|
| |
(11) | 033468 (13) B1 |
    Разделы: A B C D E F G H  |
(21) | 201391398 |
(22) | 2012.03.29 |
(51) | A61P 35/00 (2006.01)
A61K 47/48 (2006.01) |
(31) | 61/468,997 |
(32) | 2011.03.29 |
(33) | US |
(43) | 2014.02.28 |
(86) | PCT/US2012/031243 |
(87) | WO 2012/135517 2012.10.04 |
(71) | (73) ИММУНОДЖЕН, ИНК. (US) |
(72) | Ли Синьфан, Уорфул Джаред М. (US) |
(74) | Медведев В.Н. (RU) |
(54) | СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА "АНТИТЕЛО-МАЙТАНСИНОИД" |
(57) 1. Способ получения конъюгата "антитело-майтансиноид", включающий стадии:
(а) приведение антитела и майтансиноида, включающего тиоловую группу, в контакт с образованием первой смеси, включающей антитело и майтансиноид, затем приведение первой смеси в контакт с бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи и включающим линкер, в растворе, имеющем рН от приблизительно 4 до приблизительно 9, с получением второй смеси, включающей (i) конъюгат "антитело-майтансиноид", в котором антитело химически соединено посредством линкера с майтансиноидом, (ii) несвязанный майтансиноид и (iii) побочные продукты реакции; и
(б) очистка второй смеси, включающей конъюгат "антитело-майтансиноид", с получением очищенного конъюгата "антитело-майтансиноид".
2. Способ по п.1, в котором майтансиноид добавляют непрерывно в течение интервала времени к антителу с образованием первой смеси.
3. Способ по п.2, в котором бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, добавляют к первой смеси до того, как интервал времени для добавления майтансиноида завершен, при условии, что в любое время майтансиноид находится в молярном избытке в сравнении с бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи, в растворе, имеющем рН от 4 до 9, с получением второй смеси.
4. Способ по любому из пп.2, 3, в котором бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, добавляют непрерывно.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором вторую смесь очищают подверганием смеси фильтрации тангенциальными потоками, избирательной преципитации, адсорбционной фильтрации, адсорбционной хроматографии, неабсорбционной хроматографии или их комбинации для очистки конъюгата "антитело-майтансиноид" от несвязанного майтансиноида и побочных продуктов реакции.
6. Способ по п.5, в котором вторую смесь очищают подверганием смеси фильтрации тангенциальными потоками.
7. Способ по любому из пп.1-6, в котором приведение в контакт на стадии (а) осуществляется предоставлением антитела в реакционном сосуде, добавлением майтансиноида в реакционный сосуд с образованием первой смеси, включающей антитело и майтансиноид, и затем добавлением бифункционального реагента, образующего перекрестные связи, к первой смеси.
8. Способ по любому из пп.1-7, дополнительно включающий выдерживание второй смеси между стадиями (а)-(б) для высвобождения нестабильно связанных линкеров от антитела.
9. Способ по п.8, в котором вторую смесь выдерживают в течение приблизительно 20 ч при температуре от приблизительно 2 до приблизительно 8°С.
10. Способ по любому из пп.1-9, дополнительно включающий гашение второй смеси между стадиями (а)-(б) для гашения любого непрореагировавшего майтансиноида и/или непрореагировавшего бифункционального реагента, образующего перекрестные связи.
11. Способ по п.10, в котором смесь гасят приведением второй смеси в контакт с гасящим реагентом, который реагирует с несвязанным майтансиноидом.
12. Способ по п.11, в котором гасящий реагент выбирают из группы, состоящей из 4-малеимидомасляной кислоты, 3-малеимидопропионовой кислоты, N-этилмалеимида, йодоацетамида и йодоацетамидопропионовой кислоты.
13. Способ получения конъюгата "антитело-майтансиноид", включающий стадии:
(а) приведение антитела и майтансиноида, включающего тиоловую группу, в контакт с образованием первой смеси, включающей антитело и майтансиноид, затем приведение первой смеси в контакт с бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи, и включающим линкер, в растворе, имеющем рН от 4 до 9, с получением второй смеси, включающей (i) конъюгат "антитело-майтансиноид", в котором антитело химически соединено посредством линкера с майтансиноидом, (ii) несвязанный майтансиноид и (iii) побочные продукты реакции;
(б) приведение второй смеси в контакт с дополнительным майтансиноидом с образованием третьей смеси и затем приведение третьей смеси в контакт с дополнительным бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи, имеющим рН от приблизительно 4 до приблизительно 9, с образованием четвертой смеси; и
(в) очистка четвертой смеси, включающей конъюгат "антитело-майтансиноид", с получением очищенного конъюгата "антитело-майтансиноид".
14. Способ по п.13, в котором стадию (б) повторяют один или несколько раз до осуществления стадии (в).
15. Способ по п.14, в котором каждый повтор стадии (б) осуществляют через один или несколько часов, следующих после начальной стадии (б).
