(57) 1. Изолированное моноклональное антитело или фрагмент антитела, избирательно связывающие клеточный полипептид СА 125/0772Р по сравнению с культуральным полипептидом СА 125/0772Р, причем антитело или его фрагмент связывают повторяющийся участок указанного полипептида, представленный аминокислотами 14-452 в последовательности полипептида SEQ ID № 1.
2. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, которые при проведении сравнительного анализа методом конкурентного ELISA демонстрируют менее чем 25, менее чем 20, менее чем 15, менее чем 10 или менее чем 5% ингибирования связывания указанного повторяющегося участка в присутствии 25-кратного (по весу) избытка культурального СА 125/0772Р по сравнению с клеточным СА 125/0772Р.
3. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, которые при проточном цитометрическом анализе демонстрируют IC50, измеренную по проценту ингибирования положительных клеток, при концентрации культурального СА 125/0772Р не менее 0,05, не менее 0,25, не менее 0,5, не менее 0,75 или не менее 1,0 мг/мл.
4. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, которые связывают клеточный полипептид с последовательностью SEQ № 1, без поддающегося обнаружению связывания культурального СА 125/0772Р.
5. Изолированное антитело по п.1, являющееся антителом класса IgG, предпочтительно изотипа IgG1.
6. Изолированное антитело по п.1, являющееся химерным моноклональным антителом.
7. Изолированное антитело по п.6, содержащее константные участки Cg1 или Сg4.
8. Изолированное антитело по п.1, являющееся гуманизированным моноклональным антителом.
9. Изолированное антитело по п.1, являющееся человеческим моноклональным антителом.
10. Изолированное антитело по п.1, являющееся биспецифическим или мультиспецифическим антителом.
11. Изолированное антитело по п.1, являющееся химерным антителом.
12. Изолированное антитело по п.1, являющееся одноцепочечным антителом, дисульфид-связанным Fvs, однониточным Fvs или антиидиотипическим антителом.
13. Фрагмент антитела по п.1, являющийся фрагментом Fab, фрагментом F(ab')2, фрагментом, содержащим VL, фрагментом, содержащим VH, или фрагментом, содержащим комплементарно определяющий участок (CDR).
14. Антитело по п.1, продуцируемое гибридомой 4Е7 (АТССÒ № РТА-5109), 7А11 (АТССÒ № РТА-5110), 7С6 (АТССÒ № РТА-5111), 7F10 (АТССÒ № РТА-5112), 7G10 (АТССÒ № РТА-5245), 7Н1 (АТССÒ № РТА-5114), 8А1 (АТССÒ № РТА-5115), 8В5 (АТССÒ№ РТА-5116), 8С3 (АТССÒ № РТА-5246), 8Е3 (АТССÒ № РТА-5118), 8G9 (АТССÒ № РТА-5119), 15С9 (АТССÒ № РТА-5106), 16С7 (АТССÒ № РТА-5107), 16Н9 (АТССÒ № РТА-5108), 117.1 (АТССÒ № РТА-4567), 325.1 (АТССÒ № РТА-5120), 368.1 (АТССÒ № РТА-4568), 446.1 (АТССÒ № РТА-5549), 501.1 (АТССÒ № РТА-4569), 621.1 (АТССÒ № РТА-5121), 633.1 (АТССÒ № РТА-5122), 654.1 (АТССÒ № РТА-5247), 725.1 (АТССÒ № РТА-5124) или 776.1 (АТССÒ № РТА-4570).
15. Гибридома, продуцирующая антитело по п.1, выбранная из группы, включающей 4Е7 (АТССÒ № РТА-5109), 7А11 (АТССÒ № РТА-5110), 7С6 (АТССÒ № РТА-5111), 7F10 (АТССÒ № РТА-5112), 7G10 (АТССÒ № РТА-5245), 7Н1 (АТССÒ № РТА-5114), 8А1 (АТССÒ № РТА-5115), 8В5 (АТССÒ № РТА-5116), 8С3 (АТССÒ № РТА-5246), 8Е3 (АТССÒ № РТА-5118), 8G9 (АТССÒ № РТА-5119), 15С9 (АТССÒ № РТА-5106), 16С7 (АТССÒ№ РТА-5107), 16Н9 (АТССÒ № РТА-5108), 117.1 (АТССÒ № РТА-4567), 325.1 (АТССÒ № РТА-5120), 368.1 (АТССÒ № РТА-4568), 446.1 (АТССÒ № РТА-5549), 501.1 (АТССÒ № РТА-4569), 621.1 (АТССÒ № РТА-5121), 633.1 (АТССÒ № РТА-5122), 654.1 (АТССÒ № РТА-5247), 725.1 (АТССÒ № РТА-5124), 776.1 (АТССÒ № РТА-4570).
16. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID № 27, 29, 31, 33, 54 или 56.
17. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, содержащие вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID № 28, 30, 32, 34, 53 или 55.
18. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.16, 17, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 27, и вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 28.
19. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.16, 17, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 29, и вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 30.
20. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.16, 17, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 31, и вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 32.
21. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.16, 17, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 33, и вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 34.
22. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.16, 17, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 54, и вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 53.
23. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.16, 17, содержащие вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 56, и вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность № 55.
24. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельный участок легкой или тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела по любому из пп.16, 17.
25. Молекула нуклеиновой кислоты по п.24, содержащая нуклеотидные последовательности № 35, 36, 37, 38,39, 40, 41, 42, 52, 57, 58 или 59.
26. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, связывающее клеточный полипептид с последовательностью SEQ № 1, с Kd менее приблизительно 100, менее приблизительно 10, менее приблизительно 1 нм, менее приблизительно 100 или менее приблизительно 10 пм, по измерению методом анализа аффинности BIAcore.
27. Антитело или фрагмент антитела по п.1, модифицированные аминокислотными заменами, удалениями или добавлениями либо их комбинацией и обладающие одинаковой или повышенной аффинностью к клеточному СА 125/0772Р по сравнению с соответствующими немодифицированными антителом или фрагментом антитела.
28. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, модифицированные аминокислотными заменами, удалениями или добавлениями либо их комбинацией и демонстрирующие аналогичное или повышенное время полужизни в сравнении с соответствующими немодифицированными антителом или фрагментом антитела.
29. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, опосредующие лизис СА 125/0772Р-положительных опухолевых клеток при анализе методом ADCC.
30. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.29, опосредующие не менее чем 10%-ный лизис СА 125/0772Р-положительных опухолевых клеток при анализе методом ADCC при отношении эффектор:мишень 50:1, отношении эффектор:мишень 25:1 или отношении эффектор:мишень 12,5:1 при концентрации антитела или фрагмента антитела 5,0 мкг/мл.
31. Изолированное антитело или фрагмент антитела по любому из пп.29, 30, опосредующие не менее чем 10%-ный лизис СА 125/0772Р-положительных опухолевых клеток при анализе методом ADCC при отношении эффектор:мишень 12,5:1 при концентрации антитела или фрагмента антитела 50,0 нг/мл.
32. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, опосредующие лизис СА 125/0772Р-положительных опухолевых клеток при анализе комплементзависящей цитотоксичности (CDC).
33. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.32, опосредующие лизис в диапазоне от 15% при концентрации антитела или фрагмента антитела 5 мкг/мл до 95% при концентрации антитела или фрагмента антитела 0,1 мкг/мл.
34. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, ингибирующие рост СА 125/0772Р-положительных опухолевых клеток.
35. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или фрагмент антитела по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель.
36. Изделие, включающее в себя упаковочный материал и фармацевтическую композицию по п.35 в форме, пригодной для введения пациенту.
37. Слитый полипептид, содержащий антитело или фрагмент антитела по п.1, функционально связанные с гетерологичным агентом.
38. Способ идентификации антитела или фрагмента антитела по п.1, включающий:
(a) инкубирование антитела или фрагмента антитела с пептидом, содержащим клеточный СА 125/0772Р, в присутствии культурального СА 125/0772Р в условиях, обеспечивающих связывание антитела или фрагмента антитела с указанным пептидом, содержащим клеточный СА 125/0772Р, или культуральным СА 125/0772Р;
(b) удаление культурального СА 125/0772Р и антитела или фрагмента антитела, не связанных с пептидом, содержащим клеточный СА 125/0772Р;
(c) измерение количества антитела или фрагмента антитела, связанных с пептидом, содержащим клеточный СА 125/0772Р; и
(d) сравнение количества антитела или фрагмента антитела, полученного согласно (с), с количеством антитела или фрагмента антитела, связывающих пептид, содержащий клеточный СА 125/0772Р, в отсутствие культурального СА 125/0772Р.
39. Способ по п.38, в котором пептид, содержащий клеточный СА 125/0772Р, иммобилизован на твердой поверхности.
40. Способ по п.39, выполняемый в формате ELISA.
41. Способ по п.38, в котором культуральный СА 125/0772Р и пептид, содержащий клеточный СА 125/0772Р, используют в соотношении 25:1 (по весу) культурального СА 125/0772Р к пептиду, содержащему клеточный СА 125/0772Р.
42. Способ идентификации антитела или фрагмента антитела по п.1, включающий:
(a) обеспечение контактирования антитела или фрагмента антитела с пептидом, содержащим клеточный СА 125/0772Р, в присутствии культурального СА 125/0772Р в условиях, обеспечивающих связывание пептида, содержащего клеточный СА 125/0772Р, с антителом или фрагментом антитела;
(b) удаление несвязанного пептида, содержащего клеточный СА 125/0772Р;
(c) измерение количества пептида, содержащего клеточный СА 125/0772Р, связанного антителом или фрагментом антитела и
(d) сравнение количества пептида, полученного на стадии (с), с количеством пептида, содержащего клеточный СА 125/0772Р, которое антитело или фрагмент антитела связывают в отсутствие культурального СА 125/0772Р.
