(57) 1. Способ измерения р217+ тау-пептидов в пробе, включающий:
(i) приведение пробы в контакт с захватным антителом, направленным против эпитопа р217+ тау-белка, для захвата р217+ тау-пептидов в пробе, где захватное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 32, 33 и 34 соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 35, 36 и 37 соответственно, и
(ii) приведение захваченных р217+ тау-пептидов в контакт с по меньшей мере одним из первого детекторного антитела, направленного против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 119-126 тау-белка, и второго детекторного антитела, направленного против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 7-20 тау-белка с измерением таким образом по меньшей мере одного из количества р217+ тау-пептидов и количества длинных р217+ тау-пептидов соответственно, где:
(a) первое детекторное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 2, 3 и 4 соответственно; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 5, 6 и 7 соответственно, и
(b) второе детекторное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 12, 13 и 14 соответственно; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 15, 16 и 17 соответственно,
где р217+ тау-пептид представляет собой человеческий тау-белок или фрагмент тау-белка, который фосфорилирован по одному или обоим остаткам 217 и 212 тау - белка, и
где нумерация аминокислот дается по аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1.
2. Способ по п.1, включающий приведение захваченных р217+ тау-пептидов в контакт с первым детекторным антителом и вторым детекторным антителом для измерения таким образом количества р217+ тау-пептидов и количества длинных р217+ тау-пептидов соответственно, и необязательно определения отношения количества длинных р217+ тау-пептидов к количеству р217+ тау-пептидов.
3. Способ по п.2, дополнительно включающий:
(i) определение количества коротких р217+ тау-пептидов посредством вычитания количества длинных р217+ тау-пептидов из количества р217+ тау-пептидов и
(ii) необязательно определение отношения количества коротких р217+ тау-пептидов к количеству р217+ тау-пептидов или отношения количества длинных р217+ тау-пептидов к количеству коротких р217+ тау-пептидов.
4. Способ измерения р217+ тау-пептидов в пробе, включающий:
(i) приведение пробы в контакт с захватным антителом, направленным против эпитопа р217+ тау-белка, для захвата р217+ тау-пептидов в пробе и приведение пробы в контакт с не зависящим от фосфорилирования захватным антителом, направленным против эпитопа между аминокислотами 150 и 250 тау-белка, для захвата общих тау-пептидов в пробе, где захватное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 32, 33 и 34 соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 35, 36 и 37;
(ii) проведение по меньшей мере одного из:
a) приведения в контакт захваченных р217+ тау-пептидов с первым детекторным антителом, направленным против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 119-126 тау-белка, с измерением таким образом количества р217+ тау-пептидов, приведения в контакт захваченных общих тау-пептидов с первым детекторным антителом с измерением таким образом общего количества тау-пептидов и определения отношения количества р217+ тау-пептидов к количеству общих тау-пептидов, где первое детекторное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 2, 3 и 4 соответственно; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 5, 6 и 7 соответственно; и
b) приведения в контакт захваченных р217+ тау-пептидов со вторым детекторным антителом, направленным против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 7-20 тау-белка, с измерением таким образом количества длинных р217+ тау-пептидов, и приведения в контакт захваченных общих тау-пептидов со вторым детекторным антителом с измерением таким образом общего количества длинных тау-пептидов, и определения отношения количества длинных р217+ тау-пептидов к количеству общих длинных тау-пептидов, где второе детекторное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 12, 13 и 14 соответственно; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 15, 16 и 17 соответственно,
где р217+ тау-пептид представляет собой человеческий тау-белок или фрагмент тау-белка, который фосфорилирован по одному или обоим остаткам 217 и 212 тау-белка, и
где нумерация аминокислот дается по аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1.
5. Способ по п.4, где захватное антитело, не зависящее от фосфорилирования, направлено против эпитопа, включающего аминокислоты 159-163 тау-белка.
6. Способ по п.4 или 5, дополнительно включающий определение количества коротких р217+ тау-пептидов посредством вычитания количества длинных р217+ тау-пептидов из количества р217+ тау-пептидов, определение количества общих коротких тау-пептидов посредством вычитания количества общих длинных тау-пептидов из количества общих тау-пептидов и определение отношения количества коротких р217+ тау-пептидов к количеству общих коротких тау-пептидов.
