(11)	023475 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201201337
(22)	2012.10.08
(51)	C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01)
(43)	2014.04.30
(96)	2012000216 (RU) 2012.10.08
(71)	(73) ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ БИОЛОГИИ И ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК (ИХБФМ СО РАН) (RU)
(72)	Потапенко Мирослава Олеговна, Савельева Анна Валентиновна, Фомин Александр Сергеевич, Трошкова Галина Павловна, Коваль Ольга Александровна, Кулигина Елена Владимировна, Семенов Дмитрий Владимирович, Рихтер Владимир Александрович (RU)
(74)	Мистюрин Ю.Н. (RU)
(54)	РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pFK4, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО ПЕПТИДА RL4, ЯВЛЯЮЩЕГОСЯ АНАЛОГОМ ФРАГМЕНТА КАППА-КАЗЕИНА ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI XL1-BLUE/pFK4 И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПЕПТИД RL4 - АНАЛОГ ФРАГМЕНТА КАППА-КАЗЕИНА ЧЕЛОВЕКА, ОБЛАДАЮЩИЙ АПОПТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПО ОТНОШЕНИЮ К РАКОВЫМ КЛЕТКАМ

(57) 1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pFK4, обеспечивающая увеличенный выход рекомбинантного пептида RL4 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, который является аналогом фрагмента каппа-казеина человека и состоит из трех компонентов: N-концевой полигистидиновой последовательности MRGSHHHHHHGS, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 49 по 122 а.о., и который обладает увеличенной апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам, причем указанная ДНК характеризуется молекулярной массой 2,41 МДа и размером 3653 п.о. и содержит в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг. 2, следующие элементы:

1) фрагмент Bam HI/Hind III размером 264 п.о., имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, которая кодирует указанный пептид RL4 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2;

2) фрагмент плазмидного вектора pQE30, обеспечивающий эффективную экспрессию фрагмента каппа-казеина человека и содержащий:

а) сайт инициации репликации плазмиды pBR322;

б) промотор бактериофага Т5;

в) генетический маркер AMPr - ген резистентности к ампициллину (ген β-лактамазы), определяющий устойчивость к ампициллину при трансформации Escherichia coli;

г) уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющими следующие координаты: Ava I (2), Eco RI (89), Bam HI (146), Hind III (380), Nco I (1053), Ара LI (1585), Ара LI (2083), Ара LI (3329).

2. Рекомбинантный штамм бактерии Escherichia coli XL1-Blue/pFK4, продуцирующий с увеличенным выходом рекомбинантный пептид RL4 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, причем штамм содержит рекомбинантную плазмидную ДНК pFK4 по п.1 и депонирован в КЭМТК ИХБФМ СО РАН под номером ЭМТК 1347.

3. Рекомбинантный пептид RL4 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, который является аналогом фрагмента каппа-казеина человека, имеет молекулярную массу 10,2 кДа, состоит из трех компонентов: N-концевой полигистидиновой последовательности MRGSHHHHHHGS, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 49 по 122 а.о. и обладает увеличенной апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам.