(11)	013677 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	200500835
(22)	2003.11.14
(51)	C07K 16/00 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) A61K 39/395 (2006.01) A61P 37/00 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01) A61P 43/00 (2006.01)
(31)	60/426,690
(32)	2002.11.15
(33)	US
(43)	2006.02.24
(86)	PCT/US2003/036126
(87)	WO 2004/045512 2004.06.03
(71)	(73) ГЕНМАБ А/С (DK)
(72)	Схюрман Янин, Хавенит Катарина Эманюэль Герарда, Паррен Пауль, Ван Де Винкель Ян Г.Й. (NL), Уильямс Дениз Ли (US), Петерсен Йорген (DK), Бодсгорд Оле Д. М. Ск. (SE)
(74)	Дементьев В.Н. (RU)
(54)	ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ CD25 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Выделенное человеческое моноклональное антитело, которое связывается с человеческим CD25 и ингибирует связывание IL-2 с CD25, содержащее по меньшей мере одну вариабельную область человеческого происхождения, выбранную из группы, состоящей из:

(i) SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 или 16; или

(ii) последовательности, которая по меньшей мере на 90% гомологична, предпочтительно по меньшей мере на 95% гомологична и более предпочтительно по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% гомологична любой из аминокислотных последовательностей, представленных в (i).

2. Антитело по п.1, содержащее тяжёлую цепь человеческого происхождения и лёгкую каппа-цепь человеческого происхождения, включающие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 6 и 8, SEQ ID NO: 14 и 16, SEQ ID NO: 2 и 4 или SEQ ID NO: 10 и 12 соответственно или последовательности, которые по меньшей мере на 90% гомологичны, предпочтительно по меньшей мере на 95% гомологичны и более предпочтительно по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% гомологичны аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 6 и 8, SEQ ID NO: 14 и 16, SEQ ID NO: 2 и 4 или SEQ ID NO: 10 и 12 соответственно.

3. Антитело по п.2, в котором вариабельные области тяжелой цепи человеческого происхождения и лёгкой каппа-цепи человеческого происхождения кодируются нуклеотидными последовательностями SEQ ID NO: 5 и 7, SEQ ID NO: 13 и 15, SEQ ID NO: 1 и 3 или SEQ ID NO: 9 и 11 соответственно или указанными последовательностями, имеющими модификации в консервативных областях.

4. Антитело по п.2, в котором вариабельные области тяжёлой цепи человеческого происхождения и лёгкой каппа-цепи человеческого происхождения содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 6 и 8, SEQ ID NO: 14 и 16, SEQ ID NO: 2 и 4, или SEQ ID NO: 10 и 12 соответственно.

5. Антитело по любому из пп.1-4, содержащее по меньшей мере одну или по меньшей мере четыре последовательности CDR, выбранные из:

(i) SEQ ID NO: 23, 24, 25, 26, 27 или 28; или

(ii) SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33 или 34; или

(iii) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 38, 39 или 40; или

(iv) SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 или 22; или

(v) любой из указанных последовательностей (i), (ii), (iii) или (iv), с консервативными модификациями.

6. Антитело по любому из пп.1-5, содержащее область V_H CDR3, имеющую аминокислотную последовательность

X₁-Asp-Trp-X₂-Asp-Х₃

где X₁ обозначает Arg, His или Lys, предпочтительно Arg или Lys; Х₂ обозначает Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Tyr, Trp или Phe, предпочтительно Gly или Phe; и X₃ обозначает Pro, Tyr, Phe или Trp, предпочтительно Pro или Tyr.

7. Антитело по п.6, содержащее CDR3 области V_H с последовательностью SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 19 или с любой из указанных последовательностей с консервативными модификациям, в том числе с заменами, делециями или добавлениями 1-3 аминокислот.

8. Антитело по любому из пп.1-7, содержащее V_H CDR1, CDR2 и CDR3 и V_L CDR1, CDR2 и CDR3 с последовательностями:

(i) SEQ ID NO: 23, 24, 25, 26, 27 и 28; или с любой из указанных последовательностей с консервативными модификациями;

(ii) SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33 или 34; или с любой из указанных последовательностей с консервативными модификациями;

(iii) SEQ ID NO: 35, 36, 37, 38, 39 или 40; или с любой из указанных последовательностей с консервативными модификациями;

(iv) SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 или 22; или с любой из указанных последовательностей с консервативными модификациями.

9. Антитело по любому из пп.1-8, содержащее V_H CDR1 домен, имеющий аминокислотную последовательность

X₁-Tyr-X₂-Ile-X₃

где X₁, Х₂ и X₃ обозначают природные аминокислоты; и

где X₁отличен от Ser; или X₂ отличен от Ala; или X₃ отличен от Ser.

