(57) 1. Биспецифическое моновалентное диатело, способное специфично связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3, содержащее первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:
A) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VL_CD3) (SEQ ID NO: 5); и субдомен (1В), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VH_gpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, представляющий собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2);
B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VL_gpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VH_CD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, представляющий собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; и при этом:
(a) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом CD3; и
(b) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом gpA33.
2. Биспецифическое моновалентное диатело по п.1, в котором указанная первая полипептидная цепь содержит альбуминсвязывающий домен (SEQ ID NO: 34), причем указанный альбуминсвязывающий домен расположен на С-конце по отношению к указанному домену 2 и отделен от указанного домена 2 линкером 3 (SEQ ID NO: 32).
3. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело, способное специфично связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3 и содержит домен Fc IgG, содержащее первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь и третью полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом и указанная первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:
А) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VL_gpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VH_CD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, представляющий собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и
iii) домен 3, содержащий субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39), и субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG; причем указанные домены 3 и 2 отделены друг от друга спейсерным пептидом, характеризующимся последовательностью GGG (линкер 5);
B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VL_CD3) (SEQ ID NO: 5), и субдомен (1В), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VH_gpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, представляющий собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; и
C) третья полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу домен 3, содержащий:
(1) субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39); и
(2) субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;
и при этом:
(a) указанные полипептидные части доменов Fc IgG указанных первой и третьей полипептидной цепей образуют указанный домен Fc IgG;
(b) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом gpA33; и
(c) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом CD3.
4. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело, способное специфично связываться с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и с эпитопом CD3 и содержит домен Fc IgG, содержащее первую полипептидную цепь, вторую полипептидную цепь и третью полипептидную цепь, причем указанная первая и вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом и указанные первая и третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом, и при этом:
A) первая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 3, содержащий субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39), и субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;
ii) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VL_gpA33) (SEQ ID NO: 26), и субдомен (1B), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VH_CD3) (SEQ ID NO: 25), причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
причем указанные домены 1 и 3 отделены друг от друга спейсерным пептидом (линкер 4) (SEQ ID NO: 38);
iii) домен 2, представляющий собой Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3) или K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и
B) вторая полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу:
i) домен 1, содержащий субдомен (1А), который содержит домен VL моноклонального антитела, способного связываться с CD3 (VL_CD3) (SEQ ID NO: 5), и субдомен (1В), который содержит домен VH моноклонального антитела, способного связываться с gpA33 (VH_gpA33) (SEQ ID NO: 27); причем указанные субдомены (1А) и (1В) отделены друг от друга пептидным линкером (SEQ ID NO: 1);
ii) домен 2, представляющий собой K-спиральный домен (SEQ ID NO: 4) или Е-спиральный домен (SEQ ID NO: 3), причем указанный домен 2 отделен от указанного домена 1 пептидным линкером (SEQ ID NO: 2); и причем указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи не представляют собой оба Е-спиральных домена или оба K-спиральных домена; и
C) третья полипептидная цепь содержит в направлении от N-конца к С-концу домен 3, содержащий:
(1) субдомен (3А), который содержит цистеинсодержащий пептид (пептид 1) (SEQ ID NO: 39); и
(2) субдомен (3В), который содержит полипептидную часть домена Fc IgG, имеющую домены СН2 и СН3 домена Fc иммуноглобулина IgG;
и при этом:
(a) указанные полипептидные части доменов Fc IgG указанных первой и третьей полипептидной цепей образуют указанный домен Fc IgG;
(b) указанный домен VL указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VH указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом gpA33; и
(c) указанный домен VH указанной первой полипептидной цепи и указанный домен VL указанной второй полипептидной цепи образуют антигенсвязывающий домен, способный специфично связываться с эпитопом CD3.
5. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3, 4, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит последовательность, отличную от последовательности указанного субдомена (3В) указанной третьей полипептидной цепи.
6. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по п.5, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 и указанный субдомен (3В) указанной третьей полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41.
7. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по п.5, в котором указанный субдомен (3В) указанной первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 и указанный субдомен (3В) указанной третьей полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.
8. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-7, в котором указанный домен 3 указанной первой полипептидной цепи и/или указанный домен 3 указанной третьей полипептидной цепи содержит вариантную последовательность СН2-СН3 относительно последовательности СН2-СН3 области Fc дикого типа, которая проявляет сниженное связывание с рецептором Fcg относительно связывания, проявляемого указанной областью Fc дикого типа.
9. Биспецифическое моновалентное диатело по любому из пп.1, 2 или биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-8, в котором указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи содержит Е-спираль (SEQ ID NO: 3) и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи содержит K-спираль (SEQ ID NO: 4).
10. Биспецифическое моновалентное диатело по любому из пп.1, 2 или биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-8, в котором указанный домен 2 указанной первой полипептидной цепи содержит K-спираль (SEQ ID NO: 4) и указанный домен 2 указанной второй полипептидной цепи содержит Е-спираль (SEQ ID NO: 3).
11. Биспецифическое моновалентное диатело, способное специфично связываться с эпитопом CD3 и с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33), содержащее:
(1) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30; или
(2) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;
причем указанная первая и указанная вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом дисульфидной связью.
12. Биспецифическое моновалентное Fc-диатело, способное специфично связываться с эпитопом CD3 и с эпитопом гликопротеина А33 (gpA33) и содержит домен Fc IgG, содержащее:
(1) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, и третью полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46; или
(2) первую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, вторую полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и третью полипептидную цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46;
причем указанная первая и указанная вторая полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом первой дисульфидной связью и указанная первая и указанная третья полипептидные цепи ковалентно связаны друг с другом второй дисульфидной связью.
13. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33, содержащая биспецифическое моновалентное диатело по любому из пп.1, 2 или 9-11 или биспецифическое моновалентное Fc-диатело по любому из пп.3-10 или 12; и физиологически приемлемый носитель.
14. Применение биспецифического моновалентного диатела по любому из пп.1, 2 или 9, 10 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
15. Применение биспецифического моновалентного диатела по п.11 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
16. Применение биспецифического моновалентного Fc-диатела по любому из пп.3-10 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
17. Применение биспецифического моновалентного Fc-диатела по п.12 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
18. Применение фармацевтической композиции по п.13 в лечении злокачественной опухоли, характеризующейся экспрессией gpA33.
19. Применение по любому из пп.14-18, где указанная злокачественная опухоль представляет собой колоректальный рак, рак толстой кишки, рак желудка или рак поджелудочной железы.
20. Полинуклеотид, который кодирует указанную первую полипептидную цепь биспецифического моновалентного диатела по любому из пп.1, 2 или 9-11.
21. Полинуклеотид, который кодирует указанную вторую полипептидную цепь биспецифического моновалентного диатела по любому из пп.1, 2 или 9-11.
22. Полинуклеотид, который кодирует указанную первую полипептидную цепь биспецифического моновалентного Fc-диатела по любому из пп.3-10 или 12.
23. Полинуклеотид, который кодирует указанную вторую полипептидную цепь биспецифического моновалентного Fc-диатела по любому из пп.3-10 или 12.

---