из пп.1-15, семени сафлора по любому из пп.41-61 или 69, растения по любому из пп.62, 63, 67, или потомства по п.68, или масла по п.71, или их комбинаций по крайней мере с одним другим пищевым ингредиентом.
77. Пищевой продукт, включающий липид по любому из пунктов 1-15, семя сафлора по любому из пп.41-61 или 69, растение по любому из пп.62, 63, 67, или потомство по п.68, или масло по п.71, или их комбинации.

---