(57) 1. Выделенное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий определяющие комплементарность участки CDRH1, CDRH2 и CDRH3, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий определяющие комплементарность участки CDRL1, CDRL2 и CDRL3, где:
(a) CDRH1 содержит аминокислотную последовательность SYGMH (SEQ ID NO: 1);
(b) CDRH2 содержит аминокислотную последовательность VIWX₁DGSNX₂YYADSVX₃G (SEQ ID NO: 32), где
X₁ является Y или F;
Х₂ является K или Е и
Х₃ является K или М;
(c) CDRH3 содержит аминокислотную последовательность NX₁X₂ (SEQ ID NO: 33), где
Х₁ является G или V и
Х₂ является Н или Y;
(d) CDRL1 содержит аминокислотную последовательность RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 4);
(e) CDRL2 содержит аминокислотную последовательность GASTRAT (SEQ ID NO: 5) и
(f) CDRL3 содержит аминокислотную последовательность QQYNNWPRT (SEQ ID NO: 6).
2. Конъюгат антитела, содержащий выделенное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий определяющие комплементарность участки CDRH1, CDRH2 и CDRH3, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий определяющие комплементарность участки CDRL1, CDRL2 и CDRL3, где:
(a) CDRH1 содержит аминокислотную последовательность SYGMH (SEQ ID NO: 1);
(b) CDRH2 содержит аминокислотную последовательность VIWX₁DGSNX₂YYADSVX₃G (SEQ ID NO: 32), где
X₁ является Y или F;
Х₂ является K или Е и
Х₃ является K или М;
(c) CDRH3 включает аминокислотную последовательность NX₁DX₂ (SEQ ID NO: 33), где
X₁ является G или V и Х₂ является Н или Y;
(d) CDRL1 содержит аминокислотную последовательность RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 4);
(e) CDRL2 содержит аминокислотную последовательность GASTRAT (SEQ ID NO: 5) и
(f) CDRL3 содержит аминокислотную последовательность QQYNNWPRT (SEQ ID NO: 6), где выделенное антитело конъюгировано с цитотоксическим средством, цитостатическим средством или токсином.
3. Выделенное антитело по п.1 или конъюгат антитела по п.2, где:
(a) CDRH2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2 и 34-36;
(b) CDRH3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, 7 и 37 и/или
(c) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 содержат аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 с SEQ ID NO: 1, 2 и 3; 1, 2 и 7; 1, 2 и 37; 1, 34 и 7; 1, 35 и 7 или 1, 36 и 7 соответственно.
4. Выделенное антитело по п.1 или конъюгат антитела по п.2, где:
(a) CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3 содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 и 6 соответственно или
(b) CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3 содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1, 2, 7, 4, 5 и 6 соответственно.
5. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-4, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49.
6. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-4, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85, 90, 95 или 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15, 17 и 26-31.
7. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-6, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52, 53, 54, 55 или 56.
8. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-6, где антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, полученной из зародышевой последовательности IGHV3-33 человека, и/или вариабельный участок легкой цепи с аминокислотной последовательностью, полученной из зародышевой последовательности IGKV3-15 человека.
9. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-8, где антитело содержит вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85, 90, 95 или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16.
10. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-9, где антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
11. Выделенное антитело по п.1 или конъюгат антитела по п.2, где вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, соответственно, содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 15 и 16; 17 и 16; 26 и 16; 27 и 16; 28 и 16; 29 и 16; 30 и 16 или 31 и 16.
12. Выделенное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи, соответственно, содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 15 и 16, 17 и 16, 52 и 19, 53 и 19, 54 и 19, 55 и 19 или 56 и 19.
13. Выделенное антитело по п.11, где антитело содержит:
(a) вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и
(b) вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
14. Выделенное антитело по п.12, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53 и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
15. Выделенное антитело по п.14, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
16. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-15, где:
(a) антитело связывается с эпитопом, состоящим из остатков 107-122 SEQ ID NO: 74;
(b) антитело связывается с эпитопом, состоящим из остатков 5-22 SEQ ID NO: 74;
(c) антитело связывается с эпитопом, состоящим из остатков 6-15 SEQ ID NO: 74;
(d) антитело связывается с эпитопом, состоящим из остатков 130-138 SEQ ID NO: 74; или
(e) антитело связывается с эпитопом, состоящим из остатков 106-113 SEQ ID NO: 74.
17. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-6, 11 или 13, где антитело содержит константный участок тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ и IgA₂ человека и/или константный участок легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из легкой каппа цепи человека и легкой лямбда цепи человека.
18. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-6, 11 или 13, где:
(a) антитело содержит константный участок тяжелой цепи IgG₁ человека, который лишен гликановой группы в положении N297 согласно системе нумерации EU;
(b) антитело содержит константный участок тяжелой цепи IgG₁ человека, содержащий мутацию N297A согласно системе нумерации EU;
(c) антитело содержит константный участок тяжелой цепи IgG₁ человека, содержащий мутацию N297Q согласно системе нумерации EU;
(d) антитело содержит константный участок тяжелой цепи IgG₁ человека, содержащий мутацию D265A согласно системе нумерации EU; и/или
(e) антитело содержит константный участок тяжелой цепи IgG₄ человека, содержащий мутацию S228P согласно системе нумерации EU.
19. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-6, 11 или 13, где антитело содержит константный участок тяжелой цепи IgG человека, который является вариантом константного участка тяжелой цепи IgG дикого типа человека, где вариант константного участка тяжелой цепи IgG человека:
(a) связывается с Fc-рецептором человека с меньшей аффинностью, чем соответствующий константный участок тяжелой цепи IgG дикого типа человека; или
(b) является константным участком тяжелой цепи варианта IgG₁ человека, варианта IgG₂ человека или варианта IgG₄ человека.
