(11) | 013796 (13) B1 |
    Разделы: A B C D E F G H  |
(21) | 200800699 |
(22) | 2006.09.22 |
(51) | C07K 14/605 (2006.01)
C07K 19/00 (2006.01) |
(31) | 05020718.2 |
(32) | 2005.09.22 |
(33) | EP |
(43) | 2008.10.30 |
(86) | PCT/EP2006/009226 |
(87) | WO 2007/039140 2007.04.12 |
(71) | (73) БАЙОКОМПАТИБЛЗ ЮК ЛТД. (GB) |
(72) | Гайгле Петер, Валльрапп Кристине, Тёнес Эрик (DE) |
(74) | Веселицкая И.А., Пивницкая Н.Н., Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б., Каксис Р.А., Комарова О.М., Белоусов Ю.В. (RU) |
(54) | СЛИТЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ, СОДЕРЖАЩИЕ GLP-1 (ГЛЮКАГОН-ПОДОБНЫЙ ПЕПТИД-1), С ПОВЫШЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ПЕПТИДАЗАМ |
(57) 1. Слитый пептид, содержащий в качестве компонента (I) N-концевую последовательность
(i) GLP-1(7-37) SEQ ID NO:1 или функциональную последовательность, обладающую функциональной активностью GLP-1, как инкретинового гормона, а именно его антиапопатическим действием или его нейротрофическими свойствами, и имеющую последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную GLP-1(7-37),
(ii) модифицированный пептид GLP-1, включающий аминокислотную последовательность формулы II
где Хаа7 обозначает L-гистидин, D-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, 3-гидроксигистидин, гомогистидин, N-ацетилгистидин, а-фторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2-пиридилаланин или 4-пиридилаланин;
Хаа8 обозначает Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-аминоциклопропил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклобутил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклопентил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогексил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогептил)карбоновую кислоту или (1-аминоциклооктил)карбоновую кислоту, где Gly является наиболее предпочтительным;
Хаа16 обозначает Val или Leu;
Xaa18 обозначает Ser, Lys или Arg;
Xaa19 обозначает Tyr или Gln;
Хаа20 обозначает Leu или Met;
Хаа22 обозначает Gly, Glu или Aib;
Xaa23 обозначает Gln, Glu, Lys или Arg;
Хаа25 обозначает Ala или Val;
Хаа26 обозначает Lys, Glu или Arg;
Xaa27 обозначает Glu или Leu;
Хаа30 обозначает Ala, Glu или Arg;
Хаа33 обозначает Val или Lys;
Xaa34 обозначает Lys, Glu, Asn или Arg;
Xaa35 обозначает Gly или Aib;
Хаа36 обозначает Arg, Gly, или Lys, или амид, или отсутствует;
Хаа37 обозначает Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, амид или отсутствует,
и в качестве компонента (II) С-концевую пептидную последовательность, состоящую по меньшей мере из 9 аминокислот и содержащую последовательность согласно SEQ ID NO:22 (RRDFPEEVAI) или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность SEQ ID NO:22, и удостаивающую слитый пептид лучшей устойчивостью к инактивации с помощью DPP-IV, причем N-терминальная последовательность слитого пептида является компонентом (I) как таковым или сигнальной пептидной последовательностью, слитой с помощью последовательности, которая расщепляется протеазой, с N-терминальной последовательностью компонента (I), или сигнальным пептидом, слитым без помощи расщепляемой протеазой последовательности между ними с N-терминальным компонентом (I), или лидерной последовательностью, слитой с помощью последовательности, которая расщепляется протеазой с N-терминальным компонентом (I) и является гетерологичной по отношению к препроглюкагону.
2. Слитый пептид по п.1, где компонент (I) является модифицированным GLP-1, включающим аминокислотную последовательность формулы III
где Хаа7 обозначает L-гистидин, D-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, 3-гидроксигистидин, гомогистидин, N-ацетилгистидин, а-фторметилгистидин, а-метилгистидин, 3-пиридилаланин, 2-пиридилаланил или 4-пиридилаланин;
Хаа8 обозначает Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-аминоциклопропил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклобутил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклопентил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогексил)карбоновую кислоту, (1-аминоциклогептил)карбоновую кислоту или (1-аминоциклооктил)карбоновую кислоту;
Хаа18 обозначает Ser, Lys или Arg;
Хаа22 обозначает Gly, Glu или Aib;
Хаа23 обозначает Gln, Glu, Lys или Arg;
Хаа26 обозначает Lys, Glu или Arg;
Хаа30 обозначает Ala, Glu или Arg;
Хаа34 обозначает Lys, Glu или Arg;
Xaa35 обозначает Gly или Aib;
Хаа36 обозначает Arg или Lys, амид или отсутствует;
Хаа37 обозначает Gly, Ala, Glu или Lys, амид или отсутствует.
