(57) 1. Способ получения по меньшей мере двух различных антител с помощью клетки-хозяина, где каждое из указанных двух антител содержит два C_H3-домена, которые способны образовывать поверхность контакта, причем указанный способ включает:
i) введение первой нуклеиновой кислоты, кодирующей первую содержащую C_H3-домен полипептидную цепь, содержащую положительно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU; и
второй нуклеиновой кислоты, кодирующей вторую содержащую C_H3-домен полипептидную цепь, содержащую отрицательно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU; и
третьей нуклеиновой кислоты, кодирующей третью содержащую C_H3-домен полипептидную цепь; и
четвертой нуклеиновой кислоты, кодирующей четвертую содержащую C_H3-домен полипептидную цепь в клетку-хозяина;
ii) культивирование указанной клетки-хозяина и обеспечение экспрессии указанных по меньшей мере четырех нуклеиновых кислот;
iii) сбор указанных по меньшей мере двух различных антител из культуры.
2. Способ получения по меньшей мере двух различных антител с помощью клетки-хозяина, где каждое из указанных двух антител содержит два C_H3-домена, которые способны образовывать поверхность контакта, причем указанный способ включает:
(i) введение первой нуклеиновой кислоты, кодирующей первую содержащую C_H3-домен полипептидную цепь, содержащую отрицательно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU; и
второй нуклеиновой кислоты, кодирующей вторую содержащую C_H3-домен полипептидную цепь, содержащую положительно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU; и
третьей нуклеиновой кислоты, кодирующей третью содержащую C_H3-домен полипептидную цепь; и
четвертой нуклеиновой кислоты, кодирующей четвертую содержащую C_H3-домен полипептидную цепь в клетку-хозяина;
ii) культивирование указанной клетки-хозяина и обеспечение экспрессии указанных по меньшей мере четырех нуклеиновых кислот;
iii) сбор указанных по меньшей мере двух различных антител из культуры.
3. Способ по п.1 или 2, дополнительно включающий предоставление указанной клетке-хозяину нуклеиновой кислоты, кодирующей общую легкую цепь, которая способна образовывать пару по меньшей мере с двумя различными тяжелыми цепями.
4. Способ по п.1 или 3, где указанная первая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит остаток лизина (K) в аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU и указанная вторая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит остаток аспарагиновой кислоты (D) в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU.
5. Способ по п.4, где указанная первая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь дополнительно содержит остаток лизина (K) в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU.
6. Способ по п.4 или 5, где указанная вторая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь дополнительно содержит остаток глутаминовой кислоты (Е) или остаток аспарагиновой кислоты (D) в аминокислотном положении 349 согласно системе нумерации EU и/или остаток глутаминовой кислоты (Е) в аминокислотном положении 368 согласно системе нумерации EU.
7. Способ по п.6, где указанная вторая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь дополнительно содержит остаток глутаминовой кислоты (Е) в аминокислотном положении 368 согласно системе нумерации EU.
8. Способ по любому из пп.1-7, где указанная третья содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит остаток лизина (K) в аминокислотном положении 356 согласно системе нумерации EU и остаток лизина (K) в аминокислотном положении 399 согласно системе нумерации EU и указанная четвертая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит остаток аспарагиновой кислоты (D) в аминокислотном положении 392 согласно системе нумерации EU и остаток аспарагиновой кислоты (D) в аминокислотном положении 409 согласно системе нумерации EU.
9. Способ по любому из пп.1-8, где каждая кодируемая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь дополнительно содержит вариабельную область, распознающую эпитоп.
10. Способ по п.9, где четыре вариабельные области четырех содержащих C_H3-домен полипептидных цепей распознают различные эпитопы.
11. Способ по п.9, где вариабельные области первой и второй содержащих C_H3-домен полипептидных цепей распознают различные эпитопы, в то время как вариабельные области третьей и четвертой содержащих C_H3-домен полипептидных цепей распознают один и тот же эпитоп.
12. Способ по п.11, где эпитоп, распознаваемый вариабельными областями третьей и четвертой содержащих C_H3-домен полипептидных цепей, является таким же, как эпитоп-мишень, распознаваемый вариабельной областью первой или второй содержащей C_H3-домен полипептидной цепи.
13. Способ по п.11, где эпитоп, распознаваемый вариабельными областями третьей и четвертой содержащих C_H3-домен полипептидных цепей, отличается от эпитопа-мишени, распознаваемого вариабельной областью первой или второй содержащей C_H3-домен полипептидной цепи.
14. Способ по п.9, где вариабельные области первой и второй содержащих C_H3-домен полипептидных цепей распознают один и тот же эпитоп-мишень, в то время как вариабельные области третьей и четвертой содержащих C_H3-домен полипептидных цепей распознают второй эпитоп-мишень, который отличается от эпитопа-мишени, распознаваемого указанными первой и второй вариабельными областями.
