(11)	017380 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	200971114
(22)	2008.06.06
(51)	G01N 33/80 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/537 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)
(31)	0755624; 60/929,052
(32)	2007.06.08; 2007.06.11
(33)	FR; US
(43)	2010.06.30
(86)	PCT/EP2008/057128
(87)	WO 2008/148890 2008.12.11
(71)	(73) БИО-РАД ЭННОВАСЬОН (FR)
(72)	Бюффьер Фредерик, Рэзэн Ив, Ривалэн Эльян, Санхуан Ампаро (FR)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ, РАСПОЛОЖЕННЫХ НА ЭРИТРОЦИТАХ, И АНТИЭРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИТЕЛ

(57) 1. Способ in vitro для идентификации множества антигенных молекул, расположенных на эритроцитах индивидуума, и/или для идентификации множества антител против антигенных молекул, расположенных на эритроцитах, в биологическом образце,

указанные антигенные молекулы, расположенные на эритроцитах, состоящие из антигенных молекул, расположенных как на эритроцитах, так и по меньшей мере на одной другой клеточной популяции, отличаются от молекул групп крови,

причем указанный способ включает:

(а) идентификацию множества антигенных молекул, расположенных на эритроцитах индивидуума, путем

(i) приведения указанного образца, содержащего эритроциты, в контакт в единственной емкости для проведения теста или в нескольких отдельных емкостях для проведения теста с группами различимых бус, причем каждая группа различимых бус несет данное антитело, специфичное для антигенной молекулы, расположенной на эритроцитах, при этом группы бус отличаются друг от друга, при условиях, позволяющих эритроцитам связываться с антителами без агглютинации, причем указанные эритроциты метят до или после приведения их в контакт с указанными группами бус,

(ii) удаления эритроцитов, которые не связались с указанными антителами, и

(iii) идентификации группы бус, связавшихся с мечеными эритроцитами, таким образом, идентифицируя антигены, расположенные на обнаруживаемых эритроцитах;

и/или

b) идентификацию множества антител против антигенных молекул, расположенных на эритроцитах, в биологическом образце путем

(iv) приведения указанного образца в контакт в единственной емкости для проведения теста или в нескольких отдельных емкостях для проведения теста с группами различимых бус, причем каждая группа различимых бус несет (1) эритроциты или (2) фрагменты мембраны эритроцитов известного фенотипа, который отличается у каждой группы бус, при условиях, в которых антитела или активированные фракции комплемента сыворотки, присутствующие в образце, связываются с эритроцитами или фрагментами мембраны эритроцитов без агглютинации,

(v) удаления антител или активированных фракций комплемента сыворотки, которые не связались с указанными эритроцитами или указанными фрагментами мембраны эритроцитов,

(vi) мечения связавшихся антител и/или связавшихся активированных фракций комплемента сыворотки и

(vii) идентификации группы бус, связавшихся с мечеными антителами или мечеными активированными фракциями комплемента сыворотки, таким образом, идентифицируя антитела против антигенных молекул, расположенных на эритроцитах, которые присутствуют.

2. Способ по п.1, в котором идентификацию антигенов по пункту (а) и идентификацию антител по пункту (b) осуществляют одновременно в одной и той же емкости.

3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором анализ смеси осуществляют с помощью проточной цитометрии.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, который дополнительно содержит стадию химического или ферментативного разрушения гемоглобина, такого как гемолиз.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором различимые бусы представляют собой сверхпарамагнитные, или магнитные, или намагничивающиеся бусы.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором различимые бусы испускают люминесцентные или флуоресцентные сигналы.

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором эритроциты, меченные детектируемым образом, метят флуоресцирующим соединением.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитела (по пункту b) метят путем приведения в контакт с антителом против глобулина человека, несущим флуоресцентную, люминесцентную или радиоактивную метку.

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором активированные фракции комплемента сыворотки метят путем приведения в контакт с антителом против фракции комплемента сыворотки, несущим флуоресцентную, люминесцентную или радиоактивную метку.

10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором биологический образец выбран из группы, состоящей из цельной крови, плазмы, сыворотки, осадка клеток крови или любого другого препарата крови.

11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором биологический образец получают у индивидуума, эритроциты которого либо сенсибилизированы in vivo антителами, либо покрыты фракцией комплемента сыворотки.

12. Способ по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающий количественную оценку идентифицируемых антител.

13. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антигенные молекулы представляют собой молекулы системы HLA, химические продукты или лекарственные препараты, абсорбируемые индивидуумом, или продукты их деградации.

14. Набор реагентов для осуществления способа обнаружения по любому из предшествующих пунктов, содержащий группы различимых бус, каждая из которых имеет по меньшей мере один определенный физический параметр, который может быть обнаружен и относится по меньшей мере к двум различным группам, одна из которых содержит иммобилизованное антитело, специфичное для антигенной молекулы, расположенной на эритроцитах, а другая группа несет (1) эритроциты или (2) фрагмент мембраны эритроцитов.