(57) 1. Белок слияния, включающий полипептид RAGE, непосредственно присоединенный к полипептиду, включающему СН2 домен иммуноглобулина или часть СН2 домена иммуноглобулина, где полипептид RAGE включает сайт связывания лиганда и где белок слияния не содержит шарнирной области Fc иммуноглобулина.
2. Белок слияния по п.1, отличающийся тем, что:
(a) белок слияния включает междоменный линкер, происходящий из RAGE, а не междоменный шарнирный полипептид, происходящий из иммуноглобулина; или
(b) белок слияния включает (i) междоменный линкер RAGE, который разделяет домены V и Cl RAGE, или (ii) линкер, который разделяет домены С1 и С2 RAGE, расположенные в шарнирной области тяжелой цепи иммуноглобулина; или
(c) белок слияния получен удалением шарнирной области Fc иммуноглобулина и заменой ее на полипептид RAGE.
3. Белок слияния по п.1, отличающийся тем, что полипептид RAGE включает междоменный линкер RAGE, присоединенный к иммуноглобулиновому домену RAGE, так что С-концевая аминокислота иммуноглобулинового домена RAGE присоединена к N-концевой аминокислоте междоменного линкера RAGE и С-концевая аминокислота междоменного линкера RAGE непосредственно присоединена к N-концевой аминокислоте полипептида, включающего СН2 домен иммуноглобулина или часть Сн2 домена иммуноглобулина.
4. Белок слияния по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что белок слияния включает первый иммуноглобулиновый домен RAGE и первый междоменный линкер RAGE, присоединенный ко второму иммуноглобулиновому домену RAGE и второму междоменному линкеру RAGE, так что N-концевая аминокислота первого междоменного линкера RAGE присоединена к С-концевой аминокислоте первого иммуноглобулинового домена RAGE, N-концевая аминокислота второго иммуноглобулинового домена RAGE присоединена к С-концевой аминокислоте первого междоменного линкера RAGE, N-концевая аминокислота второго междоменного линкера RAGE присоединена к С-концевой аминокислоте второго иммуноглобулинового домена RAGE и С-концевая аминокислота второго междоменного линкера RAGE непосредственно присоединена к N-концевой аминокислоте иммуноглобулинового домена СН2 или части СН2 домена иммуноглобулина.
5. Белок слияния по п.4, отличающийся тем, что второй междоменный линкер RAGE, непосредственно присоединенный к иммуноглобулиновому домену СН2 или к части иммуноглобулинового домена Сн2, включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, или последовательность, которая на 90% ей идентична, или аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, или последовательность, которая на 90% ей идентична.
6. Белок слияния по пп.1-3, отличающийся тем, что полипептид RAGE представляет собой один иммуноглобулиновый домен RAGE, присоединенный через междоменный линкер RAGE к N-концевой аминокислоте полипептида, включающего СН2 иммуноглобулиновый домен или часть Сн2 домена иммуноглобулина.
7. Белок слияния по п.6, отличающийся тем, что междоменный линкер RAGE, непосредственно присоединенный к СН2 иммуноглобулиновому домену или части СН2 домена иммуноглобулина, включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21, или последовательность, которая на 90% ей идентична, или аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23, или последовательность, которая на 90% ей идентична.
8. Белок слияния по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что сайт связывания лиганда RAGE включает SEQ ID NO: 9 или последовательность, которая на 90% ей идентична, или SEQ ID NO: 10 или последовательность, которая на 90% ей идентична.
9. Белок слияния по п.1, отличающийся тем, что полипептид RAGE включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 или SEQ ID NO: 20.
10. Белок слияния по п.1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность полипептида RAGE представлена в SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 19 или SEQ ID NO: 20.
11. Белок слияния по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что полипептид дополнительно включает СН3 домен иммуноглобулина или его часть.
12. Белок слияния по п.11, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность полипептида, включающая Сн2 домен иммуноглобулина или часть Сн2 домена иммуноглобулина, представляет собой или включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 38.
13. Белок слияния по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что иммуноглобулин представляет собой иммуноглобулин, выбранный из группы, состоящей из IgA, IgD, IgE, IgG и IgM.
14. Белок слияния по п.13, отличающийся тем, что иммуноглобулин выбран из группы, состоящей из IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
15. Белок слияния по п.14, отличающийся тем, что иммуноглобулин представляет собой IgG1.
16. Белок слияния, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37.
17. Белок слияния по п.16, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 34.
18. Белок слияния, кодируемый нуклеиново-кислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 31.
19. Нуклеиновая кислота, кодирующая белок слияния по любому из предшествующих пунктов.
20. Нуклеиновая кислота по п.19, отличающаяся тем, что нуклеиново-кислотная последовательность, кодирующая полипептид RAGE, представляет собой или включает нуклеиново-кислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 29.
21. Нуклеиновая кислота по п.20, включающая нуклеиново-кислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 31.
22. Вектор экспрессии, кодирующий белок слияния по любому из пп.1-18 и/или включающий нуклеиновую кислоту по любому из пп.19-21.
23. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество белка по любому из пп.1-18 в фармацевтическом носителе.
24. Фармацевтическая композиция по п.23, изготовленная в виде инъецируемого раствора или в виде стерильного лиофилизированного порошка.
25. Способ получения белка слияния по любому из пп.1-18, включающий стадию ковалентного присоединения полипептида RAGE к полипептиду, включающему CH2 домен иммуноглобулина или часть СН2 домена иммуноглобулина.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что белок слияния кодируется рекомбинантной конструкцией ДНК.
27. Способ по п.25 или 26, дополнительно включающий стадию встраивания конструкции ДНК в вектор экспрессии.
28. Способ по п.27, дополнительно включающий трансфекцию вектора экспрессии в клетку-хозяина.
29. Применение белка слияния по любому из пп.1-18 для получения лекарственного средства для лечения RAGE-опосредованного заболевания у субъекта.
30. Применение по п.29, где лекарственное средство предназначено для внутривенного, внутрибрюшинного или подкожного введения субъекту белка слияния на основе RAGE.
31. Применение по п.29 или 30, где лекарственное средство предназначено для лечения симптома диабета или симптома поздних осложнений диабета.
32. Применение по п.31, где симптом диабета или поздних осложнений диабета включает диабетическую нефропатию, диабетическую ретинопатию, диабетическое изъязвление стопы, сердечно-сосудистое осложнение или диабетическую нейропатию.
33. Применение по п.29 или 30, где лекарственное средство предназначено для лечения амилоидоза, болезни Альцгеймера, рака, почечной недостаточности, воспаления, ассоциированного с аутоиммунным процессом, воспалительным заболеванием кишечника, ревматоидным артритом, псориазом, рассеянным склерозом, гипоксией, инсультом, сердечным приступом, геморрагическим шоком, сепсисом, трансплантацией органа или плохим заживлением раны.
34. Клетка-хозяин для продуцирования белка слияния по п.1, где клетка трансформирована вектором экспрессии по п.22.
35. Клетка-хозяин по п.34, отличающаяся тем, что клетка-хозяин представляет собой клетку яичника китайского хомячка.
|
