(11)	017964 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	200971056
(22)	2008.05.21
(51)	C12N 5/07 (2010.01) C12N 5/10 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) A61K 39/395 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
(31)	07301058.9; 61/032,786
(32)	2007.05.21; 2008.02.29
(33)	EP; US
(43)	2010.06.30
(86)	PCT/EP2008/056285
(87)	WO 2008/142124 2008.11.27
(71)	(73) ВИВАЛИС (FR)
(72)	Метали Мажид (FR)
(74)	Липатова И.И., Рыбаков В.М., Новоселова С.В., Дощечкина В.В., Хмара М.В. (RU)
(54)	СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ АНТИТЕЛ ИЛИ ГИБРИДНЫХ БЕЛКОВ В КЛЕТКАХ ПТИЦ И ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ АНТИТЕЛ И БЕЛКОВ

(57) 1. Способ продуцирования в клетках птиц по меньшей мере одной молекулы антитела, фрагмента антитела или гибридного белка, включающего область, эквивалентную Fc-области иммуноглобулина, причем эта молекула антитела, фрагмент антитела или гибридный белок обладают повышенной Fc опосредованной клеточной токсичностью, где указанный способ включает стадии:

а) получение указанных клеток птиц путем трансфекции по меньшей мере одним экспрессионным вектором, экспрессирующим указанную молекулу антитела, фрагмент антитела или гибридный белок;

б) культивирование указанной клетки в пригодных условиях и в пригодной среде;

в) сбор указанной молекулы антитела, фрагмента антитела или гибридного белка из этой клетки птиц и из этой пригодной среды или как из указанной клетки птиц, так и из указанной среды,

где указанные клетки птиц происходят из стабильных, прикрепленных или суспензионных, непрерывных клеточных линий, которые были получены путем культивирования in vitro и экспансии эмбриональных стволовых клеток птиц с последующим прогрессивным исключением сыворотки, фидерных клеток и ростовых факторов из клеточной культуральной среды и адаптации клеток к суспензионной культуре.

2. Способ по п.1, где экспрессионный вектор дополнительно включает по меньшей мере одну экспрессионную кассету, содержащую, по меньшей мере, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую селективный маркер, оперативно сцепленную с промоторной последовательностью, способной к осуществлению экспрессии указанного селективного маркера в клетке-хозяине.

3. Способ по п.2, где селективный маркер выбран из гена глутаминсинтазы, ксантингуа­нинфосфорибозилтрансферазы, пуромицина, гигромицина В, неомицина и дигидрофолатредуктазы (DHFR).

4. Способ по любому из пп.1-3, где промоторная последовательность выбрана из промотора цитомегаловируса (CMV), раннего промотора обезьяньего вируса 40 (SV40), промотора тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV), промотора вируса саркомы Рауса (RSV), промотора мышиной фосфоглицераткиназы, промотора elF4альфа, химерного промотора EF1альфа/HTLV, промотора CAG, промотора бета-актина.

5. Способ по любому из пп.1-4, где указанная экспрессионная кассета(ы) дополнительно включает один или более регуляторный элемент или регуляторные последовательности, выбранные из группы, состоящей из последовательности инициации транскрипции, энхансерной последовательности, интронной последовательности, последовательности полиаденилирования, последовательности терминации, хроматинового изолирующего элемента.

6. Способ по п.5, где хроматиновый изолирующий элемент выбран из элементов границы (BE), участка присоединения к матриксу (MAR), участка локусного контроля (LCR), универсальных элементов, открывающих хроматин (UCOE).

7. Способ по любому из пп.1-6, где клетка дополнительно содержит экспрессионный вектор, включающий, по меньшей мере, экспрессионную кассету, содержащую последовательность ДНК, кодирующую антиапоптический белок, оперативно сцепленную с промоторной последовательностью, способной к осуществлению экспрессии указанного антиапоптического белка в клетке.

8. Способ по любому из пп.1-7, где экспрессионный вектор(ы) стабильно включен в хромосомную ДНК клетки.

9. Способ по любому из пп.1-8, где клетки птиц представляют собой куриные или утиные клетки.

10. Способ по любому из пп.1-9, где клетки птиц представляют собой суспензионные клетки, адаптированные к среде, свободной от сыворотки.

11. Способ по любому из пп.1-9, где клетки птиц представляют собой прикрепленные клетки, адаптированные к среде, свободной от сыворотки.

12. Способ по любому из пп.1-11, где клетки птиц трансфицируют путем электропорации по меньшей мере одним экспрессионным вектором в прикрепленной культуре в среде, свободной от сыворотки.

13. Способ по любому из пп.1-11, где клетки птиц трансфицируют путем трансфекции, опосредованной липосомами, по меньшей мере одним экспрессионным вектором в суспензионной культуре в среде, свободной от сыворотки.

14. Применение молекулы антитела, фрагмента антитела или гибридного белка, полученного согласно способу по любому из пп.1-13, для изготовления фармацевтической композиции для предупреждения или лечения заболеваний человека и животного.

15. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела, фрагмент антитела или гибридный белок, полученные согласно способу по любому из пп.1-13, и фармацевтически приемлемый носитель.