10. Антитело по п.9, где X₁ обозначает Arg, Lys или His, предпочтительно Arg; X₂ обозначает Ala, Gly, Val, Leu, Ile или Pro, предпочтительно Ala, Ile или Pro; и X₃ обозначает Asn или Gln, предпочтительно Asn.

11. Антитело по любому из пп.1-10, содержащее V_H CDR2 домен, имеющий аминокислотную последовательность

Arg-Ile-Ile-Pro-Ile-Leu-Gly-X₁-X₂-X₃-Tyr-Ala-Gln-X₄-Phe-Gln-X₅

где X₁, X₂, X₃, X₄ и Х₅ обозначают природные аминокислоты; и где X₁отличен от Ile; или X₂ отличен от Ala; или X₃ отличен от Asn; или Х₄ отличен от Lys; или Х₅отличен от Gly.

12. Антитело по п.11, где X₁ обозначает Ile, Val, Gly, Ala или Leu, предпочтительно Ile или Val; X₂обозначает Ala, Ile, Val, Gly, Leu, Glu или Asp, предпочтительно Ala или Glu; X₃ обозначает Asp, Glu, Asn или Gln, предпочтительно Asp или Asn; X₄обозначает Lys, Arg или His, предпочтительно Lys или Arg; и X₅ обозначает Gly, Ile, Val, Ala, Leu, Asp или Glu, предпочтительно Gly или Asp.

13. Антитело по любому из пп.1-12, содержащее V_L CDR1 домен, имеющий аминокислотную последовательность

Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-X₁-Ser-Ser-X₂-Leu-Ala

где X₁и X₂ обозначают природные аминокислоты; и где X₁ отличен от Val; или X₂отличен от Tyr.

14. Антитело по п.13, где X₁ обозначает Val, Ala, Leu, Ile или Gly, предпочтительно Val или Gly; и X₂обозначает Phe, Trp или Tyr, предпочтительно Phe или Tyr.

15. Антитело по любому из пп.1-14, содержащее V_L CDR3 домен, имеющий аминокислотную последовательность

Gln-Gln-Tyr-X₁-Ser-Ser-Pro-X₂-X₃

где X₁ обозначает Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser или Thr, предпочтительно Gly или Ser; X₂ обозначает Leu, Gly, Ala, Val или Ile, предпочтительно Leu или Ile; и X₃ обозначает Thr или Ser, предпочтительно Thr.

16. Антитело по любому из пп.1-15, содержащее:

(i) аминокислотную последовательность вариабельной области тяжёлой цепи, образованную из последовательности V_H1-69/JH4b или V_H1-69/JH5b человеческой зародышевой линии, и аминокислотную последовательность вариабельной области лёгкой цепи, образованную из последовательности А27/J_K4 или A27/J_K5 человеческой зародышевой линии, или

(ii) аминокислотную последовательность вариабельной области тяжёлой цепи, образованную из последовательности V_H1-69/D7-27/JH4b или V_H1-69/D7-27/JH5b человеческой зародышевой линии, и аминокислотную последовательность вариабельной области лёгкой цепи, образованную из последовательности A27/J_K4 или A27/J_K5 человеческой зародышевой линии.

17. Антитело по любому из пп.1-16, выбранное из группы, состоящей из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, секреторного IgA, IgD и IgE антитела.

18. Антитело по любому из пп.1-17, которое диссоциирует от человеческого CD25 с константой равновесной диссоциации (K_D) около 10^{-8 М или ниже, предпочтительно около 10-9 М или ниже, или более предпочтительно около 10-10 М или ниже, или 10-11 М или даже ниже, по определению методом плазмонного поверхностного резонанса (}SPR) на приборе BIAcore 3000 с применением рекомбинантного человеческого CD25 в качестве лиганда и антитела в качестве аналита.

19. Антитело по любому из пп.1-18, которое имеет одно или более следующих свойств:

(а) элиминирует Т клетки, экспрессирующие CD25;

(b) ингибирует пролиферацию Т клеток, экспрессирующих CD25;

(c) ингибирует вызванную антителом против CD25 Т-клеточную пролиферацию мононуклеаров периферической крови (РВМС);

(d) ингибирует смешанную лимфоцитарную реакцию (MLR);

(e) обеспечивает интернализацию CD25, экспрессированных на Т-клетках.

20. Антитело по п.17, которое представляет собой интактное антитело, выбранное из группы, состоящей из интактного IgG1,k антитела, предпочтительно интактного IgG4,k антитела и интактного IgG4,l антитела, причем это антитело гликозилируется в клетке эукариот.

21. Антитело по любому из пп.1-15, которое представляет собой фрагмент антитела или одноцепочечное антитело.

