(11)	014647 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	200800548
(22)	2006.08.11
(51)	C07K 14/575 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) A61K 38/22 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)
(31)	11/201,664; 11/206,903; 11/301,744
(32)	2005.08.11; 2005.08.17; 2005.12.12
(33)	US
(43)	2008.08.29
(86)	PCT/US2006/031724
(87)	WO 2007/022123 2007.02.22
(71)	(73) АМИЛИН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72)	Леви Одиль Эстер, Ханли Майкл Р., Джодка Кэролин М., Льюис Диана, Соарес Кристофер Дж., Гхош Соумитра С., Д'Соуза Лоуренс, Паркес Дэвид Г., Мэк Кристин М., Форуд Бехроуз Брюс (US)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	ГИБРИДНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ С СЕЛЕКТИРУЕМЫМИ СВОЙСТВАМИ

(57) 1. Гибридный полипептид, проявляющий по крайней мере одну гормональную активность, где указанный гибридный полипептид содержит первый биоактивный модуль пептидного гормона, ковалентно связанный по крайней мере с одним дополнительным биоактивным модулем пептидного гормона; где

биоактивные модули пептидного гормона независимо выбраны из группы, состоящей из сложных пептидных гормонов, фрагментов сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, фрагментов аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, и пептидных энхансеров;

сложные пептидные гормоны независимо выбраны по крайней мере из двух из группы, состоящей из амилина, адреномедуллина (ADM), кальцитонина (СТ), пептида, кодируемого геном кальцитонина (CGRP), интермедина, холецистокинина (CCK), лептина, пептида YY (PYY), глюкагоноподобного пептида-1 (GPL-1), глюкагоноподобного пептида 2 (GPL-2), оксинтомодулина (ОХМ), натрийуретического пептида, пептида семейства урокортинов, например Ucn-2 и Ucn-3, пептида семейства нейромединов, например нейромедина U25 или сплайсированного варианта, и ANP, BNP, CNP или уродилатина и экзендина-4;

пептидные энхансеры независимо выбраны из группы, состоящей из структурных мотивов сложных пептидных гормонов, которые придают гибридному полипептиду желаемую химическую стабильность, конформационную стабильность, метаболическую стабильность, биодоступность, направленность на орган/ткань, взаимодействие с рецептором, ингибирование протеазы, связывание с белком плазмы или другую фармакокинетическую характеристику, и структурных мотивов аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые придают гибридному полипептиду желаемую химическую стабильность, конформационную стабильность, метаболическую стабильность, биодоступность, направленность на орган/ткань, взаимодействие с рецептором, ингибирование протеазы, связывание с белком плазмы или другую фармакокинетическую характеристику; и

по крайней мере один из биоактивных модулей пептидного гормона проявляет по крайней мере одну гормональную активность сложного пептидного гормона.