43. Способ по п.42, в котором количество культурального СА 125/0772Р является приблизительно 25-кратным (по весу) избыточным количеством.
44. Способ по п.42, в котором антитело или фрагмент антитела иммобилизированы на твердой поверхности.
45. Способ по п.44, выполняемый в формате ELISA.
46. Способ идентификации антитела или фрагмента антитела по п.1, включающий:
(a) обеспечение контактирования антитела или фрагмента антитела с клеткой, экспрессирующей СА 125/0772Р, в присутствии определенного количества культурального СА 125/0772Р в условиях, обеспечивающих связывание СА 125/0772Р с антителом или фрагментом антитела;
(b) удаление несвязанных клеток;
(c) измерение количества клеток, экспрессирующих СА 125/0772Р, связанных антителом или фрагментом антитела, и
(d) сравнение количества клеток согласно (с) с количеством клеток, экспрессирующих СА 125/0772Р, которые связались с антителом или фрагментом антитела в отсутствие указанного определенного количества культурального СА 125/0772Р.
47. Способ по п.46, в котором количество культурального СА 125/0772Р составляет не менее 0,5 мг/мл.
48. Способ по п.46, в котором измерения выполняют методом проточной цитометрии или сортировки клеток, активированных флуоресценцией.
49. Гибридома, продуцирующая антитело по п.1.
50. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.1, конъюгированные с цитотоксическим агентом.
51. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.50, в котором цитотоксический агент является радиоизотопом.
52. Изолированное антитело или фрагмент антитела по п.51, в котором радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 125I, 131I, 111In, 99mTc и 90Y.
53. Моноклональное антитело по п.14, конъюгированное с цитотоксическим агентом.
54. Моноклональное антитело по п.53, в котором цитотоксический агент является радиоизотопом.
55. Моноклональное антитело по п.54, в котором радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 125I, 131I, 111In, 99mТс и 90Y.
56. Фармацевтическая композиция по п.35, в которой антитело или фрагмент конъюгированы с цитотоксическим агентом.
57. Фармацевтическая композиция по п.56, в которой цитотоксическим агентом является радиоизотоп.
58. Фармацевтическая композиция по п.57, в которой радиоизотоп выбран из группы, состоящей из 125I, 131I, 111In, 99mTc и 90Y.
59. Моноклональное антитело по п.1, выбранное из группы, состоящей из 325.1 (АТССÒ № РТА-5120), 621.1 (АТССÒ № РТА-5121), 633.1 (АТССÒ № РТА-5122), 654.1 (АТССÒ № РТА-5247), 725.1 (АТССÒ № РТА-5124), 8G9 (АТССÒ № РТА-5119), 7F10 (АТССÒ № РТА-5112), 8А1 (АТССÒ № РТА-5115), 8С3 (АТССÒ № РТА-5246), 15С9 (АТССÒ № РТА-5106), 8Е3 (АТССÒ № РТА-5118), 8В5 (АТССÒ № РТА-5116), 7G10 (АТССÒ № РТА-5245), 16С7 (АТССÒ № РТА-5107), 7С6 (АТССÒ № РТА-5111), 7Н1 (АТССÒ № РТА-5114), 16Н9 (АТССÒ № РТА-5108), 7А11 (АТССÒ № РТА-5110), 4Е7 (АТССÒ № РТА-5109), 117.1 (АТССÒ № РТА-4567), 368.1 (АТССÒ № РТА-4568), 446.1 (АТССÒ № РТА-5540), 501.1 (АТССÒ № РТА-4509) и 776.1 (АТССÒ № РТА-4570), или фрагмент данного антитела.
60. Фармацевтическая композиция, содержащая моноклональное антитело по п.59 либо связывающий антиген фрагмент данного антитела и фармацевтически приемлемый носитель.
61. Применение антитела или фрагмента антитела по п.1 для изготовления лекарства для лечения заболеваний, связанных с СА 125/0772Р.
62. Применение по п.61, при котором заболеванием, связанным с СА 125/0772Р, является заболевание, связанное с пролиферацией клеток.
63. Применение по п.61, при котором антитело выбрано из группы, состоящей из 325.1, 621.1, 633.1, 654.1, 725.1, 8G9, 7F10, 8А1, 8С3, 15С9, 8Е3, 8В5, 7G10, 16С7, 7С6, 7Н1, 16Н9, 7А11, 4Е7, 117.1, 368.1, 446.1, 501.1 и 776.1.
64. Применение по любому из пп.61-63, при котором антитело или фрагмент антитела конъюгированы с цитотоксическим агентом.
|
