(11) | 025126 (13) B1 |
    Разделы: A B C D E F G H  |
(21) | 201291455 |
(22) | 2011.06.01 |
(51) | C12R 1/19 (2006.01)
C08B 37/08 (2006.01)
C08B 37/00 (2006.01)
A61K 31/737 (2006.01)
C08L 5/08 (2006.01) |
(31) | MI2010A001264; MI2010A001300 |
(32) | 2010.07.09; 2010.07.15 |
(33) | IT |
(43) | 2013.05.30 |
(86) | PCT/EP2011/059069 |
(87) | WO 2012/004063 2012.01.12 |
(71) | (73) НЬОСИС С.П.А. (IT) |
(72) | Трилли Антонио, Бузиелло Иммаколата (CH), Дали Симона, Багатин Франческа (IT) |
(74) | Медведев В.Н. (RU) |
(54) | РЕКОМБИНАНТНАЯ БАКТЕРИЯ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХОНДРОИТИНА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ ПУТЕМ |
(57) 1. Рекомбинантная бактерия, продуцирующая хондроитин, представляющий собой линейный гликозаминогликан, образованный остатками D-глюкуроновой кислоты (GlcUA) и N-ацетил-D-галактозамина (GalNAc), связанными посредством связей β1-3 (GlcUA®GalNAc) и β1-4 (GalNAc®GlcUA), отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная бактерия получена из бактерии, принадлежащей к группе K-антигена, которая включает роды Escherichia, Haemophilus, Campylobacter, Gloeocapsa или Vibrio, причем в указанной бактерии ген kfoE делетирован или инактивирован путем полного или частичного его замещения либо посредством вставки в него нуклеотидной последовательности, где указанный ген кодирует фермент, ответственный за присоединение остатков фруктозы к линейному остову хондроитина, выбранный из группы, состоящей из:
(A) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, обладающего фруктозилтрансферазной активностью;
(B) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, модифицированную путем делеции, замещения или вставки одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего фруктозилтрансферазной активностью; и
(C) белка, содержащего аминокислотную последовательность, гомологичную по меньшей мере на 50% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, и обладающего фруктозилтрансферазной активностью.
2. Рекомбинантная бактерия по п.1, в которой ген kfoE имеет нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(a) нуклеотидной последовательности, которая содержит последовательность SEQ ID NO: 1 и кодирует белок, обладающий фруктозилтрансферазной активностью;
(b) нуклеотидной последовательности, которая кодирует белок, обладающий фруктозилтрансферазной активностью, и гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, содержащей нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID NO: 1; и
(c) нуклеотидной последовательности, которая кодирует белок, обладающий фруктозилтрансферазной активностью, и содержит нуклеотидную последовательность, гомологичную по меньшей мере на 50% нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1.
3. Рекомбинантная бактерия по любому из пп.1 и 2, в которой ген kfoE инактивирован путем полного или частичного его замещения кассетой резистентности к канамицину с ее последующим удалением, что приводит к полной или частичной делеции гена kfoE.
4. Рекомбинантная бактерия по п.3, происходящая из бактерии вида Escherichia coli.
5. Рекомбинантная бактерия по п.4, происходящая из серотипа бактерии вида Escherichia coli, принадлежащего группе 2 K-антигена.
6. Рекомбинантная бактерия по п.5, происходящая из штамма U1-41 Escherichia coli O5:K4:H.
7. Рекомбинантная бактерия по любому из пп.1 и 2, представляющая собой Escherichia coli DSM23578 или Escherichia coli DSM23644.
8. Рекомбинантная бактерия по п.7, представляющая собой Escherichia coli DSM23644.
9. Способ получения хондроитина биотехнологическим путем, включающий следующие стадии:
(A) культивирование в соответствующей среде рекомбинантной бактерии по любому из пп.1-8;
(B) извлечение из культуральной среды продуцированного бактериями хондроитина и его очистку.
10. Способ по п.9, где указанной рекомбинантной бактерией является Escherichia coli DSM23578 или Escherichia coli DSM23644.
11. Способ по п.9, где указанной рекомбинантной бактерией является Escherichia coli DSM23644.
| 