2. Гибридный полипептид по п.1, где пептидные энхансеры независимо выбраны из группы, состоящей из амилина (32-37) (SEQ ID NO: 242), амилина (33-37) (SEQ ID NO: 243), амилина (34-37) (SEQ ID NO: 244), амилина (35-37), амилина (36-37), амилина (37), ADM (47-52) (SEQ ID NO: 245), ADM (48-52) (SEQ ID NO: 246), ADM (49-52) (SEQ ID NO: 247), ADM (50-52), ADM (51-52), ADM (52), CT (27-32) (SEQ ID NO: 248), CT (27-32) (SEQ ID NO: 248), CT (28-32) (SEQ ID NO: 249), CT (29-32) (SEQ ID NO: 250), CT (30-32), CT (31-32), CT (32), CGRP (32-37) (SEQ ID NO: 251), CGRP (33-37) (SEQ ID NO: 252), CGRP (34-37) (SEQ ID NO: 253), CGRP (35-37), CGRP (36-37), CGRP (37), интермедина (42-47) (SEQ ID NO: 254), интермедина (43-47) (SEQ ID NO: 255), интермедина (44-47) (SEQ ID NO: 256), интермедина (45-47), интермедина (46-47), интермедина (47), PYY (25-36) (SEQ ID NO: 257), PYY (26-36) (SEQ ID NO: 258), PYY (27-36) (SEQ ID NO: 259), PYY (28-36) (SEQ ID NO: 260), PYY (29-36) (SEQ ID NO: 261), PYY (30-36) (SEQ ID NO: 262), PYY (31-36) (SEQ ID NO: 263), PYY (32-36) (SEQ ID NO: 264), PYY (25-35) (SEQ ID NO: 265), PYY (26-35) (SEQ ID NO: 266), PYY (27-35) (SEQ ID NO: 267), PYY (28-35) (SEQ ID NO: 268), PYY (29-35) (SEQ ID NO: 269), PYY (30-35) (SEQ ID NO: 270), PYY (31-35) (SEQ ID NO: 271), PYY (32-35) (SEQ ID NO: 272), GPL-1 (29-37) лягушки (SEQ ID NO: 273), GPL-1 (30-37) лягушки (SEQ ID NO: 274), GPL-2 (24-31) лягушки (SEQ ID NO: 275), экзендина-4 (31-39) (SEQ ID NO: 277), экзендина-4 (32-39) (SEQ ID NO: 278), экзендина-4 (33-39) (SEQ ID NO: 279), экзендина-4 (34-39) (SEQ ID NO: 280), экзендина-4 (35-39) (SEQ ID NO: 281), экзендина-4 (36-39) (SEQ ID NO: 282), экзендина-4 (37-39), экзендина-4 (38-39), экзендина-4 (39) и их аналогов.

3. Гибридный полипетид по п.1, где по крайней мере один из первых биоактивных модулей пептидного гормона или по крайней мере один из дополнительных биоактивных модулей пептидного гормона является сложным пептидным гормоном или фрагментом сложного пептидного гормона, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность сложного пептидного гормона.

4. Гибридный полипептид по п.1, где по крайней мере один из первых биоактивных модулей пептидного гормона или по крайней мере один из дополнительных биоактивных модулей пептидного гормона является аналогом или производным сложного пептидного гормона, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, или фрагментом аналога или производного сложного пептидного гормона, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность сложного пептидного гормона.

5. Гибридный полипептид по п.1, где по крайней мере один из первых биоактивных модулей пептидного гормона или по крайней мере один дополнительный биоактивный модуль пептидного гормона является пептидным энхансером.

6. Гибридный полипептид по п.1, где сложные пептидные гормоны независимо выбраны из группы, состоящей из амилина, кальцитонина, CCK, PYY, пептида семейства урокортинов, пептида семейства нейромединов и ANP, BNP, CNP или уродилатина и экзендина-4.

7. Гибридный полипептид по п.1, где по крайней мере один биоактивный модуль пептидного гормона, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, расположен в N-концевой части гибридного полипептида.

8. Гибридный полипептид по п.7, где по крайней мере один биоактивный модуль пептидного гормона, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, расположенный в N-концевой части гибридного полипептида, ориентирован в направлении от С-концевой области к N-концевой области.

9. Гибридный полипептид по п.8, где N-концевая часть гибридного полипептида амидирована.

10. Гибридный полипептид по п.1, где по крайней мере один биоактивный модуль пептидного гормона, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, расположен в С-концевой части гибридного полипептида.

11. Гибридный полипептид по п.10, где С-концевая область гибридного полипептида амидирована.

12. Гибридный полипептид по п.1, где С-концевая область одного биоактивного модуля пептидного гормона присоединена непосредственно к N-концевой области другого биоактивного модуля пептидного гормона с образованием ковалентной связи.

13. Гибридный полипептид по п.1, где биоактивные модули пептидного гормона ковалентно соединены с применением одной или нескольких линкерных групп, независимо выбранных из группы, состоящей из алкилов; ПЭГ дикарбоновых кислот; аминокислот; полиаминокислот; бифункциональных линкеров; аминокапроила (Аса), Gly, b-аланила, 8-амино-3,6-диоксаоктаноила и Gly-Lys-Arg (GKR).

