(57) 1. Антитело с шарнирной областью, способное селективно активироваться в клетке-мишени или в ткани-мишени для лечения заболевания, включающее
функциональное антитело, в активированном состоянии способное к лечению заболевания, содержащее две лёгких цепи и две тяжёлых цепи;
два ингибиторных домена, в котором каждый ингибиторный домен представляет собой шарнирный домен иммуноглобулина A (IgA), иммуноглобулина D (IgD) или иммуноглобулина G (IgG) или фрагмент шарнирного домена, причём каждый ингибиторный домен состоит из двух пептидных плечей, соединённых друг с другом дисульфидными связями; и четырёх расщепляемых линкеров, причём каждый расщепляемый линкер содержит пептидный субстрат, расщепляемый ферментом, который специфически или с высокой степенью экспрессирован в клетке-мишени или в ткани-мишени и который по отдельности соединяет одно из двух пептидных плечей каждого ингибиторного домена с каждым N-концом одной из двух лёгких цепей и двух тяжёлых цепей функционального антитела.
2. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором функциональное антитело выбрано из группы, состоящей из антитела к TNF-a, антитела к RANKL, антитела к CTLA-4, антитела к HER2, антитела к EGFR, антитела к VEGF, антитела к VEGFR2, антитела к IL6R, антитела к IL12/23, антитела к CD3, антитела к CD11а, антитела к CD20, антитела к CD25, антитела к CD30, антитела к CD33 и антитела к CD52.
3. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором функциональное антитело содержит одно из следующего:
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 1, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 58;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 2, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 59;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 3, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 60;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 4, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 61;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 5, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 62;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 6, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 63;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 7, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 64;
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 8, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 65; или
легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 9, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 66.
4. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором шарнирный домен представляет собой шарнирный домен IgA и IgA представляет собой IgA1 или IgA2.
5. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором шарнирный домен представляет собой шарнирный домен IgG и IgG представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
6. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором каждый из ингибиторных доменов содержит любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID Nos. 10, 11, 12, 13, 14, 15, 54 или 55.
7. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором пептидный субстрат расщепляется любым из следующих ферментов: матриксной металлопротеиназой (ММР), катепсином (CTS), каспазой (CASP) или дисинтегрином и металлопротеиназой (ADAM).
8. Антитело с шарнирной областью по п.7, в котором фермент представляет собой ММР-2 или ММР-9 и каждый расщепляемый линкер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No. 16.
9. Антитело с шарнирной областью по п.1, в котором
функциональное антитело представляет собой антитело к TNF-a, причём его лёгкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No. 1 и его тяжёлая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No. 58;
каждый из расщепляемых линкеров содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No. 16;
каждый из ингибиторных доменов содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No. 10.
10. Экспрессионная система для продуцирования антитела с шарнирной областью по п.1, включающая
последовательность первой нуклеиновой кислоты, включающую в направлении от 5'-конца к 3'-концу:
область, кодирующую первый ингибиторный домен, которая кодирует первое пептидное плечо ингибиторного домена антитела с шарнирной областью, в котором ингибиторный домен представляет собой шарнирный домен иммуноглобулина A (IgA), иммуноглобулина D (IgD) или иммуноглобулина G (IgG) или фрагмент шарнирного домена,
область, кодирующую первый расщепляемый линкер, которая кодирует расщепляемый линкер антитела с шарнирной областью, причём расщепляемый линкер представляет собой пептидный субстрат, расщепляемый ферментом, который специфически или с высокой степенью экспрессирован в клетке-мишени или в ткани-мишени, и
область, кодирующую лёгкую цепь, которая кодирует лёгкую цепь функционального антитела с шарнирной областью, причём функциональное антитело в активированном состоянии способно лечить заболевание; и
последовательность второй нуклеиновой кислоты, включающую в направлении от 5'-конца к 3'-концу:
область, кодирующую второй ингибиторный домен, которая кодирует второе пептидное плечо ингибиторного домена антитела с шарнирной областью,
область, кодирующую второй расщепляемый линкер, которая кодирует второй расщепляемый линкер антитела с шарнирной областью, и
область, кодирующую тяжёлую цепь, которая кодирует тяжёлую цепь функционального антитела с шарнирной областью;
причем первое и второе пептидное плечо соединены друг с другом дисульфидными связями в антителе с шарнирной областью.
11. Экспрессионная система по п.10, включающая также соединяющую последовательность нуклеиновой кислоты, которая соединяет последовательность первой нуклеиновой кислоты и последовательность второй нуклеиновой кислоты, причём соединяющая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность, кодирующую фурин-2А, или последовательность участка внутренней посадки рибосомы (IRES).
12. Экспрессионная система по п.11, включающая также регуляторную последовательность, функционально соединённую с последовательностью первой нуклеиновой кислоты и с последовательностью второй нуклеиновой кислоты для осуществления экспрессии последовательности первой нуклеиновой кислоты, последовательности второй нуклеиновой кислоты и соединяющей последовательности нуклеиновой кислоты.
13. Экспрессионная система по п.10, включающая также
первую регуляторную последовательность, функционально соединённую с последовательностью первой нуклеиновой кислоты для осуществления экспрессии последовательности первой нуклеиновой кислоты; и
вторую регуляторную последовательность, функционально соединённую с последовательностью второй нуклеиновой кислоты для осуществления экспрессии последовательности второй нуклеиновой кислоты.
14. Экспрессионная система по п.13, в которой
последовательность первой нуклеиновой кислоты и первая регуляторная последовательность встроены в первый экспрессионный вектор и
последовательность второй нуклеиновой кислоты и вторая регуляторная последовательность встроены во второй экспрессионный вектор.
15. Экспрессионная система по п.13, в которой последовательность первой нуклеиновой кислоты, первая регуляторная последовательность, последовательность второй нуклеиновой кислоты и вторая регуляторная последовательность встроены в один экспрессионный вектор.
16. Экспрессионная система по п.10, в которой функциональное антитело выбрано из группы, состоящей из антитела к TNF-a, антитела к RANKL, антитела к CTLA-4, антитела к HER2, антитела к EGFR, антитела к VEGF, антитела к VEGFR2, антитела к IL6R, антитела к IL12/23, антитела к CD3, антитела к CD11а, антитела к CD20, антитела к CD25, антитела к CD30, антитела к CD33 и антитела к CD52.
17. Экспрессионная система по п.10, в которой шарнирный домен представляет собой шарнирный домен IgA и IgA представляет собой IgA1 или IgA2.
18. Экспрессионная система по п.10, в которой шарнирный домен представляет собой шарнирный домен IgG и IgG представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
19. Экспрессионная система по п.10, в которой пептидный субстрат расщепляется любым из следующих ферментов: матриксной металлопротеиназой (ММР), катепсином (CTS), каспазой (CASP) или дисинтегрином и металлопротеиназой (ADAM).
20. Экспрессионная система по п.10, которая содержит молекулу синтетической нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность, представляющую собой любую из SEQ ID Nos. 17-50.
21. Способ лечения рака или аутоиммунного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела с шарнирной областью по любому из пп.1-9.
22. Способ по п.21, в котором антитело с шарнирной областью вводят подкожно, перорально, внутривенно, внутритекально или внутримышечно.

---