15. Способ по любому из пп.9-14, где эпитопы расположены на одной и той же мишени.
16. Способ по п.15, где мишень является растворимой.
17. Способ по п.15, где мишень является мембраносвязанной.
18. Способ по любому из пп.9-14, где эпитопы расположены на различных мишенях.
19. Способ по п.18, где различные мишени экспрессируются на одних и тех же клетках.
20. Способ по п.18, где различные мишени экспрессируются на различных клетках.
21. Способ по п.18, где различные мишени являются растворимыми.
22. Способ по п.18, где одна мишень является растворимой, в то время как вторая мишень является мембраносвязанной.
23. Способ по п.1, где по меньшей мере две из указанных нуклеиновых кислот обеспечены внесенными способами генетической инженерии взаимодополняющими мутациями типа "выступ-в-полости", дисульфидными мостиками, зарядовыми мутациями, выбранными из мутаций, указанных в табл. В, или их комбинациями.
24. Способ по п.1, где все четыре из указанных нуклеиновых кислот обеспечены мутациями по п.23, где указанные мутации первого и второго содержащих C_H3-домен полипептидов отличаются от мутаций указанных третьего и четвертого содержащих C_H3-домен полипептидов.
25. Способ по любому из пп.9-14, 18-20 или 22, где по меньшей мере один из указанных эпитопов расположен на опухолевой клетке.
26. Способ по любому из пп.9-14, 18-20 или 22, где по меньшей мере один из указанных эпитопов расположен на эффекторной клетке.
27. Способ по п.26, где указанная эффекторная клетка представляет собой NK-клетку, Т-клетку, В-клетку, моноцит, макрофаг, дендритную клетку или нейтрофильный гранулоцит.
28. Способ по п.26 или 27, где указанный эпитоп расположен на молекуле CD3, CD16, CD25, CD28, CD64, CD89, NKG2D или NKp46.
29. Смесь по меньшей мере двух различных антител для противоопухолевой терапии или терапии инфекционных заболеваний, полученных способами по любому из пп.1-28.
30. Смесь по п.29, где указанные по меньшей мере два различных антитела связываются с различными эпитопами на одном и том же антигене и/или с различными эпитопами на различных антигенах.
31. Смесь по п.29 или 30, где указанные по меньшей мере два различных антитела содержат по меньшей мере одно гетеродимерное антитело.
32. Смесь по любому из пп.29-31, где два из указанных по меньшей мере двух различных антител представляют собой гетеродимерные антитела.
33. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих первую, вторую, третью и четвертую полипептидные цепи, содержащие C_H3-домены двух различных антител, полученных способом по любому из пп.1 или 3-28, где указанная первая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит положительно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU и где указанная вторая содержащая C _H3-домен полипептидная цепь содержит отрицательно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU.
34. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих первую, вторую, третью и четвертую полипептидные цепи, содержащие C_H3-домены двух различных антител, полученных способом по любому из пп.2-28, где указанная первая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит отрицательно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU и где указанная вторая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит положительно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU.
35. Рекомбинантная клетка-хозяин по п.33 или 34, где указанная клетка-хозяин дополнительно содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую общую легкую цепь, которая способна образовывать пару по меньшей мере с двумя различными тяжелыми цепями.
36. Фармацевтическая композиция, предназначенная для противоопухолевой терапии или терапии инфекционных заболеваний, содержащая по меньшей мере два различных антитела по любому из пп.29-32 и фармацевтически приемлемый носитель.
37. Фармацевтическая композиция по п.36, где указанные по меньшей мере два различных антитела продуцированы рекомбинантными клетками-хозяевами по любому из пп.33-35.
38. Способ получения клетки-хозяина по п.33 или 35 для продукции по меньшей мере двух различных антител, причем способ включает стадию введения в указанную клетку-хозяина одной или более нуклеиновых кислот, кодирующих, по меньшей мере, первую, вторую, третью и четвертую содержащие C_H3-домен полипептидные цепи, где указанная первая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит положительно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU и где указанная вторая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит отрицательно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU.
39. Способ получения клетки-хозяина по п.34 или 35 для продукции по меньшей мере двух различных антител, причем способ включает стадию введения в указанную клетку-хозяина одной или нескольких нуклеиновых кислот, кодирующих, по меньшей мере, первую, вторую, третью и четвертую содержащие C_H3-домен полипептидные цепи, где указанная первая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит отрицательно заряженный аминокислотный остаток с аминокислотном положении 366 согласно системе нумерации EU, и где указанная вторая содержащая C_H3-домен полипептидная цепь содержит положительно заряженный аминокислотный остаток в аминокислотном положении 351 согласно системе нумерации EU.
40. Способ по п.38 или 39, дополнительно включающий стадию внесения в указанную клетку-хозяина нуклеиновой кислоты, кодирующей общую легкую цепь, которая способна образовывать пару по меньшей мере с двумя различными тяжелыми цепями.

---