(57) 1. Т-клетка, обладающая специфичностью по отношению к опухоли, содержащая вектор, содержащий последовательность, кодирующую мшРНК, при этом мшРНК содержит 15 непрерывно следующих друг за другом нуклеотидов, комплементарных последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 604, для сайленсинга гена, ингибирующего функцию Т-клеток.
2. Т-клетка по п.1, причем Т-клетка выбрана из группы, состоящей из инфильтрующего опухоль лимфоцита (TIL), Т-клетки природного киллера (NKT), цитотоксического Т-лимфоцита (CTL) и Т-клетки CD4.
3. Т-клетка по п.1, причем Т-клетка экспрессирует специфичный для опухоли Т-клеточный рецептор.
4. Т-клетка по п.1, причем Т-клетка дополнительно содержит вектор, кодирующий химерный рецептор антигена (CAR), при этом CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и стимулирующий домен.
5. Т-клетка по п.1, в которой последовательность мшРНК снижает экспрессию Ppp2r2d.
6. Т-клетка по п.1, в которой мшРНК выбрана из зависимой от расщепления мшРНК или не зависимой от расщепления мшРНК.
7. Т-клетка по п.4, в которой антигенсвязывающий домен связывает опухолевый антиген или патогенный антиген.
8. Т-клетка по п.7, в которой опухолевый антиген выбран из группы, состоящей из специфичного для простаты мембранного антигена (PSMA), раково-эмбрионального антигена (СЕА), CD19, CD20, CD22, ROR1, мезотелина, CD333/IL3Ra, с-Met, гликолипида F77, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO-1 TCR, ERBB2, BIRC5, СЕАСАМ5, WDR46, BAGE, CSAG2, DCT, MAGED4, GAGE1, GAGE2, GAGE3, GAGE4, GAGE5, GAGE6, GAGE7, GAGE8, IL13RA2, MAGEA1, MAGEA2, MAGEA3, MAGEA4, MAGEA6, MAGEA9, MAGEA10, MAGEA12, MAGEB1, MAGEB2, MAGEC2, TP53, TYR, TYRP1, SAGE1, SYCP1, SSX2, SSX4, KRAS, PRAME, NRAS, ACTN4, CTNNB1, CASP8, CDC27, CDK4, EEF2, FN1, HSPA1B, LPGAT1, ME1, HHAT, TRAPPC1, MUM3, MYO1B, PAPOLG, OS9, PTPRK, TPI1, ADFP, AFP, AIM2, ANXA2, ART4, CLCA2, CPSF1, PPIB, EPHA2, EPHA3, FGF5, CA9, TERT, MGAT5, CEL, F4.2, CAN, ETV6, BIRC7, CSF1, OGT, MUC1, MUC2, MUM1, CTAG1A, CTAG2, CTAG, MRPL28, FOLH1, RAGE, SFMBT1, KAAG1, SART1, TSPYL1, SART3, SOX10, TRG, WT1, TACSTD1, SILV, SCGB2A2, MC1R, MLANA, GPR143, OCA2, KLK3, SUPT7L, ARTC1, BRAF, CASP5, CDKN2A, UBXD5, EFTUD2, GPNMB, NFYC, PRDX5, ZUBR1, SIRT2, SNRPD1, HERV-K-MEL, CXorf61, CCDC110, VENTXP1, SPA17, KLK4, ANKRD30A, RAB38, CCND1, CYP1B1, MDM2, MMP2, ZNF395, RNF43, SCRN1, STEAP1, 707-AP, TGFBR2, PXDNL, AKAP13, PRTN3, PSCA, RHAMM, ACPP, ACRBP, LCK, RCVRN, RPS2, RPL10A, SLC45A3, BCL2L1, DKK1, ENAH, CSPG4, RGS5, BCR, BCR-ABL, ABL-BCR, DEK, DEK-CAN, ETV6-AML1, LDLR-FUT, NPM1-ALK1, PML-RARA, SYT-SSX1, SYT-SSX2, FLT3, ABL1, AML1, LDLR, FUT1, NPM1, ALK, PML1, RARA, SYT, SSX1, MSLN, UBE2V1, HNRPL, WHSC2, EIF4EBP1, WNK2, OAS3, BCL-2, MCL1, CTSH, ABCC3, BST2, MFGE8, TPBG, FMOD, XAGE1, RPSA, COTL1, CALR3, PA2G4, EZH2, FMNL1, HPSE, APC, UBE2A, BCAP31, TOP2A, TOP2B, ITGB8, RPA1, ABI2, CCNI, CDC2, SEPT2, STAT1, LRP1, ADAM17, JUP, DDR1, ITPR2, HMOX1, TPM4, BAAT, DNAJC8, TAPBP, LGALS3BP, PAGE4, PAK2, CDKN1A, PTHLH, SOX2, SOX11, TRPM8, TYMS, ATIC, PGK1, SOX4, TOR3A, TRGC2, BTBD2, SLBP, EGFR, IER3, TTK, LY6K, IGF2BP3, GPC3, SLC35A4, HSMD, H3F3A, ALDH1A1, MFI2, MMP14, SDCBP, PARP12, MET, CCNB1, PAX3-FKHR, PAX3, FOXO1, XBP1, SYND1, ETV5, HSPA1A, HMHA1, TRIM68 и любого их сочетания.
