(57) 1. Выделенное антитело, которое специфически связывается с ОХ40 человека, содержащее:
(a) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотные последовательности определяющей комплементарность области 1 (CDR1) тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи аминокислотной последовательности VH, представленной в SEQ ID NO: 16; и
(b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотные последовательности определяющей комплементарность области 1 (CDR1) легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи аминокислотной последовательности VL, представленной в SEQ ID NO: 15.
2. Антитело по п.1, где:
(a) VH содержит:
CDR1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, CDR2 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и CDR3 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; и
(b) VL содержит:
CDR1 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, CDR2 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и CDR3 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.
3. Антитело по п.1 или 2, где
(a) VH содержит аминокислотную последовательность, которая на, по меньшей мере, на 75%, 80%, 90%, 95% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16; и/или
(b) VL содержит аминокислотную последовательность, которая на, по меньшей мере, на 75%, 80%, 90%, 95% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15.
4. Антитело по любому из пп.1-3, где
(a) VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; или
(b) VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
5. Антитело по любому из пп.1-4, где
(a) антитело содержит последовательность тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 21, 23, 51, 52 и 60-63; или
(b) антитело содержит последовательность легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
6. Выделенное антитело, которое специфически связывается с ОХ40 человека, где антитело содержит VH и VL, где VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; и где VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
7. Антитело по п.6, где антитело содержит:
(a) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(b) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(c) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(d) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(e) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(f) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(g) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; или
(h) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
8. Антитело по п.6, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
9. Антитело по любому из пп.1-8, содержащее константную область тяжелой цепи.
10. Антитело по п.9, где константная область тяжелой цепи выбрана из группы, состоящей из IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ и IgA₂ человека.
11. Антитело по п.10, где IgG₁ представляет собой нефукозилированный IgG₁.
12. Антитело по п.10, где аминокислотная последовательность IgG₁ включает мутацию N297A или мутацию, выбранную из группы, состоящей из D265A, Р329А и их комбинации.
13. Антитело по п.10, где аминокислотная последовательность IgG₁ включает мутацию N297Q.
14. Антитело по п.10, где аминокислотная последовательность IgG₄ включает мутацию S228P.
15. Антитело по п.10, где аминокислотная последовательность IgG₂ включает мутацию C127S.
16. Антитело по п.10, в котором константная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 64-71.
17. Антитело по п.10, где аминокислотная последовательность IgG₁ включает мутацию, выбранную из группы, состоящей из N297A, N297Q, D265A и их комбинации, или мутацию, выбранную из группы, состоящей из D265A, Р329А и их комбинации.
18. Антитело по любому из пп.1-17, содержащее константную область легкой цепи.
19. Антитело по п.18, где константная область легкой цепи выбрана из группы иммуноглобулинов человека, состоящих из легкой цепи каппа и легкой цепи лямбда.
20. Антитело по любому из пп.1-19, где антитело представляет собой антитело человека.
21. Антитело по любому из пп.1-20, где:
(а) антитело является агонистическим;
(b) антитело запускает, усиливает или индуцирует активность ОХ40 человека;
(c) антитело индуцирует продуцирование TNFa, TNFb, IFNg, GM-CSF, IL-2, IL- 4, IL-10, IL-13 или их комбинации стимулированными антителом к CD3 мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС);
(d) антитело индуцирует продуцирование IL-2 стимулированными SEA мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС) и подавляет продуцирование IL-10 стимулированными SEA РВМС;
(e) антитело индуцирует продуцирование IL-2 стимулированными SEA РВМС, где продуцирование IL-2 представляет собой возрастающую в значительной степени функцию от концентрации антитела;
(f) антитело индуцирует продуцирование IL-2 стимулированными SEA РВМС, где продуцирование IL-2 характеризуется сигмоидальной кривой доза-ответ;
(g) антитело ослабляет подавление эффекторных Т-клеток, обусловленное регуляторными Т-клетками; и/или
(h) антитело индуцирует продуцирование IL-2 при совместном культивировании эффекторных Т-клеток и регуляторных Т-клеток и подавляет продуцирование IL-10 при совместном культивировании эффекторных Т-клеток и регуляторных Т-клеток.
22. Антитело по п.21, где:
(a) продуцирование TNFa, TNFb, IFNg, GM-CSF, IL-2, IL-10 или IL-13 представляет собой возрастающую в значительной степени функцию от концентрации антитела; или
(b) где продуцирование TNFa, TNFb, IFNg, GM-CSF, IL-2, IL-10 или IL-13 характеризуется сигмоидальной кривой доза-ответ.