22. Антитело по любому из пп.1-21, которое представляет собой белок, слитый по связывающему домену иммуноглобулина, содержащий (i) вариабельную область тяжёлой цепи или вариабельную область лёгкой цепи, как определено в п.2, слитую с полипептидом шарнирной области иммуноглобулина, (ii) константную область СН2 тяжёлой цепи иммуноглобулина, слитую с шарнирной областью, и (iii) константную область CH3 тяжёлой цепи иммуноглобулина, слитую с константной областью СН2.

23. Гибридома, продуцирующая человеческое моноклинальное антитело по любому из пп.1-20.

24. Гибридома по п.23, которая содержит В-клетку трансгенного отличного от человека животного, в которой реаранжировки генных сегментов V-(D)-J привели к образованию функционального трансгена тяжёлой цепи человеческого происхождения и функционального трансгена лёгкой цепи человеческого происхождения, слитую с иммортализованной клеткой.

25. Трансфектома, содержащая последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжёлую цепь антитела человеческого происхождения и лёгкую цепь человеческого происхождения, продуцирующая детектируемое количество антитела по любому из пп.1-21.

26. Эукариотическая или прокариотическая клетка-хозяин, содержащая последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжёлую цепь антитела человеческого происхождения и лёгкую цепь антитела человеческого происхождения, продуцирующая детектируемое количество антитела по любому из пп.1-21.

27. Трансгенное отличное от человека животное, содержащее последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжёлую цепь антитела человеческого происхождения и лёгкую цепь антитела человеческого происхождения, продуцирующее детектируемое количество антитела по любому из пп.1-21.

28. Трансгенное растение, содержащее последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжёлую цепь антитела человеческого происхождения и лёгкую цепь антитела человеческого происхождения, продуцирующее детектируемое количество антитела по любому из пп.1-21.

29. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие человеческое моноклональное антитело по любому из пп.1-21.

30. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-21 или вектор по п.30 и фармацевтически приемлемый носитель, и, при необходимости, другой терапевтический агент.

31. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-21 или вектор по п.30, и второй терапевтический агент для их отдельного применения при лечении человека или животного.

32. Композиция по п.30, отличающаяся тем, что другой терапевтический агент представляет собой:

(i) иммуносупрессор, выбранный из группы, включающей циклоспорин, азатиоприн, микофенольную кислоту, микофенолят мофетила, кортикостероиды, такие как преднизон, метотрексат, соли золота, сульфасалазин, противомалярийные средства, бреквинар, лефлюномид, мизорибин, 15-дезоксиспергуалин, 6-меркаптопурин, циклофосфамид, рапамицин, такролимус (FK-506), OKT3 и антитимоцит глобулин;

(ii) противовоспалительный агент, выбранный из группы, включающей стероидные препараты, НСПВС (нестероидные противовоспалительные средства) и DMARD (противоревматические средства), такие как метотрексат, гидроксихлорокин, сульфасалазин, лефлуномид, блокаторы EL-1 рецептора, например, анакинра, блокаторы TNF-a, например этанерсепт, инфликсимаб и адалимумаб, антитела против IL-6R, CTLA4Ig и антитела против IL-15;

(iii) агент для лечения воспалительных или гиперпролиферативных кожных заболеваний, выбранный из группы, включающей угольную смолу, витамин А, антралин, кальципотриен, таразотен, кортикостероиды, метотрексат, ретиноиды, например ацикретин, циклоспорин, этанерсепт, алефасепт, эфалузимаб, 6-тиогуанин, микофенолят мофетила, такролимус (FK-506) и гидроксимочевину; или

(iv) агент, выбранный из доксорубицина, цисплатина, блеомицина, кармустина, хлорамбуцила и циклофосфамида.

33. Антитело по любому из пп.1-21, дополнительно содержащее линкер-хелатор для связывания радиоактивного изотопа.

34. Иммуноконъюгат, предназначенный для применения в лечении или предупреждении заболевания, связанного с клетками, экспрессирующими CD25, содержащий антитело по любому из пп.1-21 или 33, связанное с цитотоксическим агентом, радиоизотопом или лекарственным веществом.

35. Биспецифическая или полиспецифическая молекула, предназначенная для применения в лечении или предупреждении заболевания, связанного с клетками, экспрессирующими CD25, содержащая антитело по любому из пп.1-21 и которая дополнительно связывает один и более антигенов, таких как CD3, CD4, IL-15R, мембраносвязанный или рецепторносвязанный TNF-a или мембраносвязанный или рецепторносвязанный IL-15.

36. Способ in vitro ингибирования роста и/или пролиферации клетки, экспрессирующей CD25, или элиминации клетки, экспрессирующей CD25, заключающийся во введении антитела по любому из пп.1-22 или композиции по п.30 или иммуноконъюгата по п.34 или биспецифической или полиспецифической молекулы по п.35 таким образом, что рост и/или пролиферация клетки подавляется, или происходит киллинг клетки, экспрессирующей CD25, причем клетка, экспрессирующая CD25, представляет собой активированную Т-клетку.

