(57) 1. Человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые специфически связываются с рецептором инсулиноподобного фактора роста I (IGF-IR), где указанное антитело или его часть ингибируют индуцированное IGF-IR фосфорилирование тирозина.
2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1, обладающие по меньшей мере одним из следующих свойств:
a) не связываются с IGF-IR мыши, крысы, собаки или кролика;
b) связываются с IGF-IR макаки-крабоеда или макаки-резус, но не связываются с IGF-IR мартышки;
c) ингибируют связывание IGF-I или IGF-II с IGF-IR;
d) обладают избирательностью в отношении IGF-IR, которая по меньшей мере в 50 раз превышает их избирательность в отношении рецептора инсулина;
e) ингибируют рост опухоли in vivo;
f) вызывают элиминацию IGF-IR с поверхности клетки при инкубации с клеткой, экспрессирующей IGF-IR;
g) имеют Kd для IGF-IR, составляющую 8´10-9 М или менее; и
h) имеет Koff для IGF-IR, составляющую 10-4 или менее.
3. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.2, обладающие всеми указанными свойствами.
4. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.2, которые ингибируют связывание IGF-I или IGF-II с IGF-IR, имеют Kd для IGF-IR, составляющую 8´10-9 М или менее, и обладают избирательностью в отношении IGF-IR, которая по меньшей мере в 50 раз превышает их избирательность в отношении рецептора инсулина.
5. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1 или 2, обладающие по меньшей мере одним из следующих свойств:
a) перекрестно конкурируют за связывание с IGF-IR с антителом, выбранным из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
b) связываются с тем же самым эпитопом IGF-IR, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
c) имеют, по существу, такую же Kd для IGF-IR, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3; и
d) имеют, по существу, такую же Koff для IGF-IR, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3.
6. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-5, ингибирующие связывание IGF-IR с IGF-I или IGF-II с IC50, составляющей менее 100 нМ.
7. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-6, содержащие вариабельную область легкой цепи, которая содержит не более 10 изменений аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном VK A30, А27 или O12 зародышевой линии.
8. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-6, содержащие вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит не более 8 изменений аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном VH DP47, DP35, DP71 или VIV-4 зародышевой линии.
9. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-8, содержащие аминокислотную последовательность по меньшей мере одной CDR вариабельной области, выбранной из группы, состоящей из:
а) вариабельной области легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 22, или аминокислотную последовательность, имеющую 1-10 аминокислотных инсерций, делеций или замен в указанных последовательностях; и
b) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24, или аминокислотную последовательность, имеющую 1-10 аминокислотных инсерций, делеций или замен в указанных последовательностях.
10. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-8, содержащие аминокислотную последовательность по меньшей мере одной CDR вариабельной области, выбранной из группы, состоящей из:
a) вариабельной области легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
b) вариабельной области тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3.
11. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.9, содержащие все аминокислотные последовательности CDR вариабельной области, выбранной из группы, состоящей из:
a) вариабельной области легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 22, или аминокислотную последовательность, имеющую 1-10 аминокислотных инсерций, делеций или замен в указанных последовательностях; и
b) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24, или аминокислотную последовательность, имеющую 1-10 аминокислотных инсерций, делеций или замен в указанных последовательностях.
12. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.10, содержащие все аминокислотные последовательности CDR вариабельной области, выбранной из группы, состоящей из:
а) вариабельной области легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
b) вариабельной области тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3; и
c) вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3.
13. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.11, отличающиеся тем, что вариабельная область легкой цепи антитела содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 22, или аминокислотную последовательность, имеющую 1-10 аминокислотных инсерций, делеций или замен в указанных последовательностях.
14. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.11, отличающиеся тем, что вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 24, или аминокислотную последовательность, имеющую 1-10 аминокислотных инсерций, делеций или замен в указанных последовательностях.
15. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1, отличающиеся тем, что указанное антитело выбрано из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3.
16. Моноклональное антитело по любому из пп.1-15, отличающееся тем, что указанное антитело относится к изотипу IgG, IgM, IgE, IgA или IgD.
17. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по любому из пп.1-15, представляющие собой Fab-фрагмент, F(ab')2-фрагмент, Fv-фрагмент, одноцепочечное антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело или биспецифическое антитело.
18. Моноклональное антитело по п.1, содержащее тяжелую и легкую цепи, причем аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи выбраны из группы, состоящей из:
a) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 без сигнальной последовательности и аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47 без сигнальной последовательности и
b) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49 без сигнальной последовательности и аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 51 без сигнальной последовательности.