23. Антитело по любому из пп.1-22, где антитело индуцирует пролиферацию CD4+ Т-клеток.
24. Антитело по п.23, где:
(a) пролиферация CD4+ Т-клеток представляет собой возрастающую в значительной степени функцию от концентрации антитела; или
(b) где пролиферация CD4+ Т-клеток характеризуется сигмоидальной кривой доза-ответ.
25. Антитело по любому из пп.1-20, где:
(a) антитело является антагонистическим в отношении ОХ40 человека;
(b) антитело прекращает, снижает или ингибирует активность ОХ40 человека;
(c) антитело ингибирует или ослабляет связывание ОХ40 человека с лигандом ОХ40 человека;
(d) антитело ингибирует или ослабляет передачу сигнала с участием ОХ40 человека; и/или
(e) антитело ингибирует или ослабляет передачу сигнала с участием ОХ40 человека, индуцированную лигандом ОХ40 человека.
26. Конъюгат, содержащий антитело по любому из пп.1-25 и выявляемую метку.
27. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое/который специфически связывается с ОХ40 человека, содержащее:
(a) VH и VL по любому из пп.1-25, где фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab-, Fab'-, F(ab')2- и scFv-фрагмента; или
(b) одну тяжелую цепь и одну легкую цепь, где тяжелая цепь и легкая цепь содержат соответственно VH и VL по любому из пп.1-25.
28. Антитело по п.27, содержащее константную область тяжелой цепи IgG₁ человека, где аминокислотная последовательность константой области тяжелой цепи IgG₁ содержит мутацию, выбранную из группы, состоящей из N297A, N297Q, D265A и их комбинации, или мутацию, выбранную из группы, состоящей из D265A, Р329А и их комбинации.
29. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая (i) VH или тяжелую цепь антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28, и (ii) VL или легкую цепь антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28.
30. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая VH или тяжелую цепь антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28.
31. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая VL или легкую цепь антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28.
32. Выделенный экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.29.
33. Выделенный экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.30.
34. Выделенный экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.31.
35. Клетка-хозяин для получения выделенного антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28, содержащая:
(a) молекулу нуклеиновой кислоты по п.29;
(b) первую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по п.31;
(c) вектор по п.32; или
(d) первый вектор, содержащий вектор по п.33, и второй вектор, содержащий вектор по п.34.
36. Популяция клеток-хозяев для получения выделенного антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28, содержащая:
(a) первую клетку-хозяина, содержащую:
(i) молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, или (ii) вектор по п.33;
и
(b) вторую клетку-хозяина, содержащую:
(iii) молекулу нуклеиновой кислоты по п.31, или (iv) вектор по п.34.
37. Клетка-хозяин по п.35 или популяция клеток-хозяев по п.36, где клетка- хозяин или популяция клеток-хозяев выбрана из группы, состоящей из клетки Е. coli, Pseudomonas, Bacillus, Streptomyces, дрожжевой клетки, СНО, YB/20, NSO, PER-C6, HEK-293Т, NIH-3T3, HeLa, BHK, Hep G2, SP2/0, R1.1, B-W, L-M, COS 1, COS 7, BSC1, BSC40, BMT10, клетки растения, клетки насекомого и клетки человека в культуре тканей.
38. Способ получения антитела, которое связывается с ОХ40 человека, включающий культивирование клетки-хозяина или популяции клеток-хозяев по любому из пп.35-37 в условиях, обеспечивающих экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты и выработку антитела.
39. Выделенное антитело, которое специфически связывается с ОХ40 человека и кодируется выделенной молекулой нуклеиновой кислоты по п.29.
40. Фармацевтическая композиция для модулирования активности ОХ40, содержащая:
(a) (i) антитело по любому из пп.1-25, 27, 28 или 39;
(ii) молекулу нуклеиновой кислоты по п.29;
(iii) первую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и вторую молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по п.31;
(iv) вектор по п.32; или
(v) первый вектор, содержащий вектор по п.33, и второй вектор, содержащий вектор по п.34; и
(b) фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
41. Фармацевтическая композиция по п.40, дополнительно содержащая реагент для выявления выделенного антитела, которое специфически связывается с ОХ40 человека.