20. Выделенное антитело или конъюгат антитела по п.19, где Fc-рецептором человека является FcgR.
21. Выделенное антитело или конъюгат антитела по п.19, где Fc-рецептором человека является FcgRIIB.
22. Выделенное антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-19, где:
(a) антитело является антителом человека;
(b) антитело проявляет антагонизм в отношении PD-1 человека;
(c) антитело дезактивирует, снижает или ингибирует активность PD-1 человека;
(d) антитело ингибирует связывание PD-1 человека с PD-L1 человека или PD-L2 человека;
(e) повышает продукцию IL-2 мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС), стимулированными стафилококковым энтеротоксином A (SEA);
(f) антитело повышает продукцию IFNg совместной культурой Т-клеток человека и аллогенных дендритных клеток;
(g) антитело повышает пролиферацию стимулированных анти-CD-3-антителом CD4+ или CD8+ Т-клеток, культивированных вместе с асцитной жидкостью при раке яичников; и/или
(h) антитело усиливает передачу сигнала NFAT-люциферазы репортерными клетками, культивированными вместе с экспрессирующими PD-L1 клетками-мишенями.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или конъюгат антитела по любому из пп.1-22 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
24. Выделенный полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь антитела по любому из пп.1 или 3-22.
25. Выделенный полинуклеотид, кодирующий легкую цепь антитела по любому из пп.1 или 3-22.
26. Выделенный полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь и легкую цепь антитела по любому из пп.1 или 3-22.
27. Выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи антитела по любому из пп.1 или 3-22.
28. Выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи антитела по любому из пп.1 или 3-22.
29. Выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела по любому из пп.1 или 3-22.
30. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по любому из пп.24-29.
31. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по любому из пп.24-29 или вектор по п.30.
32. Способ получения антитела, которое связывается с PD-1, где способ включает культивирование клетки-хозяина содержащей:
(a) полинуклеотид по п.26 или 29;
(b) выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи антитела по любому из пп.1 или 3-22, и выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область легкой цепи антитела по любому из пп.1 или 3-22; или
(c) выделенный полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь антитела по любому из пп.1 или 3-22, и выделенный полинуклеотид, кодирующий легкую цепь антитела по любому из пп.1 или 3-22,
в условиях, при которых осуществляется экспрессия полинуклеотида и продукция антитела.
33. Способ повышения активации Т-клеток в ответ на антиген у индивида, включающий введение индивиду эффективного количества антитела, конъюгата антитела или фармацевтической композиции по любому из пп.1-23.
34. Способ лечения рака у индивида, включающий введение индивиду эффективного количества антитела, конъюгата антитела или фармацевтической композиции по любому из пп.1-23, где рак выбран из группы, состоящей из острого лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, рака мочевого пузыря, рака кости, глиомы ствола мозга, рака молочной железы, рака надпочечников, рака эндокринной системы, рака почек или уретры, рака паращитовидной железы, рака тонкой кишки, рака щитовидной железы, рака уретры, рака ануса, рака ротоглотки, рака пениса, рака прямой кишки, рака влагалища, рака вульвы, злокачественных заболеваний, при которых экспрессируется PD-L1, карциномы шейки матки, карциномы эндометрия, карциномы фаллопиевых труб, карциномы почечной лоханки, рака шейки матки, хронического лейкоза, хронического лимфолейкоза, хронического миелоидного лейкоза, колоректального рака, рака эндометрия, рака, вызванного воздействием окружающей среды, включая рак, вызванный асбестом, плостоклеточного рака, рака пищевода, мультиформной глиобластомы, глиомы, рака головы и шеи, гепатоцеллюлярного рака, болезни Ходжкина, ВПЧ-связанные злокачественные опухоли, саркомы Капоши, лейкоза, рака печени, рака легкого, лимфоцитарной лимфомы, лимфомы, меланомы, метастатического рака, множественной миеломы, неоплазмы центральной нервной системы (ЦНС), неходжкинской лимфомы, рака яичников, рака поджелудочной железы, аденомы гипофиза, первичной лимфомы ЦНС, рака предстательной железы, рефрактерных или рецидивирующих злокачественных опухолей, почечно-клеточной карциномы, саркомы, саркомы мягких тканей, рака кожи, солидных опухолей у детей, опухолей спинного мозга, плоскоклеточного рака, рака желудка, Т-клеточной лимфомы, рака яичек и карциномы эндометрия.
35. Способ по п.33 или 34, где фармацевтическую композицию вводят подкожно, внутриопухолево или внутривенно.
36. Способ по любому из пп.33-35, дополнительно содержащий введение дополнительного терапевтического средства индивиду.
37. Способ по п.36, где дополнительный терапевтическая агент представляет собой химиотерапевтический агент, радиотерапевтический агент или агент, нацеленный на контрольную точку.
38. Способ по п.37, где агент, нацеленный на контрольную точку, выбран из группы, состоящей из антагонистического анти-PD-1 антитела, антагонистического анти-PD-L1 антитела, антагонистического анти-PD-L2 антитела, антагонистического анти-CTLA-4 антитела, антагонистического анти-TIM-3 антитела, антагонистического анти-LAG-3 антитела, антагонистического анти-СЕАСАМ1 антитела, антагонистического анти-TIGIT антитела, агонистического анти-CD137 антитела, агонистического анти-ICOS антитела, агонистического анти-GITR антитела и агонистического анти-ОХ40 антитела.

---