(57) 1. Антитело, которое специфически связывает транстиретин, содержащее согласно нумерации по Кабату три CDR тяжелой цепи: CDR-H1 с последовательностью SEQ ID NO: 6, CDR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 7 и CDR-H3 с последовательностью SEQ ID NO: 8, и три CDR легкой цепи: CDR-L1 с последовательностью SEQ ID NO: 14, CDR-L2 с последовательностью SEQ ID NO: 15 и CDR-L3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.
2. Антитело, которое специфически связывает транстиретин, содержащее согласно нумерации по Кабату три CDR тяжелой цепи: CDR-H1 с последовательностью SEQ ID NO: 6, CDR-H2 с последовательностью SEQ ID NO: 7 и CDR-H3 с последовательностью SEQ ID NO: 8, и три CDR легкой цепи: CDR-L1 с последовательностью SEQ ID NO: 14, CDR-L2 с последовательностью SEQ ID NO: 16 и CDR-L3 с последовательностью SEQ ID NO: 17.
3. Антитело по п.1 или 2, отличающееся тем, что антитело содержит CDR-H1 по Кабату-Чотиа с последовательностью SEQ ID NO: 52.
4. Антитело по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что оно представляет собой моноклональное антитело.
5. Антитело по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что оно представляет собой мышиное, химерное, гуманизированное или венированное антитело.
6. Антитело по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что оно имеет изотип IgG1 человека.
7. Антитело по любому из пп.1-5, отличающееся тем, что оно имеет изотип IgG2 или IgG4 человека.
8. Антитело по пп.1, 2 или 3, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область гуманизированной зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 4 или 5, и вариабельную область гуманизированной зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 12 или 13.
9. Антитело по пп.1-3 или 8, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором по меньшей мере одна из следующих позиций занята указанной аминокислотой: в позиции Н29 находится F, в позиции Н93 находится V, в позиции L55 находится S, а в позиции L85 находится V, причем позиции пронумерованы по Кабату.
10. Антитело по любому из пп.1-3, 7-9, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором по меньшей мере две из следующих позиций заняты указанной аминокислотой: в позиции Н29 находится F, в позиции Н93 находится V, в позиции L55 находится S, а в позиции L85 находится V, причем позиции пронумерованы по Кабату.
11. Антитело по любому из пп.1-3, 8, 9, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором по меньшей мере три из следующих позиций заняты указанной аминокислотой: в позиции Н29 находится F, в позиции Н93 находится V, в позиции L55 находится S, а в позиции L85 находится V, причем позиции пронумерованы по Кабату.
12. Антитело по любому из пп.1-3, 8, 9, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором все следующие позиции заняты указанной аминокислотой: в позиции Н29 находится F, в позиции Н93 находится V, в позиции L55 находится S, а в позиции L85 находится V, причем позиции пронумерованы по Кабату.
13. Антитело по любому из пп.1-3, 8-12, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 4 или 5, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 12 или 13.
14. Антитело по любому из пп.1-3, 8-12, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную SEQ ID NO: 4 или 5, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную SEQ ID NO: 12 или 13.
15. Антитело по пп.1, 2 или 3, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи SEQ ID NO: 4 и вариабельную область зрелой легкой цепи SEQ ID NO: 12.
16. Антитело по пп.1, 2 или 3, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи SEQ ID NO: 4 и вариабельную область зрелой легкой цепи SEQ ID NO: 13.
17. Антитело по пп.1, 2 или 3, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи SEQ ID NO: 5 и вариабельную область зрелой легкой цепи SEQ ID NO: 12.
18. Антитело по пп.1, 2 или 3, которое представляет собой гуманизированное антитело и содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи SEQ ID NO: 5 и вариабельную область зрелой легкой цепи SEQ ID NO: 13.
19. Антиген-связывающий фрагмент антитела по любому из пп.1-18, который специфически связывает транстиретин.
20. Антиген-связывающий фрагмент антитела по п.19, который представляет собой Fab или Fab'₂-фрагмент.
