(57) Настоящее изобретение относится к композициям и способам, включающим усовершенствование системы CRISPR (например, CRISPR-ассоциированная (Cas) 9 (системы CRISPR-Cas9, не Cas9 CRISPR)). Такие композиции могут содержать модификации промоторной области H1, добавление модификаций 5'UTR, различные ортологичные последовательности промотора H1, новые компактные последовательности двунаправленного промотора с активностью в отношении как pol II, так и pol III, вставку консенсусных последовательностей Козак, последовательностей терминации, вставку двунаправленного промотора pol II/pol III с зависимой от условий экспрессией, вставку донорной матричной последовательности для коррекции мутаций или их комбинации. Другие аспекты изобретения относятся к модификациям Cas9 посредством слитых конструкций для посттрансляционной регуляции клеточного цикла, сконструированных частичных участков-мишеней, чтобы нуклеаза могла связываться без расщепления, участков ауторегуляции и N-концевых модификаций для модулирования времени полужизни.