(57) 1. Химерный белок, содержащий белок фактора VIII (Ф VIII) и фрагмент фактора Вилле­бранда (ФВ), содержащий домен D' и домен D3 ФВ, при этом указанный фрагмент ФВ и указанный белок Ф VIII соединены друг с другом посредством взаимодействия, которое является достаточно сильным для предотвращения диссоциации указанного фрагмента ФВ от указанного белка Ф VIII в присутствии эндогенного ФВ.
2. Химерный белок по п.1, отличающийся тем, что указанное взаимодействие между указанным фрагментом ФВ и указанным белком Ф VIII является более сильным, чем природное нековалентное взаимодействие между белком Ф VIII и фрагментом ФВ.
3. Химерный белок по любому из пп.1, 2, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ модифицирован с целью усиления взаимодействия между указанным фрагментом ФВ и указанным белком Ф VIII.
4. Химерный белок по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ модифицирован с целью усиления аффинности связывания указанного фрагмента ФВ с указанным белком Ф VIII.
5. Химерный белок по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит мутацию, при этом указанная мутация включает мутацию одной или более аминокислоты, которая влияет на аффинность связывания указанного фрагмента ФВ с указанным белком Ф VIII.
6. Химерный белок по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит мутацию аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 764 последовательности SEQ ID NO: 2, мутацию аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 773 последовательности SEQ ID NO: 2, или обе указанные мутации.
7. Химерный белок по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит остаток серина в положении, соответствующем положению 764 последовательности SEQ ID NO: 2.
8. Химерный белок по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит остаток лизина в положении, соответствующем положению 773 последовательности SEQ ID NO: 2.
9. Химерный белок по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ модифицирован с целью усиления аффинности связывания указанного фрагмента ФВ с указанным белком Ф VIII, при этом указанный фрагмент ФВ содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из пэгилирования, гликозилирования, гэкилирования, полисиалилирования и любой их комбинации.
10. Химерный белок по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что домен D' содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 99% идентичной аминокислотам от 764 до 866 из SEQ ID NO: 2, и/или отличающийся тем, что домен D3 содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 90% идентичной аминокислотам от 867 до 1240 из SEQ ID NO: 2.
11. Химерный белок по любому из пп.1-5 и 9, отличающийся тем, что домен D' содержит аминокислоты с 764 до 866 из SEQ ID NO: 2, и/или при этом домен D3 содержит аминокислоты от 867 до 1240 из SEQ ID NO: 2.
12. Химерный белок по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что указанный белок Ф VIII содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 18, при этом указанный белок Ф VIII обладает активностью Ф VIII.
13. Химерный белок по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что указанный белок Ф VIII содержит тяжелую цепь фактора VIII и легкую цепь фактора VIII, при этом указанная тяжелая цепь фактора VIII содержит аминокислоты от 1 до 740 последовательности SEQ ID NO: 16, и при этом указанная легкая цепь фактора VIII содержит аминокислоты от 1649 до 2332 последовательности SEQ ID NO: 16.
14. Химерный белок по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что время полужизни белка Ф VIII продлевается за пределы ограничения времени полужизни белка Ф VIII в присутствии эндогенного ФВ.
15. Химерный белок по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит по меньшей мере один гетерологичный компонент (H1).
16. Химерный белок по п.15, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (H1) содержит константную область иммуноглобулина или ее часть, альбумин или его фрагмент, альбумин­связывающее вещество, последовательность PAS, последовательность HAP, трансферрин или его фрагмент, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полисиаловую кислоту, гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), их производные или любые комбинации этих компонентов.
17. Химерный белок по п.15 или 16, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент содержит альбумин или его фрагмент.
18. Химерный белок по любому из пп.15-17, отличающийся тем, что указанный химерный белок содержит линкер между фрагментом ФВ и гетерологичным компонентом (H1), который является отщепляемым линкером.
19. Химерный белок по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что указанный белок Ф VIII содержит Ф VIII и по меньшей мере один гетерологичный компонент (H2).
20. Химерный белок по п.19, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (H2) содержит константную область иммуноглобулина или ее часть, альбумин или его фрагмент, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полисиаловую кислоту, гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), его производное, альбуминсвязывающее вещество, последовательность PAS, последовательность HAP, трансферрин или его фрагмент или любые комбинации этих компонентов.
21. Химерный белок по п.19 или 20, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (H2) содержит Fc-область.
22. Химерный белок по любому из пп.1-21, отличающийся тем, что указанный белок Ф VIII содержит одноцепочечный Ф VIII.
23. Полинуклеотид или набор полинуклеотидов, кодирующих химерный белок по любому из пп.1-22.
24. Вектор или набор векторов, содержащие полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п.23 и один или более промоторов, функционально связанных с полинуклеотидом или набором полинуклеотидов.
25. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п.24.
26. Фармацевтическая композиция, содержащая химерный белок по любому из пп.1-22 и фармацевтически приемлемый носитель.
27. Способ лечения заболевания или состояния, связанного с кровотечением, у нуждающегося в этом пациента, включающий введение эффективного количества белка Ф VIII и введение эффективного количества химерного белка, содержащего фрагмент фактора Виллебранда (ФВ), содержащий домен D' и домен D3 ФВ, при этом указанный фрагмент ФВ и указанный белок Ф VIII соединены друг с другом посредством взаимодействия, которое является достаточно сильным для предотвращения диссоциации указанного фрагмента ФВ от указанного белка Ф VIII в присутствии эндогенного ФВ.
28. Способ по п.27, отличающийся тем, что указанное взаимодействие между указанным фрагментом ФВ и указанным белком Ф VIII является более сильным, чем природное нековалентное взаимодействие между белком Ф VIII и фрагментом ФВ.
29. Способ по любому из пп.27, 28, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ модифицирован с целью усиления взаимодействия между указанным фрагментом ФВ и указанным белком Ф VIII.
30. Способ по любому из пп.27-29, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ модифицирован с целью усиления аффинности связывания указанного фрагмента ФВ с указанным белком Ф VIII.
31. Способ по любому из пп.27-30, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит мутацию, при этом указанная мутация включает мутацию одной или более аминокислоты, которая влияет на аффинность связывания указанного фрагмента ФВ с указанным белком Ф VIII.
32. Способ по любому из пп.27-31, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит мутацию аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 764 последовательности SEQ ID NO: 2, мутацию аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 773 последовательности SEQ ID NO: 2, или обе указанные мутации.
33. Способ по любому из пп.27-32, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит остаток серина в положении, соответствующем положению 764 последовательности SEQ ID NO: 2.
34. Способ по любому из пп.27-33, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит остаток лизина в положении, соответствующем положению 773 последовательности SEQ ID NO: 2.
35. Способ по любому из пп.27-34, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ модифицирован с целью усиления аффинности связывания указанного фрагмента ФВ с указанным белком Ф VIII, при этом указанный фрагмент ФВ содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из пэгилирования, гликозилирования, гэкилирования, полисиалилирования и любой их комбинации.
36. Способ по любому из пп.27-35, отличающийся тем, что указанное заболевание или состояние, связанное с кровотечением, выбрано из группы, состоящей из нарушения свертываемости крови, гемартроза, мышечного кровотечения, кровотечения в полости рта, кровоизлияния, кровоизлияния в мышцы, кровоизлияния в полость рта, травмы, травмы головы, желудочно-кишечного кровотечения, внутричерепного кровоизлияния, кровоизлияния в брюшную полость, внутригрудного кровоизлияния, перелома костей, кровотечения в центральной нервной системе, кровотечения в заглоточном пространстве, кровотечения в забрюшинном пространстве, кровотечения во влагалище подвздошно-поясничной мышцы и любых их комбинаций.
37. Способ по любому из пп.27-36, отличающийся тем, что указанный фрагмент ФВ содержит по меньшей мере один гетерологичный компонент (H1).
38. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (H1) содержит константную область иммуноглобулина или ее часть, альбумин или его фрагмент, альбуминсвязывающее вещество, последовательность PAS, последовательность HAP, трансферрин или его фрагмент, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полисиаловую кислоту, гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), их производные или любые комбинации этих компонентов.
39. Способ по п.37 или 38, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (H1) содержит альбумин.
40. Способ по любому из пп.27-39, отличающийся тем, что указанный белок Ф VIII содержит Ф VIII и по меньшей мере один гетерологичный компонент (H2).
41. Способ по п.40, отличающийся тем, что указанный гетерологичный компонент (H2) содержит константную область иммуноглобулина или ее часть, альбумин или его фрагмент, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полисиаловую кислоту, гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), его производное, альбуминсвязывающее вещество, последовательность PAS, последовательность HAP, трансферрин или его фрагмент или любые комбинации этих компонентов.
42. Способ по любому из пп.37-41, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один гетерологичный компонент (H1), указанный по меньшей мере один гетерологичный компонент (H2) или оба указанных компонента содержат партнер по связыванию FcRn.
43. Способ по п.42, отличающийся тем, что указанный партнер по связыванию FcRn содержит Fc-область.
44. Способ по любому из пп.37-43, отличающийся тем, что указанный химерный белок содержит линкер между фрагментом ФВ и указанным гетерологичным компонентом (H1), который является отщепляемым линкером.
45. Способ по любому из пп.27-44, отличающийся тем, что указанный белок Ф VIII содержит одноцепочечный Ф VIII.

---