(57) 1. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи (VH);
b) вариабельную область легкой цепи (VL);
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с антигеном-мишенью;
аминокислотный остаток в VH, VL или на расстоянии пяти (5) аминокислот от VH или VL на одном или обоих плечах заменен аминокислотным остатком, который конъюгирован с жирной кислотой (FA);
при конъюгации с FA на замененном аминокислотном остатке, моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент все еще связываются с антигеном-мишенью; и
FA, конъюгированная с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, способна связывать альбумин, где связывание альбумина с FA приводит к:
(a) частичному или полному блокированию связывания антигена-мишени с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом; и/или
(b) сниженной способности активировать Т-клетки при связывании с альбумином по сравнению с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, не связанным с альбумином;
где замененный аминокислотный остаток представляет собой цистеиновый остаток или лизиновый остаток;
FA выбрана из FA с 6 атомами углерода, 8 атомами углерода, 10 атомами углерода, 12 атомами углерода, 14 атомами углерода, 16 атомами углерода или 18 атомами углерода или любым количеством атомов углерода между ними.
2. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где замененный аминокислотный остаток находится в аминокислотном остатке, соответствующем:
(1) остатку 25, 27, 62, 64, 73, 76, 101, 112 или 113 последовательности SEQ ID NO:1, как определено нумерацией Кэбат;
(2) остатку 26, 27, 52, 53, 56 или 67 последовательности SEQ ID NO:2, как определено нумерацией Кэбат;
(3) остатку 119 или 120 последовательности SEQ ID NO:9, 10, 11 или 12, как определено нумерацией EU или
(4) остатку 121 или 124 последовательности SEQ ID NO:13 или 14, как определено нумерацией EU.
3. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, где замененный аминокислотный остаток находится в аминокислотном остатке, соответствующем:
(1) замене K64C в последовательности SEQ ID NO:1, как определено нумерацией Кэбат;
(2) замене S26C в последовательности SEQ ID NO:2, как определено нумерацией Кэбат, или
(3) замене Т120С в последовательности SEQ ID NO:9, 10, 11 или 12, как определено нумерацией EU.
4. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой антитело против модулятора иммунных клеток (ICM) или его антигенсвязывающий фрагмент и способно специфически связываться с ICM,
необязательно, где ICM выбран из группы, состоящей из CD3, CD27, CD28, CD40, CD122, ОХ40, CD16, 4-1ВВ, GITR, ICOS, CTLA-4, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT, VISTA, SIGLEC7, NKG2D, SIGLEC9, KIR, CD91, BTLA, NKp46, B7-H3, SIPRa и других иммунорегуляторных молекул клеточной поверхности.
5. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.4, где ICM представляет собой CD3, и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2, HCDR3, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, с полипептидными последовательностями SEQ ID NO:3, 4, 5, 6, 7 и 8 соответственно; или SEQ ID NO:33, 34, 35, 36, 37 и 38 соответственно.
6. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.5, где замененный аминокислотный остаток находится в аминокислотном остатке, выбранном из:
(1) остатка 25, 27, 62, 64, 73, 76, 101, 112 или 113 с последовательностью SEQ ID NO:1 или 27, как определено нумерацией Кэбат;
(2) остатка 26, 27, 52, 53, 56 или 67 последовательности SEQ ID NO:2 или 28, как определено нумерацией Кэбат;
(3) остатка 119 или 120 последовательности SEQ ID NO:9, 10, 11 или 12, как определено нумерацией EU; или
(4) остатка 121 или 124 последовательности SEQ ID NO:13 или 14, как определено нумерацией EU.
7. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.4-6, содержащее:
1) область СН1 с полипептидной последовательностью, выбранную из SEQ ID NO:9, 10, 11 или 12, с аминокислотной заменой Т120С, как определено нумерацией EU, и область CL с полипептидной последовательностью, выбранную из SEQ ID NO:13 или 14;
2) область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:1 с аминокислотной заменой K64С, как определено нумерацией Кэбат, и область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:2;
3) область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:27 с аминокислотной заменой K64С, как определено нумерацией Кэбат, и область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:28;
4) область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:1 и область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:2 с аминокислотной заменой S26C, как определено нумерацией Кэбат;
5) область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:27, и область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:28 с аминокислотной заменой S26C, как определено нумерацией Кэбат;
6) область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:1, область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:2, область СН1 с полипептидной последовательностью, выбранную из SEQ ID NO:9, 10, 11 или 12 с аминокислотной заменой Т120С, как определено нумерацией EU, и область CL с полипептидной последовательностью, выбранную из SEQ ID NO:13 или 14; или
7) область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:27, область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:28, область СН1 с полипептидной последовательностью, выбранную из SEQ ID NO:9, 10, 11 или 12 с аминокислотной заменой Т120С, как определено нумерацией EU, и область CL с полипептидной последовательностью, выбранную из SEQ ID NO:13 или 14.
8. Выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7, где мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит одно или несколько антигенсвязывающих плеч, содержащих замененный аминокислотный остаток, который конъюгирован с FA.
9. Мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.8, где мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой биспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий первое антигенсвязывающее плечо (Ab1) и второе антигенсвязывающее плечо (Ab2), где Ab1 и/или Ab2 содержат замененную аминокислоту, которая конъюгирована с FA.
10. Выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.9, где мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой биспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где Ab1 связывает модулятор иммунных клеток (ICM),
необязательно, где ICM выбран из группы, состоящей из CD3, CD27, CD28, CD40, CD122, ОХ40, CD16, 4-1ВВ, GITR, ICOS, CTLA-4, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT, VISTA, SIGLEC7, NKG2D, SIGLEC9, KIR, CD91, BTLA, NKp46, B7-H3, SIPRa и других иммунорегуляторных молекул клеточной поверхности.
11. Выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.9 или 10, где мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой биспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где Ab2 связывает опухолеассоциированный антиген (ТАА), необязательно, где ТАА представляет собой DLL3.
12. Выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.9-11, где мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой биспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее:
1) первое антигенсвязывающее плечо (Ab1), содержащее область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:19, область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:21, область СН1 с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:20 и область CL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:22;
2) первое антигенсвязывающее плечо (Ab1), содержащее область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:15, область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:17, область СН1 с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:16 и область CL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:18;
3) первое антигенсвязывающее плечо (Ab1), содержащее область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:29, область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:30, область СН1 с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:16 и область CL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:18; или
4) первое антигенсвязывающее плечо (Ab1), содержащее область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:31, область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:32, область СН1 с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:20 и область CL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:22.
13. Выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.12, где мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой биспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент,
где второе антигенсвязывающее плечо (Ab2) содержит
область VH с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:23,
область VL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:25,
область СН1 с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:24 и
область CL с полипептидной последовательностью SEQ ID NO:26.
14. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 или выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.8-13,
где FA содержит линкер для конъюгации с замененным аминокислотным остатком, где линкер выбран из пептидного линкера или полиэтиленгликолевого линкера, необязательно, где пептидный линкер состоит менее чем из 50 аминокислот.
15. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 14.
16. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.8-14.
17. Вектор экспрессии, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту по п.15 или 16.
18. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.17.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 14 или выделенное мультиспецифическое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.8-14 и фармацевтически приемлемый носитель.
20. Способ лечения рака у пациента, где способ включает введение пациенту фармацевтической композиции по п.19.
21. Способ по п.20, где рак выбран из группы, состоящей из рака легкого, рака желудка, рака пищевода, рака желчных протоков, холангиокарциномы, рака толстой кишки, гепатоцеллюлярной карциномы, почечно-клеточной карциномы, уротелиальной карциномы мочевого пузыря, метастатической меланомы, рака молочной железы, рака яичников, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака поджелудочной железы, глиомы, глиобластомы и других солидных опухолей, и неходжкинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), хронического миелогенного лейкоза (CML), множественной миеломы (ММ), острого миелоидного лейкоза (AML) и других гемобластозов.
22. Способ получения выделенного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 и 14, где способ включает:
культивирование клетки по п.18 в условиях продуцирования антитела или его антигенсвязывающего фрагмента;
выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры и
конъюгацию FA с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом на замененном аминокислотном остатке.
23. Способ получения выделенного мультиспецифического антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.8-14, где способ включает
культивирование клетки по п.18 в условиях продуцирования антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и
выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из клетки или культуры и
конъюгацию FA с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом на замененном аминокислотном остатке.
24. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-14, где способ включает объединение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14 с фармацевтически приемлемым носителем с получением фармацевтической композиции.
25. Способ частичного или полного блокирования связывания между антигеном-мишенью и антителом или антигенсвязывающим фрагментом, включающий приведение в контакт альбумина с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп.1-14,
где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент способны специфически связываться с антигеном-мишенью, FA способна связываться с альбумином, и связывание альбумина с FA приводит к частичному или полному блокированию связывания антигена-мишени с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
26. Способ по п.25, где стадия приведения в контакт включает введение фармацевтической композиции, содержащей выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, пациенту, нуждающемуся в лечении опухоли, где опухоль содержит антиген-мишень.
27. Способ по п.25 или 26, где альбумин имеет более высокий метаболизм в микроокружении опухоли по сравнению с циркулирующей кровью и/или присутствует в микроокружении опухоли на уровне ниже, чем уровень альбумина в циркулирующей крови субъекта.
28. Способ по п.27, где более низкий уровень альбумина в микроокружении опухоли обусловлен высоким катаболизмом альбумина в микроокружении опухоли и/или высоким уровнем протеаз в микроокружении опухоли.

---