21. Антиген-связывающий фрагмент антитела по п.19, который представляет собой одноцепочечное антитело.
22. Антитело по любому из пп.1-3, 7-18, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, а вариабельная область зрелой тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи.
23. Антитело по п.22, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором константная область тяжелой цепи содержит мутацию в одной или нескольких позициях 234, 235, 236 и 237 по нумерации EC.
24. Антитело по п.22 или 23, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором константная область тяжелой цепи является таковой изотипа IgG1.
25. Антитело по п.24, которое представляет собой гуманизированное антитело, в котором вариабельная область зрелой тяжелой цепи слита с константной областью тяжелой цепи, имеющей последовательность SEQ ID NO: 23 с С-концевым лизином или без него, и/или вариабельная область зрелой легкой цепи слита с константной областью легкой цепи, имеющей последовательность SEQ ID NO: 25.
26. Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь и легкую цепь антитела, как описано в любом из пп.1-18 и 22-25, или антиген-связывающего фрагмента, как описано в любом из пп.19-21.
27. Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.26.
28. Клетка-хозяин, трансформированная рекомбинантным вектором экспрессии по п.27.
29. Способ гуманизации мышиного антитела по п.5, включающий:
а) выбор акцепторного антитела;
б) идентификацию аминокислотных остатков каркаса мышиного антитела по п.5, подлежащих сохранению;
в) синтез нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную тяжелую цепь, содержащую CDR тяжелой цепи антитела мыши, и нуклеиновой кислоты, кодирующей гуманизированную легкую цепь, содержащую CDR легкой цепи антитела мыши; и
г) экспрессию нуклеиновых кислот в клетке-хозяине для продуцирования гуманизированного антитела,
причем антитело мыши содержит вариабельную область зрелой тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и вариабельную область зрелой легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.
30. Способ продуцирования гуманизированного, химерного или венированного антитела по п.5, включающий:
а) культивирование клеток, трансформированных нуклеиновыми кислотами, кодирующими тяжелую и легкую цепи антитела по п.5, так что клетки секретируют антитело; и
б) очистку антитела от клеточной культуральной среды.
31. Способ создания клеточной линии, продуцирующей гуманизированное, химерное или венированное антитело по п.5, включающий:
а) введение вектора, кодирующего тяжелую и легкую цепи указанного антитела по п.5 и маркер селекции в клетки;
б) размножение клеток в условиях, позволяющих отбирать клетки, имеющие увеличенное количество копий вектора;
в) выделение отдельных клеток из выбранных клеток; и
г) создание банка клеток, клонированных из одной клетки, выбранной на основе выхода антитела.
32. Способ по п.31, отличающийся тем, что он дополнительно включает размножение клеток в селективных условиях и скрининг для обнаружения линий клеток, естественно экспрессирующих и секретирующих антитело в количестве по меньшей мере 100 мг/л/10⁶ клеток/24 ч.
33. Способ ингибирования или снижения агрегации транстиретина у субъекта с транстиретин-опосредованным амилоидозом или риском его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21, что ингибирует или уменьшает агрегацию транстиретина у субъекта.
34. Способ ингибирования или уменьшения формирования фибрилл транстиретина у субъекта с транстиретин-опосредованным амилоидозом или риском его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21, что ингибирует или уменьшает накопление транстиретина у субъекта.
35. Способ уменьшения количества отложений транстиретина у субъекта с транстиретин-опосредованным амилоидозом или риском его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21, что уменьшает количество отложений транстиретина у субъекта.
36. Способ устранения агрегатов транстиретина у субъекта с транстиретин-опосредованным амилоидозом или риском его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21, что устраняет агрегаты транстиретина у субъекта по сравнению с субъектом, имеющим транстиретин-опосредованный амилоидоз или риск его развития, который не получал антитела или антиген-связывающего фрагмента.
37. Способ стабилизации нетоксичной формы транстиретина у субъекта с транстиретин-опосредованным амилоидозом или риском его развития, включающий введение субъекту антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21, что стабилизирует нетоксичную форму транстиретина у субъекта.
