(11)	023558 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201101553
(22)	2010.04.23
(51)	C12N 9/42 (2006.01) C12N 15/80 (2006.01) C11D 3/386 (2006.01) C12N 15/56 (2006.01)
(31)	09158739.4
(32)	2009.04.24
(33)	EP
(43)	2012.04.30
(86)	PCT/EP2010/055427
(87)	WO 2010/122141 2010.10.28
(71)	(73) ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL)
(72)	Сагт Корнелис Мария Якобус, Схоневелд-Бергманс Маргот Элизабет Франсуаз, Раубос Йоханнес Андрис, Лос Алрик Питер (NL)
(74)	Саломатина И.С. (RU)
(54)	ТЕРМОСТАБИЛЬНЫЙ ПОЛИПЕПТИД С АКТИВНОСТЬЮ β-ЦЕЛЛОБИОГИДРОЛАЗЫ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА САХАРОВ ИЗ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНОГО МАТЕРИАЛА

(57) 1. Полипептид, обладающий активностью β-целлобиогидролазы, термостабильный в течение 4 ч при температуре около 70°С, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или идентичную ей на 96% последовательность.

2. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1 или ее обратно комплементарную последовательность, который кодирует полипептид по п.1.

3. Полинуклеотид по п.2, представляющий собой ДНК.

4. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая полинуклеотид по любому из пп.2, 3.

5. Конструкция нуклеиновой кислоты по п.4, где содержание GC составляет 56-65%.

6. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.2, 3.

7. Клетка, содержащая полипептид по п.1.

8. Клетка, содержащая полинуклеотид по любому из пп.2, 3.

9. Клетка, содержащая конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп.4, 5.

10. Клетка, содержащая вектор по п.6.

11. Клетка по любому из пп.7-10, являющаяся эукариотической клеткой.

12. Клетка по любому из пп.7-10, являющаяся клеткой гриба.

13. Клетка по п.12, которая выбрана из группы, состоящей из родов Aspergillus, Trichoderma, Hypocrea, Fusarium, Disporotrichum, Penicillium, Acremonium, Neurospora, Thermoascus, Myceliophtora, Sporotrichum, Thielavia, Chryosporium, Humicola и Talaromyces.

14. Клетка по п.13, которая выбрана из группы, состоящей из видов Aspergillus oryzae, Aspergillus sojae, Aspergillus nidulans или Aspergillus niger.

15. Клетка по любому из пп.7-14, в которой один или несколько генов, кодирующих протеазу, удалены, нокаутированы или разрушены полностью или частично.

16. Трансгенное растение, содержащее полинуклеотид по любому из пп.2, 3, представляющее собой кукурузу, сорго, томат, пшеницу, масличное растение, рапс, сою, ячмень, табак или растение родов Anacardium, Arachis, Ragus, Atropa, Avena, Brassica, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Cocos, Coffea, Ferae, Cucumis, Cucurbita, Daucus, Elaeis, Fragaria, Glycine, Gossypium, Helianthus, Ocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Malus, Majorana, Medicago, Nicotiana, Olea, Oryza, Panieum, Pannisetum, Persea, Eolus, Pistachio, Pisum, Pyrus, Prunus, Raphanus, Ricinus, Secale, Senecio, Sinapis, Sorghum, Theobromus, Trigonella, Triticum, Vicia, Vitis, Vigna или Zea или часть указанного растения.

17. Трансгенное растение, содержащее конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп.4, 5, представляющее собой кукурузу, сорго, томат, пшеницу, масличное растение, рапс, сою, ячмень, табак или растение родов Anacardium, Arachis, Ragus, Atropa, Avena, Brassica, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Cocos, Coffea, Ferae, Cucumis, Cucurbita, Daucus, Elaeis, Fragaria, Glycine, Gossypium, Helianthus, Ocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Malus, Majorana, Medicago, Nicotiana, Olea, Oryza, Panieum, Pannisetum, Persea, Eolus, Pistachio, Pisum, Pyrus, Prunus, Raphanus, Ricinus, Secale, Senecio, Sinapis, Sorghum, Theobromus, Trigonella, Triticum, Vicia, Vitis, Vigna или Zea или часть указанного растения.

