Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 046005

Библиографические данные
(11)046005 (13) B1
(21)202292161

[ A ] [ B ] [ C ] [ D ] [ E ] [ F ] [ G ] [ H ]

Текущий раздел:


Документ опубликован 2024.01.31
Текущий бюллетень: 2024-01
Все публикации: 046005
Реестр евразийского патента: 046005

(22)2021.01.22
(51) C12N 15/70 (2006.01)
C12P 19/00 (2006.01)
C07H 3/06(2006.01)
(43)A1 2022.10.06 Бюллетень № 10 тит.лист, описание последовательности
(45)B1 2024.01.31 Бюллетень № 01 тит.лист, описание последовательности
(31)PA202000087
(32)2020.01.23
(33)DK
(86)EP2021/051479
(87)2021/148620 2021.07.29
(71)ГЛЮКОМ А/С (DK)
(72)Педерсен Маргит, Д'Арриго Изотта, Кампманн Катрине Бых, Пападакис Манос (DK)
(73)ГЛЮКОМ А/С (DK)
(74)Фелицына С.Б. (RU)
(54)НОВЫЙ БЕЛОК СУПЕРСЕМЕЙСТВА ОСНОВНЫХ ПЕРЕНОСЧИКОВ (MFS) (Fred) В ПРОИЗВОДСТВЕ ОГМ
Формула
(57) 1. Генетически модифицированная клетка, способная продуцировать один или несколько олигосахаридов грудного молока (ОГМ), где указанная генетически модифицированная клетка включает последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид суперсемейства основных переносчиков (MFS), показанный в SEQ ID NO: 1, или его функциональный гомолог, аминокислотная последовательность которого более чем на 97% идентична SEQ ID NO: 1.
2. Генетически модифицированная клетка по п.1, где регуляторный элемент регулирует экспрессию полипептида MFS, показанного в SEQ ID NO: 1, или его функционального гомолога, аминокислотная последовательность которого более чем на 97% идентична SEQ ID NO: 1.
3. Генетически модифицированная клетка по п.2, где регуляторный элемент выбран из группы, состоящей из PglpF, PglpF_SD4 и PglpF_SD7.
4. Генетически модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, где указанная генетически модифицированная клетка дополнительно содержит по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая кодирует функциональный фермент с активностью гликозилтрансферазы, выбранный из группы, состоящей из a-1,2-фукозилтрансферазы, a-1,3-фукозилтрансферазы, a-1,3/4-фукозилтрансферазы, a-1,4-фукозилтрансферазы, a-2,3-сиалилтрансферазы, a-2,6-сиалилтранс­феразы, b-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, b-1,6-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы, b-1,3-галактозилтрансферазы и b-1,4-галактозилтрансферазы.
5. Генетически модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, где генетически модифицированная клетка представляет собой Escherichia coli.
6. Генетически модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, где олигосахарид грудного молока выбирают из группы, состоящей из 2'-фукозиллактозы (2'-FL), 3-фукозиллактозы (3-FL), дифукозиллактозы (DFL) и лакто-N-тетраоза (LNT).
7. Генетически модифицированная клетка по любому из предшествующих пунктов, где клетка содержит активный фермент a-1,3-фукозилтрансферазу и продуцирует 3'FL, предпочтительно фермент a-1,3-фукозилтрансфераза представляет собой FutA.
8. Генетически модифицированная клетка по пп.1-6, где клетка содержит b-1,3-N-ацетилглю­козаминилтрансферазу и b-1,3-галактозилтрансферазу и продуцирует LNT, предпочтительно фермент b-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза представляет собой lgtA, а фермент b-1,3-галактозил­трансфераза представляет собой galTK.
9. Генетически модифицированная клетка по пп.1-6, где клетка содержит активный фермент a-1,2-фукозилтрансферазу и продуцирует 2'FL и необязательно побочный продукт DFL, предпочтительно a-1,2-фукозилтрансферазу FutC.
10. Конструкция нуклеиновой кислоты, включающая регуляторный элемент, регулирующий экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид MFS в соответствии с SEQ ID NO: 1, или его функциональный гомолог, имеющий более чем 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 1, в котором последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид MFS, имеет по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 2.
11. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.10, где регуляторный элемент выбирают из группы, состоящей из PglpF, PglpF_SD4 и PglpF_SD7.
12. Способ биосинтетического производства одного или нескольких олигосахаридов грудного молока (ОГМ), включающий стадии:
(i) обеспечение генетически модифицированной клетки по любому из пп.1-9;
(ii) культивирование генетически модифицированной клетки в соответствии с (i) в подходящей среде для культивирования клеток для экспрессии указанного полипептида, способного к транспортировке выходящего сахара и продуцированию одного или нескольких олигосахаридов грудного молока (ОГМ);
(iii) сбор одного или нескольких ОГМ, полученных на стадии (ii).
13. Применение генетически модифицированной клетки по любому из пп.1-9 или конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп.10, 11 для биосинтетического производства одного или нескольких олигосахаридов грудного молока (ОГМ).
14. Применение по п.13 для биосинтетического производства конкретного ОГМ, выбранного из группы, состоящей из 2'-FL, 3-FL, DFL и LNT.
Zoom in

Загрузка данных...