38. Способ диагностирования транстиретин-опосредованного амилоидоза у субъекта, включающий приведение в контакт биологического образца из субъекта с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21 и обнаружение связывания антитела или антиген-связывающего фрагмента с транстиретином, причем присутствие связанного антитела или антиген-связывающего фрагмента указывает на то, что субъект имеет транстиретин-опосредованный амилоидоз.
39. Способ по п.38, отличающийся тем, что он дополнительно включает сравнение связывания антитела или антиген-связывающего фрагмента с биологическим образцом со связыванием антитела или антиген-связывающего фрагмента с контрольным образцом, полученным от здорового субъекта, при этом повышенное связывание антитела или антиген-связывающего фрагмента с биологическим образцом относительно контрольного образца указывает на то, что субъект имеет транстиретин-опосредованный амилоидоз.
40. Способ по п.39, отличающийся тем, что биологический образец и контрольный образец содержат клетки, которые происходят из одной и той же ткани.
41. Способ по любому из пп.38-40, отличающийся тем, что биологический образец и/или контрольный образец представляют собой кровь, сыворотку, плазму или плотную ткань.
42. Способ по п.41, отличающийся тем, что плотная ткань представляет собой ткань из сердца, периферической нервной системы, вегетативной нервной системы, почек, глаз или желудочно-кишечного тракта.
43. Способ по любому из пп.34-42, отличающийся тем, что транстиретин-опосредованный амилоидоз представляет собой наследственный транстиретиновый амилоидоз или спорадический транстиретиновый амилоидоз.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что наследственный транстиретиновый амилоидоз представляет собой наследственную амилоидную кардиомиопатию (FAC), наследственную амилоидную полинейропатию (FAP) или селективный амилоидоз центральной нервной системы (CNSA).
45. Способ по п.43, отличающийся тем, что спорадический транстиретиновый амилоидоз представляет собой старческий системный амилоидоз (SSA) или старческий сердечный амилоидоз (SCA).
46. Способ по любому из пп.33-42, отличающийся тем, что транстиретин-опосредованный амилоидоз связан с накоплением амилоида в сердце, периферической нервной системе, вегетативной нервной системе, почках, глазах или желудочно-кишечном тракте субъекта.
47. Способ выявления присутствия или отсутствия отложений транстиретина у субъекта, включающий приведение в контакт биологического образца от субъекта, у которого подозревают наличие накопления амилоида, с помощью эффективного количества антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21 и обнаружение связывания антитела или антиген-связывающего фрагмента с транстиретином, причем обнаружение связанного антитела или антиген-связывающего фрагмента указывает на наличие отложений транстиретина.
48. Способ по п.47, отличающийся тем, что он дополнительно включает сравнение связывания антитела или антиген-связывающего фрагмента с биологическим образцом со связыванием антитела или антиген-связывающего фрагмента с контрольным образцом, полученным от здорового субъекта, при этом повышенное связывание антитела или антиген-связывающего фрагмента с биологическим образцом относительно контрольного образца указывает на то, что субъект имеет транстиретин-опосредованный амилоидоз.
49. Способ по п.48, отличающийся тем, что биологический образец и контрольный образец содержат клетки, которые происходят из одной и той же ткани.
50. Способ по любому из пп.46-49, отличающийся тем, что биологический образец и/или контрольный образец представляют собой кровь, сыворотку, плазму или плотную ткань.
51. Способ по п.50, отличающийся тем, что плотная ткань представляет собой ткань из сердца, периферической нервной системы, вегетативной нервной системы, почек, глаз или желудочно-кишечного тракта.
52. Способ определения количества отложений транстиретина у субъекта, включающий введение антитела по любому из пп.1-18 и 22-25 или антиген-связывающего фрагмента по любому из пп.19-21 и обнаружение присутствия связанного антитела или антиген-связывающего фрагмента у субъекта, где присутствие связанного антитела или антиген-связывающего фрагмента определяется с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ).

---