18. Трансгенное растение, содержащее вектор по п.6, представляющее собой кукурузу, сорго, томат, пшеницу, масличное растение, рапс, сою, ячмень, табак или растение родов Anacardium, Arachis, Ragus, Atropa, Avena, Brassica, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Cocos, Coffea, Ferae, Cucumis, Cucurbita, Daucus, Elaeis, Fragaria, Glycine, Gossypium, Helianthus, Ocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Malus, Majorana, Medicago, Nicotiana, Olea, Oryza, Panieum, Pannisetum, Persea, Eolus, Pistachio, Pisum, Pyrus, Prunus, Raphanus, Ricinus, Secale, Senecio, Sinapis, Sorghum, Theobromus, Trigonella, Triticum, Vicia, Vitis, Vigna или Zea или часть указанного растения.

19. Трансгенное растение, содержащее клетки по любому из пп.7-15, представляющее собой кукурузу, сорго, томат, пшеницу, масличное растение, рапс, сою, ячмень, табак или растение родов Anacardium, Arachis, Ragus, Atropa, Avena, Brassica, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Cocos, Coffea, Ferae, Cucumis, Cucurbita, Daucus, Elaeis, Fragaria, Glycine, Gossypium, Helianthus, Ocallis, Hordeum, Hyoscyamus, Lactuca, Linum, Lolium, Lupinus, Lycopersicon, Malus, Majorana, Medicago, Nicotiana, Olea, Oryza, Panieum, Pannisetum, Persea, Eolus, Pistachio, Pisum, Pyrus, Prunus, Raphanus, Ricinus, Secale, Senecio, Sinapis, Sorghum, Theobromus, Trigonella, Triticum, Vicia, Vitis, Vigna или Zea или часть указанного растения.

20. Способ получения полипептида по п.1, включающий культивирование клетки по любому из пп.9-17 в условиях, обеспечивающих синтез указанного полипептида, и получение синтезированного полипептида.

21. Композиция для производства сахара из лигноцеллюлозного материала, содержащая полипептид по п.1 и целлюлазу, и/или гемицеллюлазу, и/или пектиназу.

22. Композиция по п.21, где целлюлаза является целлобиогидролазой, в частности целлобиогидролазой I или целлобиогидролазой II, эндо-β-1,4-глюканазой, β-глюкозидазой или β-(1,3)(1,4)-глюканазой.

23. Композиция по любому из пп.21, 22, где гемицеллюлаза является экдоксиланазой, β-ксилозидазой, α-L-арабинофуранозидазой, α-D-глюкуронидазой, целлобиогидролазой, ферулоилэстеразой, кумароил-эстеразой, α-галактозидазой, β-галактозидазой, β-маннаназой или β-маннозидазой.

24. Композиция по любому из пп.21-23, где пектиназа является эндополигалактуроназой, пектин-метилэстеразой, эндогалактаназой, β-галактозидазой, пектин-ацетилэстеразой, эндопектинлиазой, пектатлиазой, α-рамнозидазой, экзогалактуроназой, эксполигалактуронатлиазой, рамногалактуронан-гидролазой, рамногалактуронан-лиазой, рамногалактуронан-ацетилэстеразой, рамногалактуронан-галактурогидролазой, ксилогалактуроназой, α-арабинофуранозидазой и эндоарабиназой.

25. Композиция по любому из пп.21-24, которая дополнительно содержит лигниназу, экспансин, экспансин-подобный полипептид или сволленин.

26. Применение полипептида по п.1 для производства сахара из лигноцеллюлозного материала.

27. Применение композиции по любому из пп.21-25 для производства сахара из лигноцеллюлозного материала.