(57) 1. Способ получения мультиспецифического антитела, включающий стадии, на которых:
A) трансформируют клетку-хозяина векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют:
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь первого антитела, которое специфически связывается с первым антигеном; и
б) вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь второго антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном и в котором вариабельные домены VL и VH во второй легкой цепи и второй тяжелой цепи второго антитела заменены друг на друга; и
в котором:
I) в константном домене CL первой легкой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K), аргинин (R) или гистидин (H) (нумерация согласно Кэботу) и в котором в константном домене CH1 первой тяжелой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 147 или аминокислота в положении 213 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота); или
II) в константном домене CL второй легкой цепи, указанной в подпункте б), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K), аргинин (R) или гистидин (H) (нумерация согласно Кэботу) и в котором в константном домене CH1 второй тяжелой цепи, указанной в подпункте б), аминокислота в положении 147 или аминокислота в положении 213 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота);
Б) культивируют клетку-хозяина в условиях, обеспечивающих синтез указанной молекулы антитела; и
B) выделяют указанную молекулу антитела из указанной культуральной среды.
2. Способ по п.1, где в константном домене CL первой легкой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K) или аргинин (R).
3. Способ по п.1, где в константном домене CL второй легкой цепи, указанной в подпункте б), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K) или аргинин (R).
4. Способ по п.1, в котором у указанной молекулы антитела в константном домене CL первой легкой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K) или аргинин (R) (нумерация согласно Кэботу),и в котором в константном домене CH1 первой тяжелой цепи, указанной в (а), аминокислота в положении 147 или аминокислота в положении 213 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота).
5. Способ по п.1 или 4, в котором у указанной молекулы антитела в константном домене CL первой легкой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K), аргинин (R) или гистидин (H) (нумерация согласно Кэботу) и в котором в константном домене CH1 первой тяжелой цепи, указанной в (а), аминокислота в положении 147 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота).
6. Способ по п.4, в котором у указанной молекулы антитела в константном домене CL первой легкой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K), аргинин (R) или гистидин (H) (нумерация согласно Кэботу) (в одном предпочтительном варианте независимо на лизин (K) или аргинин (R)) и дополнительно аминокислота в положении 123 заменена независимо на лизин (K), аргинин (R) или гистидин (H) (нумерация согласно Кэботу) и в котором в константном домене CH1 первой тяжелой цепи, указанной в (а), аминокислота в положении 147 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота) и аминокислота в положении 213 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота).
7. Способ по п.1, в котором у указанной молекулы антитела в константном домене CL второй легкой цепи, указанной в подпункте б), аминокислота в положении 124 заменена независимо на лизин (K), аргинин (R) или гистидин (H) (нумерация согласно Кэботу) (в одном предпочтительном варианте независимо на лизин (K) или аргинин (R)) и в котором в константном домене CH1 второй тяжелой цепи, указанной в (б), аминокислота в положении 147 или аминокислота в положении 213 заменена независимо на глутаминовую кислоту (E) или аспарагиновую кислоту (D) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота).
8. Способ по п.4, в котором в константном домене CL первой легкой цепи, указанной в подпункте а), аминокислота в положении 124 заменена на лизин (K) (нумерация согласно Кэботу) и дополнительно аминокислота в положении 123 заменена на лизин (K) (нумерация согласно Кэботу) и в котором в константном домене CH1 первой тяжелой цепи, указанной в (а), аминокислота в положении 147 заменена на глутаминовую кислоту (E) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота) и аминокислота в положении 213 заменена на глутаминовую кислоту (E) (нумерация согласно EU-индексу Кэбота).
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что для стимулирования формирования мультиспецифического антитела в CH3 домене одной тяжелой цепи, который соприкасается в процессе формирования антитела с CH3 доменом другой тяжелой цепи, аминокислотный остаток, имеющий меньшую по объему боковую цепь, выбранный из группы, состоящей из аланина (А), серина (S), треонина (T) и валина (V), заменяют на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, выбранный из группы, включающей аргинин (R), фенилаланин (F), тирозин (Y) и триптофан (W), с образованием выпуклости на поверхности CH3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности CH3 домена другой тяжелой цепи, а в CH3 домене другой тяжелой цепи, который соприкасается в процессе формирования антитела с CH3 доменом одной указанной выше тяжелой цепи, аминокислотный остаток, имеющий большую по объему боковую цепь, выбранный из группы, включающей аргинин (R), фенилаланин (F), тирозин (Y) и триптофан (W), заменяют на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, выбранный из группы, состоящей из аланина (А), серина (S), треонина (T) и валина (V), с образованием полости на поверхности раздела CH3-домена другой тяжелой цепи, в которую может помещаться выпуклость на поверхности раздела CH3-одной тяжелой цепи.
10. Способ по п.8, отличающийся тем, что оба CH3-домена дополнительно изменены путем интродукции цистеина (С) в качестве аминокислоты в соответствующие положения каждого CH3-домена таким образом, чтобы мог образоваться дисульфидный мостик между обоими CH3-доменами.
11. Экспрессионный вектор, содержащий молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотные последовательности легких и тяжелых цепей мультиспецифичного антитела, охарактеризованного в пп.1-10, который обладает способностью экспрессировать указанную нуклеиновую кислоту в клетке-хозяине.
12. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело, полученное способом по одному из пп.1-10, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

---