9. Т-клетка по п.4, в которой антигенсвязывающий домен является антигенсвязывающим фрагментом антитела.
10. Т-клетка по п.9, в которой антигенсвязывающим фрагментом является Fab или scFv.
11. Т-клетка по п.4, в которой CAR дополнительно содержит костимулирующий домен.
12. Т-клетка по п.4, в которой вектор представляет собой плазмиду, ретровирусный вектор или лентивирусный вектор.
13. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая химерный рецептор антигена (CAR) и последовательность, кодирующую мшРНК, причем мшРНК содержит 15 непрерывно следующих друг за другом нуклеотидов, комплементарных последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 604, и причем CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, стимулирующий домен и костимулирующий домен.
14. Выделенная нуклеиновая кислота по п.13, в которой последовательность мшРНК снижает экспрессию Ppp2r2d.
15. Выделенная нуклеиновая кислота по п.14, причем антигенсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела.
16. Выделенная нуклеиновая кислота по п.15, причем антигенсвязывающим фрагментом является Fab или scFv.
17. Выделенная нуклеиновая кислота по п.13, причем антигенсвязывающий домен связывает опухолевый антиген.
18. Выделенная нуклеиновая кислота по п.17, причем опухолевый антиген ассоциирован с меланомой, карциномой, саркомами, аденокарциномой, лимфомой, лейкозом, раком почки, молочной железы, легкого, мочевого пузыря, ободочной кишки, яичника, простаты, поджелудочной железы, желудка, головного мозга, головы и шеи, кожи, матки, семенников, глиомой, раком пищевода и печени.
19. Выделенная нуклеиновая кислота по п.17, причем опухолевый антиген ассоциирован с солидной опухолью или лимфоидной опухолью.
20. Вектор для сайленсинга гена, ингибирующего функцию Т-клеток, содержащий нуклеиновую кислоту по п.13.
21. Вектор по п.20, представляющий собой плазмиду, лентивирусный вектор, ретровирусный вектор, аденовирусный вектор, вектор на основе аденоассоциированного вируса.
22. Вектор по п.20, в котором последовательность, кодирующая мшРНК, оперативно связана с промотором РНК-полимеразы II или промотором РНК-полимеразы III.
23. Т-клетка для сайленсинга гена, ингибирующего функцию Т-клеток, содержащая нуклеиновую кислоту по п.13.
24. Т-клетка по п.23, причем Т-клетка является специфичной для опухоли.
25. Т-клетка по п.24, причем Т-клетка выбрана из группы, состоящей из инфильтрующего опухоль лимфоцита (TIL), Т-клетки природного киллера (NKT), цитотоксического Т-лимфоцита (CTL) и Т-клетки CD4.
26. Композиция для сайленсинга гена, ингибирующего функцию Т-клеток, содержащая Т-клетку по п.1 или 23 и фармацевтически приемлемый носитель.
