(57) 1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, специфически связывающееся с белком программируемой смерти-1 (PD-1) человека, содержащее три определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где:
a) HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164;
b) HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166;
c) HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168;
d) LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172;
e) LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 174 и
f) LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176.
2. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 162 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 170.
3. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, обладающее одним или несколькими из следующих свойств:
(a) блокирует связывание белка PD-1 человека с PD-L1 со значением IC₅₀, равным меньше 3 нМ, как измерено методом конкурентного сэндвич-анализа ELISA при 25°С;
(b) связывается с мономерным PD-1 человека с константой равновесия диссоциации для связывания (K_D), равным меньше приблизительно 50 нМ, как измерено анализом методом поверхностного плазмонного резонанса при 37°С;
(c) связывается с мономерным PD-1 человека с K_D, равным меньше приблизительно 12 нМ, в анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 25°С;
(d) связывается с мономерным PD-1 обезьяны с K_D, равным меньше приблизительно 8,5 нМ, в анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 25°С;
(e) связывается с мономерным PD-1 человека с периодом половинной диссоциации (t¹/₂), больше приблизительно 6,3 мин, как измерено при анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 25°С; и
(f) связывается с мономерным PD-1 человека с периодом половинной диссоциации (t¹/₂), больше приблизительно 0,9 мин, как измерено при анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 37°С.
4. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 330.
5. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 331.
6. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, содержащее пару аминокислотных последовательностей тяжелой цепи/легкой цепи SEQ ID NO: 330/331.
7. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, специфически связывающееся с белком программируемой смерти-1 (PD-1) человека, содержащее тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 330 и легкую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 331.
8. Фармацевтическая композиция для ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 или стимуляции активации Т-клеток, которая содержит выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с PD-1 человека, по любому из пп.1-7, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
9. Выделенная полинуклеотидная молекула, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует HCVR антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7.
10. Выделенная полинуклеотидная молекула, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует LCVR антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7.
11. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотидную последовательность по п.9.
12. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотидную последовательность по п.10.
13. Клетка-хозяин для получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7, содержащая вектор экспрессии по п.11 и 12.
14. Способ получения анти-PD-1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий выращивание клетки-хозяина по п.13 в условиях, обеспечивающих продукцию антитела или фрагмента, и выделение полученного таким образом антитела или фрагмента.
15. Способ по п.14, где клетка-хозяин представляет собой клетку СНО.
16. Анти-PD-1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, полученные способом по п.14 или 15.
17. Способ получения фармацевтической композиции для ингибирования активности PD-1 или стимуляции Т-клеточной активности, включающий выращивание клетки-хозяина по п.13 в условиях, обеспечивающих продукцию антитела или фрагмента, выделение полученного таким образом антитела или фрагмента и получение фармацевтической композиции, содержащий антитело или антигенсвязывающий фрагмент и приемлемый носитель.
18. Применение выделенного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 для усиления иммунного ответа у индивида, ингибирования регуляторных Т-клеток (Treg) у индивида или усиления Т-клеточной активации у индивида.
19. Применение фармацевтической композиции по п.8 для усиления иммунного ответа у индивида, ингибирования регуляторных Т-клеток (Treg) у индивида или усиления Т-клеточной активации у индивида.
20. Применение по п.18 или 19, при котором у индивида имеется опухоль.
21. Применение по п.20, при котором опухоль включает рак мозга, почечно-клеточную карциному, рак яичника, рак простаты, рак толстой кишки, немелкоклеточный рак легких, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак ободочной и прямой кишки, рак желудка, рак почки, рак молочной железы, множественную миелому или меланому.
22. Применение по п.18 или 19, при котором у индивида имеется вирусная инфекция.
23. Применение по п.22, при котором вирусная инфекция включает ВИЧ, HCV, HBV, HPV, LCMV, SIV или их комбинацию.
24. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 для получения лекарственного средства для ингибирования роста опухоли или опухолевой клетки.
25. Применение фармацевтической композиции по п.8 для получения лекарственного средства для ингибирования роста опухоли или опухолевой клетки.
26. Применение по п.24 или 25, при котором опухоль включает рак почек, рак яичников, рак предстательной железы, рак толстой кишки, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак ободочной и прямой кишки, рак мозга, рак желудка, рак почки, рак молочной железы, множественную миелому или меланому.
27. Способ ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 или стимуляции Т-клеточной активации, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 в комбинации со вторым терапевтическим средством, включающим NSAID, кортикостероид, антитело против коингибитора Т-клеток, антитело против опухолеспецифического антигена, ингибитор IDO, ингибитор Ang2, противораковую вакцину, ингибитор EGFR, ингибитор TGFb, антитело к PD-L1, диетическую добавку, такую как антиоксидант, антагонист VEGF, такой как анти-VEGF-антитело, низкомолекулярный ингибитор киназы рецептора VEGF, ингибирующий VEGF слитый белок, хирургическое вмешательство, облучение, химиотерапевтическое средство, цитотоксическое средство или их комбинацию.
28. Способ ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 или стимуляции Т-клеточной активации, включающий введение фармацевтической композиции по п.8 в комбинации со вторым терапевтическим средством и методом терапии, включающим NSAID, кортикостероид, антитело против коингибитора Т-клеток, антитело против опухолеспецифического антигена, ингибитор IDO, ингибитор Ang2, противораковую вакцину, ингибитор EGFR, ингибитор TGFb, антитело к PD-L1, диетическую добавку, такую как антиоксидант, антагонист VEGF, такой как анти-VEGF-антитело, низкомолекулярный ингибитор киназы рецептора VEGF, ингибирующий VEGF слитый белок, хирургическое вмешательство, облучение, химиотерапевтическое средство, цитотоксическое средство или их комбинацию.
29. Способ по п.27 или 28, в котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вводят подкожно, внутривенно, внутрикожно, внутрибрюшинно, перорально, внутримышечно или интракраниально.
30. Способ по любому из пп.27-29, в котором антитело или антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вводят в дозе, равной от приблизительно 0,1 мг/кг массы тела до приблизительно 60 мг/кг массы тела индивида.

---