7. Способ по любому из пп.1-6, где проба представляет собой полученную от пациента биологическую пробу, выбранную из группы, состоящей из крови, гомогената головного мозга и спинномозговой жидкости (CSF) от пациента.
8. Способ по п.7, где биологическая проба представляет собой кровь.
9. Способ по п.7, где биологическая проба представляет собой CSF.
10. Способ по п.7, где биологическая проба фракционирована с использованием обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (офВЭЖХ).
11. Способ по п.7, дополнительно включающий:
a) определение наличия у пациента таупатии или риска развития таупатии;
b) определение соответствия пациента для лечения антителом к р217+ тау-белку;
c) определение эффективности лечения таупатии у пациента или
d) мониторинг лечения пациента антителом к р217+ тау-белку,
причем определение или мониторинг включает сравнение по меньшей мере одного из количества р217+ тау-пептидов, количества длинных р217+ тау-пептидов, количества коротких р217+ тау-пептидов и их соотношений у пациента с соответствующим исходным значением.
12. Способ по п.11, включающий мониторинг лечения пациента антителом к р217+ тау-белку, при этом способ включает в себя этапы, на которых:
(i) получают биологическую пробу от пациента;
(ii) разделяют биологическую пробу на первую пробу, содержащую р217+ тау-пептиды, не связанные с антителом к р217+ тау-белку, и вторую пробу, содержащую р217+ тау-пептиды, связанные с антителом к р217+ тау-белку;
(iii) разделяют вторую пробу, предпочтительно посредством офВЭЖХ, с получением третьей пробы, содержащей р217+ тау-пептиды, не связанные с антителом к р217+ тау-белку;
(iv) приводят каждую из первой и третьей пробы в контакт с захватным антителом, направленным против эпитопа р217+ тау-белка, для захвата р217+ тау-пептидов в каждой из первой и третьей проб;
(v) проводят по меньшей мере одно из:
(а) приведения в контакт захваченных р217+ тау-пептидов с первым детекторным антителом, направленным против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 119-126 тау-белка, с измерением таким образом количества р217+ тау-пептидов в каждой из первой и третьей проб и
(b) приведения в контакт захваченных р217+ тау-пептидов со вторым детекторным антителом, направленным против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 7-20 тау-белка, с измерением таким образом количества длинных р217+ тау-пептидов в каждой из первой и третьей проб, необязательно
(с) определения количества коротких р217+ тау-пептидов посредством вычитания количества длинных р217+ тау-пептидов из количества р217+ тау-пептидов в каждой из первой и третьей проб;
(vi) проводить мониторинг лечения антителом к р217+ тау-белку на основании по меньшей мере одного из количества р217+ тау-пептидов, количества длинных р217+ тау-пептидов, количества коротких р217+ тау-пептидов и их соотношений в каждой из первой и третьей проб.
13. Способ по п.11, включающий мониторинг лечения пациента антителом к р217+ тау-белку, при этом способ включает в себя этапы, на которых:
(i) получают биологическую пробу от пациента,
(ii) получают полуденатурированную пробу из биологической пробы, содержащей общие р217+ тау-пептиды, причем полуденатурированную пробу нагревают для денатурации антител в пробе, и получают неденатурированную пробу из биологической пробы, содержащей р217+ тау-пептиды, не связанные с антителом к р217+ тау-белку,
(iii) приводят каждую из полуденатурированной пробы и неденатурированной пробы в контакт с захватным антителом, направленным против эпитопа р217+ тау-белка, для захвата р217+ тау-пептидов в каждой из проб,
(iv) проводят по меньшей мере одно из:
(а) приведения в контакт захваченных р217+ тау-пептидов с первым детекторным антителом, направленным против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 119-126 тау-белка, с измерением таким образом количества р217+ тау-пептидов в каждой из проб и
(b) приведения в контакт захваченных р217+ тау-пептидов со вторым детекторным антителом, направленным против эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 7-20 тау-белка, с измерением таким образом количества длинных р217+ тау-пептидов в каждой из проб, необязательно
(с) определения количества коротких р217+ тау-пептидов посредством вычитания количества длинных р217+ тау-пептидов из количества р217+ тау-пептидов в каждой из первой и третьей проб, и
(v) мониторинг лечения антителом к р217+ тау-белку на основании по меньшей мере одного из количества р217+ тау-пептидов, количества длинных р217+ тау-пептидов, количества коротких р217+ тау-пептидов и их соотношений в каждой из проб.