14. Гибридный полипептид по п.1, где первый биоактивный модуль пептидного гормона выбран из группы, состоящей из экзендина-4, фрагмента экзендина-4, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, аналога или производного экзендина-4, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, и фрагмента аналога экзендина-4, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность; и по крайней мере один дополнительный биоактивный модуль пептидного гормона независимо выбраны из группы, состоящей из амилина, фрагмента амилина, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, аналога или производного амилина, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, или фрагмента аналога амилина, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, CCK, фрагмента CCK, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, аналога или производного CCK, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, фрагмента аналога CCK, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, СТ, фрагмента СТ, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, аналога или производного СТ, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, фрагмента аналога СТ, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, и пептидного энхансера.

15. Гибридный полипептид по п.14, где первый биоактивный модуль пептидного гормона выбран из группы, состоящей из экзендина-4, зкзендина-4 (1-27) (SEQ ID NO: 236), экзендина-4 (1-28) (SEQ ID NO: 237), ¹⁴Leu,²⁵Phe-экзендина-4 (1-28) (SEQ ID NO: 284); ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-экзендина-4 (1-28) (SEQ ID NO: 240) и ¹⁴Leu-экзендина-4 (1-28) (SEQ ID NO: 190); и по крайней мере один дополнительный биоактивный модуль пептидного гормона независимо выбран из группы, состоящей из ^25,28,29Pro-h-амилина (SEQ ID NO: 67), амилина (1-7) (SEQ ID NO: 217), ^2,7Ala-амилина (1-7) (SEQ ID NO: 285), sCT (8-10), sCT (8-27) (SEQ ID NO: 288), ^11,18Arg-sCT (8-27) (SEQ ID NO: 289), ¹⁴Glu, ^11,18Arg-sCT (8-27) (SEQ ID NO: 286), CCK-8, Phe²CCK-8 (SEQ ID NO: 287), амилина (33-37) (SEQ ID NO: 243), PYY (25-36) (SEQ ID NO: 257), PYY (30-36) (SEQ ID NO: 262) и PYY (31-36) (SEQ ID NO: 263).

16. Гибридный полипептид по п.14, где гибридный полипептид содержит по крайней мере три биоактивных модуля пептидного гормона.

17. Гибридный полипептид по п.14, где гибридный полипептид содержит по крайней мере четыре биоактивных модуля пептидного гормона.

18. Гибридный полипептид по п.14, где первый биоактивный модуль пептидного гормона расположен в С-концевой области гибридного полипептида и по крайней мере один дополнительный биоактивный модуль пептидного гормона расположен в N-концевой области гибридного полипептида.

19. Гибридный полипептид по п.14, где первый биоактивный модуль пептидного гормона расположен в N-концевой области гибридного полипептида и по крайней мере один дополнительный биоактивный модуль пептидного гормона расположен в С-концевой области гибридного полипептида.

20. Гибридный полипептид по п.1, где первый биоактивный модуль пептидного гормона выбран из группы, состоящей из амилина, фрагмента амилина, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, аналога или производного амилина, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, и фрагмента аналога амилина, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность; и по крайней мере один дополнительный биоактивный модуль пептидного гормона представляет собой пептидный энхансер, независимо выбранный из группы, состоящей из PYY (25-36) (SEQ ID NO: 257), PYY (26-36) (SEQ ID NO: 258), PYY (27-36) (SEQ ID NO: 259), PYY (28-36) (SEQ ID NO: 260), PYY (29-36) (SEQ ID NO: 261), PYY (30-36) (SEQ ID NO: 262), PYY (31-36) (SEQ ID NO: 263), PYY (32-36) (SEQ ID NO: 264), PYY (25-35) (SEQ ID NO: 265), PYY (26-35) (SEQ ID NO: 266), PYY (27-35) (SEQ ID NO: 267), PYY (28-35) (SEQ ID NO: 268), PYY (29-35) (SEQ ID NO: 269), PYY (30-35) (SEQ ID NO: 270), PYY (31-35) (SEQ ID NO: 271), PYY (32-35) (SEQ ID NO: 272) и их аналогов.

