(57) 1. CD3-связывающая молекула, содержащая антигенсвязывающий фрагмент антитела, причем указанный антигенсвязывающий фрагмент содержит CD3-специфический VL-домен антитела и CD3-специфический VH-домен антитела, причем указанный CD3-специфический VL-домен и указанный CD3-специфический VH-домен образуют антигенсвязывающий домен, способный к иммуноспецифическому связыванию как с эпитопом CD3 человека, так и с эпитопом CD3 млекопитающего, не являющегося человеком, причем:
(I) указанный CD3-специфический VL-домен выбран из группы, состоящей из
VL-4 h-mab2 (SEQ ID NO: 22),
VL-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 26),
VL-7 h-mab2 (SEQ ID NO: 28),
VL-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 30),
VL-9 h-mab2 (SEQ ID NO: 32) и
VL-10 h-mab2 (SEQ ID NO: 34); и
(II) указанный CD3-специфический VH-домен выбран из группы, состоящей из
VH-1 h-mab2 (SEQ ID NO: 36),
VH-2 h-mab2 (SEQ ID NO: 38),
VH-3 h-mab2 (SEQ ID NO: 40),
VH-4 h-mab2 (SEQ ID NO: 42),
VH-5 h-mab2 (SEQ ID NO: 44),
VH-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 46),
VH-7 h-mab2 (SEQ ID NO: 48) и
VH-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 50).
2. CD3-связывающая молекула по п.1, в которой указанным CD3-специфическим VL-доменом является VL-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 26).
3. CD3-связывающая молекула по п.1 или 2, в которой указанным CD3-специфическим VH-доменом является VH-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 50) или VH-4 h-mab2 (SEQ ID NO: 42).
4. CD3-связывающая молекула по любому из пп.1-3, которая является антителом.
5. CD3-связывающая молекула по п.4, причем указанное антитело не содержит Fc-области.
6. CD3-связывающая молекула по п.4, причем указанное антитело содержит Fc-область, которая:
(i) лишена эффекторной функции; или
(ii) обладает пониженной эффекторной функцией; или
(iii) у него ограничена способность Fc-области антитела связываться с Fc-рецептором,
причем указанное отсутствие эффекторной функции, указанная пониженная эффекторная функция и указанная ограниченная связывающая способность сравнивается с функцией Fc-рецептора дикого типа.
7. CD3-связывающая молекула, содержащая CD3-специфический VL-домен антитела и CD3-специфический VH-домен антитела, причем указанная молекула представляет собой CD3-связывающее диатело, которое содержит первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, указанные цепи ковалентно связаны друг с другом, причем:
(I) указанная первая полипептидная цепь содержит амино (N-) конец и карбокси (С-) конец и расположена от N-конца к С-концу:
(i) домен (А), содержащий указанный CD3-специфический VL-домен, причем указанный CD3-специфический VL-домен выбран из группы, состоящей из
VL-4 h-mab2 (SEQ ID NO: 22),
VL-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 26),
VL-7 h-mab2 (SEQ ID NO: 28),
VL-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 30),
VL-9 h-mab2 (SEQ ID NO: 32) и
VL-10 h-mab2 (SEQ ID NO: 34);
(ii) домен (В), содержащий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи второго иммуноглобулина (VH2); и
(iii) домен (С),
причем указанные домены (А) и (В) не связываются друг с другом с образованием эпитопсвязывающего сайта; и
(II) указанная вторая полипептидная цепь содержит амино (N-) конец и карбокси (С-) конец и находится от N-конца к С-концу:
(i) домен (D), содержащий связывающую область вариабельного домена легкой цепи указанного второго иммуноглобулина (VL2);
(ii) домен (Е), содержащий указанный CD3-специфический VH-домен, причем указанный CD3-специфический VH-домен выбран из группы, состоящей из
VH-1 h-mab2 (SEQ ID NO: 36),
VH-2 h-mab2 (SEQ ID NO: 38),
VH-3 h-mab2 (SEQ ID NO: 40),
VH-4 h-mab2 (SEQ ID NO: 42),
VH-5 h-mab2 (SEQ ID NO: 44),
VH-6 h-mab2 (SEQ ID NO: 46),
VH-7 h-mab2 (SEQ ID NO: 48) и
VH-8 h-mab2 (SEQ ID NO: 50); и
(iii) домен (F);
причем указанные домены (D) и (Е) не связаны друг с другом с образованием эпитопсвязывающего сайта,
причем:
(1) указанные домены (А) и (Е) связаны с образованием указанного антигенсвязывающего домена, который способен к иммуноспецифическому связыванию как с CD3 человека, так и с CD3 млекопитающего, являющегося человеком;
(2) указанные домены (В) и (D) связаны с образованием сайта связывания, который иммуноспецифически связывается со вторым эпитопом, указанный второй эпитоп отличается от эпитопа CD3, с которым связывается антигенсвязывающий домен, образованный вследствие указанного связывания указанных доменов (А) и (Е); и
(3) указанные домены (С) и (F) ковалентно связаны вместе.
