| |
(11) | 030794 (13) B1 |
Разделы: A B C E F G H |
(21) | 201300884 |
(22) | 2012.03.01 |
(51) | C12P 21/00 (2006.01) C12R 1/19 (2006.01) |
(31) | 201110052238.5 |
(32) | 2011.03.04 |
(33) | CN |
(43) | 2014.04.30 |
(86) | PCT/CN2012/071825 |
(87) | WO 2012/119524 2012.09.13 |
(71) | (73) БЭЙДЖИНГ КРЕАТЕД ТРИБИОТЕХНОЛЭДЖИ КО., ЛТД (CN) |
(72) | Киу Хиаокуинг, Ли Ронгкюи, Зханг Хиангли, Зханг Хианген (CN) |
(74) | Андрущак Г.Н. (RU) |
(54) | ЖИДКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА И СПОСОБ КРУПНОМАСШТАБНОГО ПРОИЗВОДСТВА АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО СЛИТОГО ПОЛИПЕПТИДА КОЛИЦИНА И ФЕРОМОНА |
(57) 1. Жидкая производственная питательная среда для экспрессии антибактериального слитого полипептида колицина и феромона Staphylococcus aureus в генно-модифицированной Escherichia coli BL-21, содержащая (мас./об.): натрия фосфорнокислого двузамещенного 0,68%, калия фосфорнокислого однозамещенного 0,3%, хлорида аммония 0,1%, хлорида кальция 0,001%, сульфата магния 0,02%, пептона 2,5%, порошка дрожжевого экстракта 0,75%, глюкозы 0,2%, хлорида натрия 0,6% и остальное - воду.
2. Способ крупномасштабного производства антибактериального слитого полипептида колицина и феромона Staphylococcus aureus, включающий:
(а) культивирование генно-модифицированной Escherichia coli BL-21, содержащей рекомбинантную плазмиду pBHC-SA1, pBHC-SA2, pBHC-SA3, pBHC-SA4, pBHC-SE и рВНС-РА, которая экспрессирует указанный антибактериальный полипептид в жидкой производственной питательной среде по п.1; и
(б) индуцирование экспрессии и очистку указанного антибактериального полипептида.
3. Способ по п.2, в котором указанное культивирование включает три стадии последовательного размножения E. coli BL-21 с параметрами: 220 об/мин, 37°C, 3-8 ч на каждой стадии размножения.
4. Способ по п.2, в котором указанное индуцирование экспрессии указанного антибактериального полипептида представляет собой обработку указанной Е. coli в жидкой производственной питательной среде следующим образом: производят культивирование при скорости перемешивания 220 об/мин; максимальном объемном расходе кислорода 30°C в течение 2-4 ч; 42°C в течение 0,5 ч и 37°C в течение 1-2 ч, с добавлением IPTG (изопропилтиогалактозида) до конечной концентрации 0,5 мМ при 42°C.
5. Способ по п.2, в котором E. coli была заморожена, а перед стадией (а) указанную E. coli обрабатывают следующим образом:
(а) оттаивают при 4°C, восстанавливают в течение ночи в жидкой среде LB, содержащей 50 мкг/мл AMP (ампициллина), при 220 об/мин, 37°C и затем наносят слоем на твердую среду LB (Луриа-Бертани) для культивирования отдельных колоний;
(б) выбирают единичную колонию и культивируют в 1,5 мл жидкой среды LB при 220 об/мин, 37°C в течение 5-8 ч, затем переносят в 100 мл жидкой среды LB и культивируют при 220 об/мин, 37°C в течение 5-8 ч; причем используют следующие составы и соотношение компонентов в указанной LB (мас./об.): хлорида натрия 1%, пептона 1%, дрожжевого экстракта 0,5%, агара 0,8-1% и вода - остальное.
|