19. Моноклональное антитело по п.1, содержащее тяжелую и легкую цепи, причем аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи выбраны из группы, состоящей из:
a) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи 2.12.1 и
b) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи 2.13.2.
20. Моноклональное антитело по п.1, содержащее аминокислотную последовательность, содержащую CDR антител 2.12.1 или 2.13.2, или последовательности CDR указанных антител, имеющие не более 5 консервативных аминокислотных замен.
21. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с IGF-IR и ингибирует индуцированное IGF-IR фосфорилирование тирозина, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности SEQ ID NO: 2.
22. Моноклональное антитело по п.21, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 4 или указанную последовательность, содержащую вплоть до 5 консервативных аминокислотных замен, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 2 или указанную последовательность, содержащую вплоть до 5 аминокислотных замен.
23. Моноклональное антитело по п.22, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 4 и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 2.
24. Моноклональное антитело по любому из пп.21-23, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 без сигнальной последовательности и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51 без сигнальной последовательности.
25. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с IGF-IR и ингибирует индуцированное IGF-IR фосфорилирование тирозина, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, содержащей CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности SEQ ID NO: 8, и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, содержащей CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности SEQ ID NO: 6.
26. Моноклональное антитело по п.25, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 8 или указанную последовательность, содержащую вплоть до 5 консервативных аминокислотных замен, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 6 или указанную последовательность, содержащую вплоть до 5 аминокислотных замен.
27. Моноклональное антитело по п.26, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 8 и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность вариабельной области SEQ ID NO: 6.
28. Моноклональное антитело по любому из пп.25-27, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45 без сигнальной последовательности и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47 без сигнальной последовательности.
29. Фармацевтическая композиция, содержащая моноклональное антитело или его антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-28 и фармацевтически приемлемый носитель.
30. Фармацевтическая композиция по п.29, дополнительно содержащая антинеопластическое, химиотерапевтическое или противоопухолевое средство.
31. Способ получения моноклонального анти-IGF-IR-антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп.1-28, предусматривающий следующие стадии:
a) иммунизацию трансгенного млекопитающего, отличного от человека, которое способно продуцировать человеческие антитела иммуногеном, содержащим IGF-IR;
b) выдерживание трансгенного животного в течение периода, необходимого для созревания у него иммунного ответа на IGF-IR; и
c) выделение антитела или его антигенсвязывающей части.
32. Выделенная линия клеток, которая продуцирует моноклональное антитело по любому из пп.1-28.
33. Линия клеток по п.32, отличающаяся тем, что продуцирует моноклональное антитело, выбранное из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3, или антитело, которое имеет те же самые аминокислотные последовательности, что и указанные антитела.
34. Способ диагностики наличия или локализации опухоли, экспрессирующей IGF-IR, у нуждающегося в этом человека, предусматривающий стадии:
a) инъецирования человеку антитела по любому из пп.1-28;
b) определения экспрессии IGF-IR у человека путем определения локализации связывания антитела;
c) сравнения экспрессии в части (b) с экспрессией у нормального контрольного субъекта-человека или со стандартом и
d) диагностирования наличия или локализации опухоли.
35. Способ лечения рака у человека, включающий стадию введения человеку антитела или его антигенсвязывающей части по любому из пп.1-28 в количестве, эффективном для лечения указанного рака.
36. Способ по п.34 или 35, дополнительно предусматривающий стадию введения человеку антинеопластического, противоопухолевого, антиангиогенного или химиотерапевтического средства.
37. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть или легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть моноклонального антитела по любому из пп.1-28.
38. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.37, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере одну CDR вариабельной области тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
b) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей три CDR вариабельной области тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
c) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
d) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере одну CDR вариабельной области легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
e) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей три CDR вариабельной области легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
f) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть антитела, выбранного из группы, состоящей из 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 и 4.17.3;
g) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные области тяжелой или легкой цепей, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 и 22 и 24; и
h) последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21 и 23.
39. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.37 или 38, при необходимости содержащий последовательность регуляции экспрессии, функционально связанную с молекулой нуклеиновой кислоты.
40. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.39 или молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.37 или 38.
41. Способ получения моноклонального анти-IGF-IR-антитела или его антигенсвязывающей части, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п.40 или линии клеток по п.32 в подходящих условиях и выделение указанного антитела или его антигенсвязывающей части.
42. Трансгенное животное, отличное от человека, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.37 или 38, экспрессирующее указанную нуклеиновую кислоту.
43. Способ лечения рака у человека, включающий стадию введения человеку эффективного количества молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.37 или 38, с обеспечением ее экспрессии.
|