42. Фармацевтическая композиция по п.41, дополнительно содержащая антиген ОХ40.
43. Способ модулирования иммунного ответа у субъекта, при этом способ включает введение субъекту эффективного количества антитела по любому из пп.1-25, 27, 28 или 39, молекулы нуклеиновой кислоты по п.29, первой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и второй молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.31, вектора по п.32, первого вектора, содержащего вектор по п.33, и второго вектора, включающего вектор по п.34, или фармацевтической композиции по п.40.
44. Способ по п.43, где модулирование иммунного ответа включает усиление или индукцию иммунного ответа у субъекта.
45. Способ усиления размножения Т-клеток и эффекторной функции Т-клеток у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28 или 39, молекулы нуклеиновой кислоты по п.29, первой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и второй молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.31, вектора по п.32, первого вектора, содержащего вектор по п.33, и второго вектора, включающего вектор по п.34, или фармацевтической композиции по п.40.
46. Способ лечения рака у субъекта, при этом способ включает введение субъекту эффективного количества антитела по любому из пп.1-25, 27 и 28 или 39, молекулы нуклеиновой кислоты по п.29, первой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и второй молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.31, вектора по п.32, первого вектора, содержащего вектор по п.33, и второго вектора, включающего вектор по п.34, или фармацевтической композиции по п.40.
47. Способ по п.46, в котором рак выбран из группы, состоящей из меланомы, рака почки, рака предстательной железы, рака толстой кишки и рака легкого.
48. Способ лечения аутоиммунного или воспалительного заболевания или нарушения у субъекта, при этом способ включает введение субъекту эффективного количества антитела по любому из пп.1-20, 25, 27 и 28 или 39, молекулы нуклеиновой кислоты по п.29, первой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и второй молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.31, вектора по п.32, первого вектора, содержащего вектор по п.33, и второго вектора, включающего вектор по п.34, или фармацевтической композиции по п.40.
49. Способ по п.48, в котором заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из отторжения трансплантата, васкулита, астмы, ревматоидного артрита, дерматита, воспалительного заболевания кишечника, увеита и волчанки.
50. Способ лечения инфекционного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества антитела по любому из пп.1-25, 27, 28 или 39, молекулы нуклеиновой кислоты по п.29, первой молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.30, и второй молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.31, вектора по п.32, первого вектора, содержащего вектор по п.33, и второго вектора, включающего вектор по п.34, или фармацевтической композиции по п.40.
51. Способ по любому из пп.43-50, дополнительно включающий введение субъекту ингибитора индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO).
52. Способ по любому из пп.43-50, дополнительно включающий введение субъекту вакцины.
53. Способ по любому из пп.43-50, дополнительно включающий введение субъекту средства, целенаправленно воздействующего на контрольные точки.
54. Способ по любому из пп.51-53, где ингибитор IDO представляет собой эпакадостат, F001287, индоксимод или NLG919.
55. Способ по любому из пп.51-53, где вакцина содержит комплекс белка теплового шока с пептидами (HSPPC), содержащий белок теплового шока, образующий комплекс с антигенным пептидом.
56. Способ по п.55, где:
(a) белок теплового шока представляет собой белок gp96, и он образует комплекс с опухоль-ассоциированным антигенным пептидом, где HSPPC происходит из опухоли, полученной от субъекта; или
(b) белок теплового шока представляет собой белок hsp70 или hsc70, и он образует комплекс с опухоль-ассоциированным антигенным пептидом.
57. Способ по п.53, где средство, целенаправленно воздействующее на контрольные точки, выбрано из группы, состоящей из антагонистического антитела к PD-1, антагонистического антитела к PD-L1, антагонистического антитела к PD-L2, антагонистического антитела к CTLA-4, антагонистического антитела к TIM-3, антагонистического антитела к LAG-3, антагонистического антитела к СЕАСАМ1, агонистического антитела к GITR, агонистического антитела к CD137 и агонистического антитела к ОХ40.
58. Способ по любому из пп.43-57, где субъектом является человек.
59. Способ выявления ОХ40 в образце, включающий приведение образца в контакт с антителом по любому из пп.1-25, 27 и 28 или 39, причем связывание антитела с ОХ40 свидетельствует о наличии ОХ40 в образце.
60. Набор для выявления активности ОХ40, содержащий антитело по любому из пп.1-25, 27 и 28 или 39.
61. Набор по п.60, дополнительно содержащий антиген ОХ40.

---