37. Способ лечения или предупреждения отторжения трансплантата, гомологичной болезни ("трансплантат против хозяина"), иммунного, аутоиммунного и воспалительного заболевания, воспалительного или гиперпролиферативного кожного заболевания и лимфоидной опухоли, заключающийся во введении субъекту антитела по любому из пп.1-22 или композиции по п.30 или иммуноконъюгата по п.34 или биспецифической или полиспецифической молекулы по п.35.

38. Способ по п.37, отличающийся тем, что:

(i) отторжение трансплантата представляет собой отторжение аллотрансплантата и ксенотрансплантата у пациентов, оперируемых по поводу трансплантации органа или ткани, например сердца, лёгкого, комбинированной трансплантации сердца, лёгкого, трансплантации трахеи, почки, печени, поджелудочной железы, пищевода, кишечника, кожи, конечности, пуповины, стволовых клеток или инсулоцитов;

(ii) гомологичная болезнь ("трансплантат против хозяина") представляет собой болезнь, выбранную из группы, состоящей из гомологичной болезни в результате переливания крови и гомологичной болезни в результате пересадки костного мозга;

(iii) иммунное, аутоиммунное или воспалительное заболевание представляет собой болезнь, выбранную из группы, состоящей из ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилоартрита, псориатического артрита, диабета типа 1, инсулинзависимого диабета типа 2, рассеянного склероза, системной эритематозной волчанки, тяжёлой псевдопаралитической миастении, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, дерматополимиозита, синдрома Сёгрена, артериитов, включая гигантоклеточный артериит, гипопластической анемии, астмы, склеродермии и увеита,

(iv) воспалительное или гиперпролиферативное кожное заболевание представляет собой болезнь, выбранную из группы, состоящей из псориаза, включая бляшечный псориаз, пустулёзного акродерматита (РРР), эрозивного плоского лишая, буллёзного пемфигоида, врождённого буллёзного эпидермолиза, контактного дерматита и атопического дерматита; или

(iv) лимфоидная опухоль представляет собой опухоль, выбранную из группы, состоящей из Т-клеточного лейкоза, болезни Ходжкина, волосатоклеточного лейкоза или кожной Т-клеточной лимфомы, включая грибовидный микоз и синдром Сезари.

39. Способ лечения или предупреждения злокачественной опухоли, при котором обеспечивается ингибирование инфильтрующих CD25+ регуляторных Т-клеток, причем опухоль выбрана из группы, состоящей из рака желудка, рака пищевода, злокачественной меланомы, колоректального рака, рака поджелудочной железы, рака молочной железы, мелкоклеточного рака лёгкого, немелкоклеточного рака лёгкого, рака шеи, рака яичника и почечноклеточного рака, заключающийся во введении субъекту антитела по любому из пп.1-22 или композиции по п.30 или иммуноконъюгата по п.34 или биспецифической или полиспецифической молекулы по п.35.

40. Способ лечения или предупреждения гематологического заболевания, выбранного из группы, состоящей из Т-клеточного лейкоза/Т-клеточной лимфомы, анапластической гигантоклеточной лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL)/малой лимфоцитарной лимфомы (SLL), периферической Т-клеточной лимфомы и вторичного амилоидоза, заключающийся во введении субъекту антитела по любому из пп.1-22 или композиции по п.30 или иммуноконъюгата по п.34 или биспецифической или полиспецифической молекулы по п.35.

41. Способ детектирования присутствия в образце антигена CD25 или клетки, экспрессирующей CD25, заключающийся в обеспечении контактирования образца с антителом по любому из пп.1-21 в условиях, допускающих образование комплекса между антителом и CD25; и детектировании образовавшегося комплекса.

42. Диагностический набор для обнаружения присутствия в образце антигена CD25 или клетки, экспрессирующей CD25, содержащий антитело по любому из пп.1-22, при необходимости, связанное с детектируемой меткой.

43. Антиидиотипическое антитело, связывающееся с антителом по любому из пп.1-22.

44. Антиидиотипическое антитело по п.43, связывающееся с антителом, содержащим тяжёлую цепь человеческого происхождения и лёгкую каппа-цепь человеческого происхождения, которые содержат в своих вариабельных областях аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 6 и 8, SEQ ID NO: 14 и 16, SEQ ID NO: 2 и 4 или SEQ ID NO: 10 и 12 соответственно

45. Применение антиидиотипического антитела по п.43 или 44 для детектирования уровня человеческого моноклонального антитела против CD25 в образце.