8. CD3-связывающая молекула по п.7, в которой указанный второй эпитоп не является эпитопом CD3.
9. CD3-связывающая молекула по п.7, в которой указанным вторым эпитопом является эпитоп CD3, который отличается от эпитопа CD3, с которым связывается антигенсвязывающий домен, образованный вследствие указанного связывания указанных доменов (А) и (Е).
10. CD3-связывающая молекула по любому из пп.1-9, которая гуманизирована.
11. CD3-связывающая молекула по любому из пп.1-3 или 7-10, которая способна к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и флуоресцеином.
12. CD3-связывающая молекула по любому из пп.7-10, которая способна к иммуноспецифическому связыванию и с (i) CD3, и с (ii) (а) опухолеспецифическим антигеном или (ii) (b) антигеном клеточной поверхности, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности.
13. CD3-связывающая молекула по п.12, которая способна к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и с опухолеспецифическим антигеном, экспрессированным на опухолевой клетке, причем указанной опухолевой клеткой является клетка злокачественной опухоли, выбранной из группы, состоящей из рака молочной железы, рака предстательной железы, рака желудка, рака легкого, рака ободочной кишки, рака прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака печени, рака яичника, рака ротовой полости, рака глотки, рака пищевода, рака гортани, рака кости, рака кожи, меланомы, рака матки, рака яичек, рака мочевого пузыря, рака почки, рака головного мозга, глиобластомы, рака щитовидной железы, лимфомы, миеломы и лейкоза.
14. CD3-связывающая молекула по п.12, которая способна к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и с антигеном, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности, причем указанным антигеном, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности является HER2/neu, B7-H3, CD20, PSMA, IGF-1R или Ep-CAM.
15. CD3-связывающая молекула по п.12, которая способна к иммуноспецифическому связыванию с CD3 и с антигеном, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности,
причем указанным антигеном, рецептором или лигандом рецептора клеточной поверхности является молекула, которая вовлечена в указанное связывание Т-клетки с В-клеткой,
указанная молекула, которая вовлечена в указанное связывание Т-клетки с В-клеткой, выбрана из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD32B, CD38, CD40, CD79a, CD79b, CD80, CD86, LFA-I, LFA-3 и CFA-I.
16. CD3-связывающая молекула по любому из пп.7-10 и 12-14, причем указанный второй эпитопсвязывающий сайт способен связываться с В7-H3.
17. CD3-связывающая молекула по любому из пп.7-16, в которой CD3-специфический VL-домен представляет собой h-mab2 VL-6 (SEQ ID NO: 26).
18. CD3-связывающая молекула по любому из пп.7-17, в которой CD3-специфический VH-домен представляет собой h-mab2 VH-8 (SEQ ID NO: 50) или h-mab2 VH-4 (SEQ ID NO: 42).
19. CD3-связывающая молекула по п.18, в которой:
(A) CD3-специфический VL-домен представляет собой h-mab2 VL-6 (SEQ ID NO: 26) и
(B) CD3-специфический VH-домен представляет собой h-mab2 VH-4 (SEQ ID NO: 42).
20. CD3-связывающая молекула по любому из пп.7-19, в которой CD3-связывающее диатело содержит Fc-домен или его часть.
21. CD3-связывающая молекула по любому из пп.7-20, в которой:
(A) указанный первый полипептид содержит последовательность Е-спирали и указанный второй полипептид содержит последовательность K-спирали или
(B) указанный первый полипептид содержит последовательность K-спирали и указанный второй полипептид содержит последовательность Е-спирали.
22. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественного новообразования, аутоиммунного или воспалительного заболевания, которая содержит CD3-связывающую молекулу по любому из пп.1-21 и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.
23. Применение CD3-связывающей молекулы по любому из пп.1-21 для получения лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, аутоиммунного или воспалительного заболевания.
24. Применение фармацевтической композиции по п.22 для получения лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, аутоиммунного или воспалительного заболевания.
25. Применение по п.23 или 24, причем аутоиммунное или воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из инсулинозависимого диабета типа I, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, миастении гравис, целиакии, синдрома Шегрена, болезни Грейвса, болезни Крона, аутоиммунного гепатита, псориаза, псориатического артрита, астмы, аллергического ринита, эффектов вследствие трансплантации органа или болезни трансплантат против хозяина (GVHD).
26. Применение по п.25, причем указанное аутоиммунное или воспалительное заболевание представляет собой инсулинозависимый диабет типа I.

---