(57) 1. Способ получения популяции трансдифференцированных первичных зрелых клеток печени млекопитающего, имеющих фенотип и функцию зрелых бета-клеток поджелудочной железы, где способ включает:
(a) получение популяции зрелых первичных клеток печени млекопитающего, обогащенной клетками, которые имеют предрасположенность к трансдифференцировке, где обогащенную популяцию получают путем получения популяции зрелых клеток печени млекопитающего и выделения субпопуляции клеток, включающих:
i) активный сигнальный путь Wnt (wingless-type MMTV integration site family); или
ii) повышенную экспрессию GSRE (глутаминсинтетаза-отвечающий элемент); или
iii) повышенную экспрессию HOMER1 (homer scaffolding protein 1), LAMP3 (lysosomal associated membrane protein 3) или BMPR2 (bone morphogenetic protein receptor type 2) или их любой комбинации; или
iv) пониженную экспрессию АВСВ1 (ATP binding cassette subfamily В member 1), ITGA4 (integrin subunit alpha 4), ABCB4 (ATP binding cassette subfamily В member 4) или PRNP (prion protein) или их любой комбинации; или
их любую комбинацию,
(b) введение в указанную обогащенную популяцию зрелых первичных клеток печени млекопитающего полипептида панкреатодуоденального гомеобокса (PDX-1) или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид PDX-1;
(c) введение в популяцию клеток этапа b) полипептида Рах-4 или полипептида NeuroD1, или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид Рах-4, или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид NeuroD1; и
(d) введение в популяцию клеток этапа (с) полипептид MafA или нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид MafA;
где полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (с) вводят по меньшей мере 24 ч после или в то же время, что полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (b), и где полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (d) вводят по меньшей мере 24 ч после введения полипептида или нуклеиновой кислоты согласно (с); с получением трансдифференцированной популяции клеток, имеющих фенотип и функцию зрелых бета-клеток поджелудочной железы.
2. Способ по п.1, где клетки, включающие активный сигнальный путь Wnt, включают повышенную экспрессию Wnt3a (Wnt Family Member 3А) или бета-катенина, или STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) связывающие элементы, или их любую комбинацию, или пониженную экспрессию DKK1 (Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 1), или DKK3 (Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 3), или АРС (activated protein С), или их любую комбинацию.
3. Способ по п.1, где указанная стадия получения включает инкубацию популяции зрелых клеток печени млекопитающего с Wnt3a.
4. Способ по п.1, где полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (с) вводят в то же время, что полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (b), и полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (d) вводят по меньшей мере 48 ч после введения полипептида или нуклеиновой кислоты согласно (с).
5. Способ по п.1, где полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (с) вводят в то же время, что полипептид или нуклеиновую кислоту согласно (b), и нуклеиновая кислота, кодирующий полипептид PDX-1, дополнительно кодирует полипептид NeuroD1 или полипептид Рах-4.
6. Способ по п.1, где указанные предрасположенные клетки печени включают перицентральные клетки печени.
7. Способ по п.1, где указанная популяция трансдифференцированных клеток содержит увеличенный процент (%) трансдифференцированных клеток, имеющих указанный фенотип и функцию зрелых бета-клеток поджелудочной железы по сравнению с процентом зрелых трансдифференцированных клеток, полученных из необогащённой популяции клеток.
8. Способ по п.1, где указанный фенотип и функция зрелых бета-клеток поджелудочной железы включают повышенную продукцию инсулина или повышенную секрецию инсулина, регулируемую глюкозой, или повышенную секрецию С-пептида, регулируемую глюкозой, или любую их комбинацию по сравнению с контрольной популяцией нетрансдифференцированных первичных зрелых клеток печени млекопитающего.
9. Способ по п.8, где указанная повышенная продукция инсулина, повышенная секреция инсулина, регулируемая глюкозой, или повышенная секреция С-пептида, регулируемая глюкозой, совмещена с пониженной экспрессией гена Isl1 или сниженной продукцией соматостатина или любой их комбинацией.
10. Способ по п.1, где указанный фенотип зрелых бета-клеток поджелудочной железы включает повышенную экспрессию гена глюкагона по сравнению с контрольной популяцией нетрансдифференцированных зрелых клеток печени млекопитающего.
11. Популяция трансдифференцированных первичных зрелых клеток печени млекопитающего, имеющих фенотип и функцию зрелых бета-клеток поджелудочной железы, получаемые способом по п.1, где указанная популяция трансдифференцированных клеток печени включает по меньшей мере 20% перицентральных клеток печени и до 80% неперицентральных первичных зрелых клеток печени, и где указанный фенотип и функция зрелых бета-клеток поджелудочной железы включают повышенную продукцию инсулина или повышенную секрецию инсулина, регулируемую глюкозой, или повышенную секрецию С-пептида, регулируемую глюкозой, или любую их комбинацию по сравнению с контрольной популяцией нетрансдифференцированных первичных зрелых клеток печени млекопитающего.
12. Применение популяции трансдифференцированных первичных зрелых клеток печени млекопитающего по п.11 для изготовления лекарственного средства для лечения дегенеративного панкреатического нарушения.
13. Применение по п.12, где дегенеративным панкреатическим нарушением является диабет.
14. Применение по п.13, где диабет является диабетом I типа или II типа.
15. Применение по п.12, где дегенеративным панкреатическим нарушением является рак поджелудочной железы или панкреатит.

---