(11)	020189 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201001228
(22)	2009.02.05
(51)	C07K 14/47 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) A61K 38/17 (2006.01) G06F 17/50 (2006.01)
(31)	08/00605
(32)	2008.02.05
(33)	FR
(43)	2011.04.29
(86)	PCT/FR2009/000127
(87)	WO 2009/115664 2009.09.24
(71)	(73) ЛЕ ЛАБОРАТУАР СЕРВЬЕ; ИНСТИТУТ ПАСТЕРА (FR)
(72)	Агу Фабрис, Шиаравалли Жанне, Дюкеррой Стефан, Фонтан Элизабет, Грюбиса Оливера, Каминска Моника-Дорота, Верон Мишель, Кордье Флоренс (FR)
(74)	Веселицкая И.А., Пивницкая Н.Н., Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б., Каксис Р.А., Комарова О.М., Белоусов Ю.В. (RU)
(54)	КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА СС2-LZ ДОМЕНА NEMO

(57) 1. Кристалл CC2-LZ домена NEMO млекопитающих, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO.3 CC2-LZ домена или варианта указанной аминокислотной последовательности, отличающийся тем, что кристалл имеет следующие параметры элементарной ячейки:

и тем, что кристалл имеет пространственную группу P4₃2₁2.

2. Кристалл CC2-LZ домена NEMO млекопитающих, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO.4 CC2-LZ домена или варианта указанной аминокислотной последовательности, отличающийся тем, что кристалл имеет следующие параметры элементарной ячейки:

и тем, что кристалл имеет пространственную группу P4₃2₁2.

3. Кристалл по п.1 или 2, отличающийся тем, что он имеет кристаллографические координаты, описанные в табл. 1.

4. Кристалл по п.1 или 2, отличающийся тем, что он включает CC2-LZ домен NEMO млекопитающих и по крайней мере один анкирин или его фрагмент, способный стабилизировать комплекс.

5. Кристалл по п.4, отличающийся тем, что он включает анкирин 1D5.

6. Кристалл по любому из пп.1-5, характеризующийся пространственной структурой, определённой при помощи дифракции рентгеновских лучей, причем указанная пространственная структура представлена на фиг. 2 и 3.

7. Кристалл по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что CC2-LZ белок включает мутацию Val316Pro (V316P) и/или мутацию Phe305Ala (F305A).

8. Кристалл по любому из пп.2-6, отличающийся тем, что CC2-LZ белок включает мутацию Ala323Pro (A323P) и/или мутацию Phe312Ala (F312A).

9. Способ кристаллизации CC2-LZ домена NEMO млекопитающего, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:

инкубацию по крайней мере одного анкирина или анкиринового фрагмента и CC2-LZ домена;

сокристаллизацию комплекса анкирин или анкириновый фрагмент/СС2-LZ белок путем выращивания кристаллов с помощью диффузии паров.

10. Кристалл, полученный с помощью способа по п.9.

11. Способ определения пространственной структуры кристалла CC2-LZ домена NEMO по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:

получение кристалла или сокристалла CC2-LZ белка;

воздействие на кристалл рентгеновскими лучами;

сбор данных дифракции рентгеновских лучей;

использование этих данных для подсчета карты электронной плотности указанного кристалла;

построение и уточнение модели исходя из карты электронной плотности.

12. Пептид РН4, идентифицированный с помощью способа идентификации соединений, способных связывать CC2-LZ домена NEMO, с использованием кристаллографических координат кристалла по пп.1-5, характеризующийся аминокислотной последовательностью SEQ ID NO.6.

13. Пептид P8RD, идентифицированный с помощью способа идентификации соединений, способных связывать CC2-LZ домена NEMO, с использованием кристаллографических координат кристалла по пп.1-5, характеризующийся аминокислотной последовательностью SEQ ID NO.7.

14. Способ скрининга соединений по их способности быть вовлеченными в димеризацию NEMO или взаимодействие NEMO с цепями полиубиквитина между пептидом по любому из пп.12, 13 и CC2-LZ доменом NEMO, отличающийся тем, что он включает следующие этапы:

приведение указанного пептида и указанного CC2-LZ домена NEMO в контакт;

прибавление исследуемого соединения;

измерение флуоресцентной поляризации в присутствии исследуемого соединения;

осуществление указанного измерения при отсутствии исследуемого соединения.