14. Способ по любому из пп.1-13, где захватное антитело конъюгировано с твердой подложкой, включающей гранулу, и при этом детекторное антитело биотинилировано.
15. Способ по любому из пп.1-14, где нижний предел количественного определения способа составляет около 40 фг/мл для р217+ тау-пептидов, а нижний предел обнаружения способа составляет около 2 фг/мл для р217+ тау-пептидов.
16. Способ по любому пп.11-15, где таупатия выбрана из группы, состоящей из семейной болезни Альцгеймера, спорадической болезни Альцгеймера, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, связанной с хромосомой 17 (FTDP-17), прогрессирующего супрануклеарного пареза взора, кортикобазальной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, деменции с аргирофильными зернами, комплекса амиотрофический боковой склероз - паркинсонизм - деменция, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, болезни Галлервордена-Шпатца, миозита с тельцами включения, болезни Крейтцфельда-Якоба, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа С, прионной церебральной амилоидной ангиопатии, подострого склерозирующего панэнцефалита, миотонической дистрофии, негуамской мотонейронной болезни с нейрофибриллярными клубками, постэнцефалитного паркинсонизма, хронической травматической энцефалопатии и dementia pugulistica (деменции боксеров), предпочтительно таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера.
17. Способ по любому из пп.1-15, где захватное антитело содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 32, 33 и 34, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 35, 36 и 37.
18. Способ по любому из пп.1-17, где захватное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 28, и вариабельную область легкой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 29.
19. Способ по любому из пп.1-18, где первое детекторное антитело содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 2, 3 и 4; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 5, 6 и 7.
20. Способ по любому из пп.1-19, где первое детекторное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 8, и вариабельную область легкой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 9.
21. Способ по любому из пп.1-20, где второе детекторное антитело содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 12, 13 и 14; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 15, 16 и 17.
22. Способ по любому из пп.1-21, где второе детекторное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 18, и вариабельную область легкой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 19.
23. Набор для измерения р217+ тау- пептидов в пробе, содержащий:
a) захватное антитело, направленное против эпитопа р217+ тау-белка, необязательно не зависящее от фосфорилирования захватное антитело, направленное против эпитопа тау-белка между аминокислотами 150 и 250 тау-белка, где захватное антитело включает HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 32, 33 и 34 соответственно, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 35, 36 и 37; и
b) по меньшей мере одно детекторное антитело, направленное против эпитопа тау-белка, содержащего аминокислотные остатки 7-20 или 116-127 тау-белка, где по меньшей мере одно детекторное антитело включает в себя:
(i) первое детекторное антитело, включающее HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 2, 3 и 4 соответственно; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 5, 6 и 7 соответственно; или
(ii) второе детекторное антитело, включающее HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 12, 13 и 14 соответственно; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, включающие полипептидные последовательности SEQ ID NOs: 15, 16 и 17 соответственно,
где р217+ эпитоп тау-белка представляет собой эпитоп тау-белка, содержащий по меньшей мере один из фосфорилированного Т217 и фосфорилированного Т212, где нумерация положений аминокислот соответствует нумерации в SEQ ID NO: 1.
24. Набор по п.23, где захватное антитело содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 32, 33 и 34, и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 35, 36 и 37.
25. Набор по п.23 или 24, где захватное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 28, и вариабельную область легкой цепи, имеющую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 29.
26. Набор по любому из пп.23-25, где захватное антитело, не зависящее от фосфорилирования, направлено против эпитопа тау-белка, включающего аминокислоты 159-163 тау-белка.
27. Набор по любому из пп.23-26, где:
a) первое детекторное антитело содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 2, 3 и 4; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 5, 6 и 7; и
b) второе детекторное антитело содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 тяжелой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 12, 13 и 14; и LCDR1, LCDR2 и LCDR3 легкой цепи иммуноглобулина, имеющие соответственно полипептидные последовательности SEQ ID NO: 15, 16 и 17.
28. Набор по любому из пп.23-27, где:
a) первое детекторное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 8, и вариабельную область легкой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 9; и
b) второе детекторное антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 18, и вариабельную область легкой цепи, включающую полипептидную последовательность SEQ ID NO: 19.

---