Евразийский сервер публикаций
Евразийский патент № 047312
Библиографические данные | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Формула | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(57) 1. Применение экзосом мезенхимальных стволовых клеток костного мозга для получения лекарственных средств для улучшения жизнеспособности хондроцитов, стимулирования пролиферации хондроцитов, стимулирования перемещения хондроцитов и восстановления дефекта хряща при лечении заболеваний суставного хряща, при этом экзосомы мезенхимальных стволовых клеток костного мозга получены способом, содержащим получение мезенхимальных стволовых клеток костного мозга из костного мозга подвздошной кости или бедренной кости, стимуляцию мезенхимальных стволовых клеток костного мозга питательной средой для получения экзосом мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, пассирование из питательной среды, сбор и фильтрование надосадочной жидкости через фильтр 0,2 мкм, экстракцию экзосом мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, экспрессирующих белки экзосом CD81, TSG101, Flotillion 1 и не экспрессирующих актин, и сбор экзосом мезенхимальных стволовых клеток костного мозга посредством аффинной мембранной фильтрации на спин-колонке.
2. Применение по п.1, отличающееся тем, что описанная питательная среда является полной питательной средой. 3. Применение по п.1, отличающееся тем, что условия выращивания мезенхимальных стволовых клеток костного мозга составляют 37°С, 5% CO2. 4. Применение по п.1, отличающееся тем, что костный мозг вносят в полную среду, затем помещают в инкубатор для выращивания, на третьи сутки среду меняют наполовину, а на шестой день среду полностью меняют, затем через каждые 2 дня меняют среду до тех пор, пока клетки не вырастут на 80-90%, и переходят к поколению Р1, после трехразового пассированния получают первичные мезенхимальные стволовые клетки костного мозга. 5. Применение по п.1, отличающееся тем, что при культивировании (выращивании) мезенхимальных стволовых клеток костного мозга клетки дорастают до экспоненциальной фазы роста, а питательную среду отбрасывают, после промывания PBS, заменяют его 2% сывороткой без пузырьков для выращивания до тех пор, пока клетки не вырастут до 80-90%, затем собирают супернатант (надосадочную жидкость) и используют фильтрат для экстракции экзосом. 6. Применение по п.5, отличающееся тем, что в надосадочную жидкость после фильтрации добавляют равный объем ХВР демпфирующей жидкости, после смешивания добавляют его в спин-колонку с аффинной мембраной для обработки, а экзосомы, адсорбированные на колонке, элюируют (очищают) буфером ХЕ. 7. Применение по п.6, отличающееся тем, что после перемешивания добавляют в аффинную мембрану спин-колонки для обработки и центрифугируют при 500 g в течение 1 минуты. Загрузка данных...
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||