27. Композиция по п.26, дополнительно содержащая ингибитор Ppp2r2d, Eif2ak3, Arhgap5, Smad2, Akap81, Rbks, Egr2, Dgka, Cblb, Mdfic, Entpd1, Dgkz, Vamp7, Hipk1, Nuak2, Alk, Pdzklip1, Inpp5b, Socs1, Jun, Nptxr, Socs3, F11r, Fyn, Ypel2, Pkd1, Grk6, Cdkn2a, Sbf1, Ipmk, Rock1, Stk17b, Mast2, Pdp1, Yes1, Met, Ppm1g, Blvrb, Tnk1, Prkab2, Trpm7 или Ppp3cc.
28. Композиция по п.26, в которой Т-клетка является Т-клеткой CD8⁺ или CD4⁺.
29. Композиция по п.26, в которой Т-клетка выбрана из группы, состоящей из инфильтрующего опухоль лимфоцита (TIL), T-клетки природного киллера (NKT), цитотоксического Т-лимфоцита (CTL) и Т-клетки CD4, где антиген является опухолевым антигеном или патогенным антигеном.
30. Композиция по п.26, в которой Т-клетка включает Т-клетку человека.
31. Т-клетка по п.1, в которой последовательность мшРНК снижает экспрессию гена, выбранного из группы, состоящей из Cblb, Dgka, Dgkz, Entpd1, Fyn, Ptpn2, Smad2, Socs1 или Socs3.
32. Применение Т-клетки по п.1 для лечения злокачественной опухоли у пациента на основе сайленсинга генов, которые ингибируют Т-клеточную функцию, причем Т-клетка содержит вектор, кодирующий специфичный для опухоли Т-клеточный рецептор или химерный рецептор антигена (CAR).
33. Применение по п.32, в котором CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен, стимулирующий домен и костимулирующий домен.
34. Применение по п.32, в котором вектор представляет собой плазмиду, лентивирусный вектор, ретровирусный вектор, аденовирусный вектор, вектор на основе аденоассоциированного вируса.
35. Способ получения Т-клетки, обладающей специфичностью по отношению к опухоли и повышенной резистентностью к иммуносупрессии, включающий
получение Т-клетки, обладающей специфичностью по отношению к опухоли; и
введение в клетку вектора, содержащего последовательность, кодирующую мшРНК,
причем мшРНК содержит 15 непрерывно следующих друг за другом нуклеотидов, комплементарных последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 604.
36. Способ по п.35, в котором иммунореактивная клетка выбрана из группы, состоящей из инфильтрующего опухоль лимфоцита (TIL), Т-клетки природного киллера (NKT), цитотоксического Т-лимфоцита (CTL) и Т-клетки CD4.
37. Способ по п.35, в котором Т-клетка экспрессирует специфичный для опухоли Т-клеточный рецептор.
38. Способ по п.35, в котором Т-клетка содержит вектор, кодирующий химерный рецептор антигена (CAR), причем CAR содержит антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и стимулирующий домен.
39. Способ по п.35, в котором последовательность мшРНК снижает экспрессию гена Ppp2r2d.
40. Способ по п.35, в котором мшРНК выбрана из зависимой от расщепления мшРНК или не зависимой от расщепления мшРНК.
41. Т-клетка по п.1 или 23, в которой последовательность, кодирующая мшРНК, содержит первую последовательность, содержащую 15-25 нуклеотидов, комплементарных SEQ ID NO: 604, и вторую последовательность, которая обратно комплементарна первой последовательности с одним несовпадением или без несовпадений, и третью последовательность длиной 5-9 нуклеотидов, расположенную между первой и второй последовательностями.
42. Т-клетка по п.41, в которой первая последовательность содержит 19-25 нуклеотидов, комплементарных SEQ ID NO: 604.
43. Т-клетка по п.41, в которой вторая последовательность полностью комплементарна первой последовательности.
44. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.13, в которой последовательность, кодирующая мшРНК, содержит первую последовательность, содержащую 15-25 нуклеотидов, комплементарных SEQ ID NO: 604, и вторую последовательность, которая обратно комплементарна первой последовательности с одним несовпадением или без несовпадений, и третью последовательность длиной 5-9 нуклеотидов, расположенную между первой и второй последовательностями.
45. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.44, в которой первая последовательность содержит 19-25 нуклеотидов, комплементарных SEQ ID NO: 604.
46. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.44, в которой вторая последовательность полностью комплементарная первой последовательности.

---