16. Способ по любому из пп.13-15, в котором четвертую смесь очищают подверганием смеси фильтрации тангенциальными потоками, избирательной преципитации, адсорбционной фильтрации, адсорбционной хроматографии, неабсорбционной хроматографии или их комбинации для очистки конъюгата "антитело-майтансиноид" от несвязанного майтансиноида и побочных продуктов реакции.
17. Способ по п.16, в котором четвертую смесь очищают подверганием смеси неадсорбционной хроматографии.
18. Способ по п.16, в котором четвертую смесь очищают подверганием смеси фильтрации тангенциальными потоками.
19. Способ по любому из пп.13-18, в котором приведение в контакт на стадии (а) осуществляют введением антитела в реакционный сосуд, добавлением майтансиноида в реакционный сосуд с образованием первой смеси, содержащей антитело и майтансиноид, и последующим добавлением бифункционального реагента, образующего перекрестные связи, к первой смеси.
20. Способ по любому из пп.14-19, дополнительно включающий выдерживание четвертой смеси между стадиями (а)-(в) для высвобождения нестабильно связанных линкеров от антитела.
21. Способ по п.20, в котором четвертую смесь выдерживают в течение 20 ч при температуре от 2 до 8°С.
22. Способ по любому из пп.14-21, дополнительно включающий гашение четвертой смеси между стадиями (а)-(в) для гашения любого непрореагированного майтансиноида и/или непрореагированного бифункционального реагента, образующего перекрестные связи.
23. Способ по п.22, в котором смесь гасят путем приведения четвертой смеси в контакт с гасящим реагентом, который реагирует с несвязанным майтансиноидом.
24. Способ по п.23, в котором гасящий реагент выбирают из группы, состоящей из 4-малеимидомасляной кислоты, 3-малеимидопропионовой кислоты, N-этилмалеимида, йодоацетамида и йодоацетамидопропионовой кислоты.
25. Способ по любому из пп.1-24, в котором приведение в контакт на стадии (а) происходит в растворе, имеющем рН от приблизительно 7 до приблизительно 9.
26. Способ по любому из пп.1-25, в котором приведение в контакт на стадии (а) происходит при температуре от приблизительно 16 до приблизительно 24°С.
27. Способ по любому из пп.1-25, в котором приведение в контакт на стадии (а) происходит при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 15°С.
28. Способ по любому из пп.1-27, в котором антитело представляет собой моноклональное антитело.
29. Способ по любому из пп.1-27, в котором антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело.
30. Способ по любому из пп.1-27, в котором антитело выбирают из группы, состоящей из huN901, huMy9-6, huB4, huC242, трастузумаба, биватузумаба, сибротузумаба, CNTO95, huDS6, ритуксимаба, антитела к Her2, антитела к EGFR, антитела к CD27L, антитела к EGFRvIII, Cripto, антитела к CD138, антитела к CD38, антитела к EphА2, связывающего интегрин антитела, антитела к CD37, антитела к фолату, антитела к Her3 и антитела к IGF1R.
31. Способ по п.30, в котором антитело представляет собой антитело к CD37.
32. Способ по п.30, в котором антителом является трастузумаб.
33. Способ по любому из пп.1-32, в котором майтансиноид представляет собой N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)майтансин (DM1).
34. Способ по любому из пп.1-32, в котором майтансиноид представляет собой N2'-деацетил-N2'-(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)майтансин (DM4).
35. Способ по любому из пп.1-34, в котором бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, включает группу N-сукцинимидилового эфира, группу N-сульфосукцинимидилового эфира, группу на основе малеимида или группу на основе галоацетила.
36. Способ по любому из пп.1-34, в котором бифункциональный реагент, образующий перекрестные связи, выбирают из группы, состоящей из SPDP, SPP, SPDB, сульфо-SPDB, SMCC, PEG-mal, сульфо-Mal и СХ1-1.
37. Способ по любому из пп.1-36, в котором раствор на стадии (а) включает сахарозу.
38. Способ по любому из пп.1-37, в котором раствор на стадии (а) включает буферный агент, выбранный из группы, состоящей из цитратного буфера, ацетатного буфера, сукцинатного буфера и фосфатного буфера.
39. Способ по любому из пп.1-37, в котором раствор на стадии (а) включает буферный агент, выбранный из группы, состоящей из HEPPSO (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2-гидроксипропансульфоновая кислота)), POPSO (пиперазин-1,4-бис-(2-гидроксипропансульфоновая кислота) дегидрат), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновая кислота), HEPPS (EPPS) (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновая кислота), TES (N-[трис(гидроксиметил)метил]-2-аминоэтансульфоновая кислота) и их комбинации.
40. Способ по любому из пп.1-39, в котором майтансиноидом является DM1, бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи, является SMCC и антителом является антитело huCD37-3.
41. Способ по любому из пп.1-39, в котором майтансиноидом является DM1, бифункциональным реагентом, образующим перекрестные связи, является SMCC и антителом является антитело трастузумаб.
|