3. Слитый пептид по п.1, где компонент (I) является GLP-1(7-35) или GLP-1(7-36).
4. Слитый пептид по любому из пп.1-3, в котором компонент (II) представляет собой пептидную последовательность, которая содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO:23 (RRDFPEEVAIVEEL) или SEQ ID NO:24 (RRDFPEEVAIAEEL), или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной SEQ ID NO:23 или 24.
5. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-4, в котором компонент (II) представляет собой пептидную последовательность, которая содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO:2 (RRDFPEEVAIVEELG) или SEQ ID NO:3 (RRDFPEEVAIAEELG), или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% любой последовательности, представленной в SEQ ID NO:2 или 3.
6. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-5, в котором компонент (I) и компонент (II) связаны непосредственно или связаны через линкерную последовательность.
7. Слитый пептид по п.6, в котором последовательность состоит из 1-10 аминокислот.
8. Слитый пептид по одному из пп.1-7, где слитый пептид содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO:8
или SEQ ID NO:12
или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательностям, представленным в SEQ ID NO: 8 или 12.
9. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-8, где слитый пептид содержит дополнительный компонент (III), связанный с С-концом компонента (II) и/или с N-концом компонента (I).
10. Слитый пептид по п.9, в котором компонент (III) содержит по меньшей мере четыре аминокислотных остатка, предпочтительно по меньшей мере 10 аминокислотных остатков или включает по меньшей мере 20 аминокислотных остатков.
11. Слитый пептид по п.9 или 10, в котором компонент (III) содержит по меньшей мере 4, предпочтительно по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 20 дополнительных аминокислотных остатков в N-концевой последовательности GLP-2, такой как проглюкагон или GLP-1(7-37).
12. Слитый пептид по одному из пп.9-11, в котором компонент (III) содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO:4 или 5, или последовательность, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в SEQ ID NO:4 или 5.
13. Слитый пептид по одному из пп.9-12, где слитый пептид содержит пептидную последовательность, выбранную из группы, которая включает SEQ ID NO:6, 7, 10 и 11, или последовательность, гомологичную по меньшей мере на 80% последовательности, представленной в SEQ ID NO:6, 7, 10 или 11.
14. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-13, в котором по меньшей мере одну из аминокислот дериватизируют путем ковалентной модификации боковой цепи встречающейся в естественных условиях аминокислоты, путем модификации пептидного каркаса, путем модификации NH2- или карбоксильных концевых групп.
15. Слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-14, где слитый пептид содержит белок-носитель, прежде всего трансферрин или альбумин, в качестве компонента (IV).
16. Слитый пептид по п.14, в котором по меньшей мере одну из аминокислот дериватизуют с помощью липидной или углеводной группы.
17. Слитый пептид по п.14 или 16, в котором N-концевой остаток His GLP-1 (GLP-1(7)) химически модифицируют на его NH2-конце и/или гистидильной боковой цепи, прежде всего с помощью гидрофобного остатка.
18. Способ получения слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17 с помощью твердофазного пептидного синтеза.
19. Слитый пептид по любому из пп.1-17 в качестве лекарственного средства для применения при терапии человека или животных.
20. Нуклеиновая кислота, кодирующая слитый пептид по одному из предыдущих пп.1-13 или 15.
21. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.20.
22. Клетка-хозяин, содержащая экзогенно интродуцированную ДНК по п.20, в частности вектор по п.21, которая обладает способностью экспрессировать слитый пептид, где клетка-хозяин не является человеческой эмбриональной или зародышевой клеткой.
23. Способ получения слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-13 или 15, в котором микроорганизм, трансформированный путем включения нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый пептид, ферментируют и выделяют белок.
24. Способ получения белка по п.23, заключающийся в том, что клетки животного выращивают в условиях, при которых белок экспортируется из клеток.
25. Применение слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17, нуклеиновой кислоты по п.20, вектора по п.21 или клетки-хозяина по п.22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения сахарного диабета типа I или II, устойчивости к инсулину, нарушений веса и связанных с ними заболеваний или состояний.
26. Применение слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17, нуклеиновой кислоты по п.20, вектора по п.21 или клетки-хозяина по п.22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения нейродегенеративных нарушений и связанных с ними заболеваний или состояний.
27. Применение слитого пептида по одному из предыдущих пп.1-17, нуклеиновой кислоты по п.20, вектора по п.21 или клетки-хозяина по п.22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения нарушений и заболеваний или состояний, ассоциированных с апоптозом.
| 