21. Гибридный полипептид, проявляющий по крайней мере одну гормональную активность, где указанный гибридный полипептид содержит первый биоактивный модуль пептидного гормона, ковалентно связанный со вторым биоактивным модулем пептидного гормона; где

биоактивные модули пептидного гормона независимо выбраны из группы, состоящей из сложных пептидных гормонов, фрагментов сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, фрагментов аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, и пептидных энхансеров;

сложные пептидные гормоны независимо выбраны по крайней мере из двух из группы, состоящей из амилина, PYY и экзендина-4;

пептидные энхансеры независимо выбраны из группы, состоящей из структурных мотивов сложных пептидных гормонов, которые придают гибридному полипептиду желаемую химическую стабильность, конформационную стабильность, метаболическую стабильность, биодоступность, направленность на орган/ткань, взаимодействие с рецептором, ингибирование протеазы, связывание с белком плазмы или другую фармакокинетическую характеристику, и структурных мотивов аналогов или производных сложных пептидных гормонов, которые придают гибридному полипептиду желаемую химическую стабильность, конформационную стабильность, метаболическую стабильность, биодоступность, направленность на орган/ткань, взаимодействие с рецептором, ингибирование протеазы, связывание с белком плазмы или другую фармакокинетическую характеристику; и

по крайней мере один из биоактивных модулей пептидного гормона проявляет по крайней мере одну гормональную активность сложного пептидного гормона.

22. Гибридный полипептид по п.21, где гибридный полипептид содержит сочетания биоактивных модулей пептидного гормона, выбранные из группы, состоящей из экзендина-4/PYY, PYY/экзендина-4, экзендина/амилина, амилина/экзендина, амилина/PYY и PYY/амилина биоактивных модулей пептидного гормона.

23. Гибридный полипептид, проявляющий по крайней мере одну гормональную активность, где указанный гибридный полипептид содержит первый биоактивный модуль пептидного гормона, ковалентно связанный по крайней мере с вторым биоактивным модулем пептидного гормона; где

биоактивные модули пептидного гормона независимо выбраны из группы, состоящей из сложных пептидных гормонов, фрагментов сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, фрагментов аналогов и производных сложных пептидных гормонов, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность сложных пептидных гормонов, и пептидных энхансеров;

первый сложный пептидный гормон содержит лептин;

по крайней мере один второй биоактивный модуль пептидного гормона содержит полипептид, независимо выбранный из экзендина или GPL1; и

по крайней мере один из биоактивных модулей пептидного гормона проявляет по крайней мере одну гормональную активность его сложного пептидного гормона.

24. Гибридный полипептид по п.23, где модуль пептидного гормона лептина содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из лептина, фрагментов лептина, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность, аналогов и производных лептина, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность, и фрагментов аналогов и производных лептина, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность.

25. Гибридный полипептид по п.23, где модуль пептидного гормона лептина содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из лептина, фрагментов лептина, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность, аналогов и производных лептина, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность, фрагментов аналогов и производных лептина, которые проявляют по крайней мере одну гормональную активность, и где по крайней мере один модуль пептидного гормона экзендина содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из экзендина-4, фрагмента экзендина-4, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, аналога или производного экзендина-4, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность, и фрагмента аналога экзендина-4, который проявляет по крайней мере одну гормональную активность.

26. Гибридный полипептид по п.23, где экзендин выбран из группы, состоящей из экзендина-4, ¹⁴Leu,²⁵Phe-экзендина-4, ⁵Ala, ¹⁴Leu,²⁵Phe-экзендина-4, ¹⁴Leu,²²Ala,²⁵Phe-экзендина-4 и их активных фрагментов.

27. Способ лечения пациента, страдающего заболеванием или нарушением обмена веществ, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества гибридного полипептида по п.23.

28. Способ по п.27, где заболеванием или нарушением обмена веществ являются диабет, диабет 1 типа, диабет 2 типа, ожирение, гипертония, атеросклероз, дислипидемия, застойная сердечная недостаточность, инсульт, гиперхолестеринемия, сердечно-сосудистое заболевание, ишемия миокарда, реперфузия миокарда, нарушения питания, диабет при беременности, диабетическая невропатия, легочная гипертензия или заболевания, связанные с недостаточной массой бета-клеток поджелудочной железы.

29. Гибрид по любому из пп.1-26, где гибрид не является гибридом, описанным в WO 2005/077072.

30. Способ по пп.27, 28, где гибрид не является гибридом, описанным в WO 2005/077072.