(11)	029359 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201490160
(22)	2012.06.15
(51)	C12N 15/82 (2006.01)
(31)	11171196.6
(32)	2011.06.23
(33)	EP
(43)	2014.04.30
(86)	PCT/EP2012/061436
(87)	WO 2012/175420 2012.12.27
(71)	(73) СЕСВАНДЕРХАВЕ НВ (BE)
(72)	Кляйн Элодье, Графф Вероник, Жильмер Давид, Бро Вероник (FR), Вейен Ги, Лефевр Марк (BE)
(74)	Харин А.В., Котов И.О. (RU)
(54)	КОНСТРУКЦИИ ДЛЯ САЙЛЕНСИНГА ГЕНА P0 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Конструкция РНК, индуцирующая у растения или у растительной клетки толерантность или резистентность к вирусу BMYV, содержащая последовательность смыслового сегмента и последовательность антисмыслового сегмента, полученные на основе гена Р0 генома BMYV (вирус слабого пожелтения свеклы) или на основе его ортологичного гена, где обе последовательности указанных сегментов содержат нуклеотидный фрагмент по меньшей мере из 20 нуклеотидов, имеющий последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности гена Р0 (SEQ ID NO:17) из генома BMYV или его ортологичного гена.

2. Конструкция РНК по п.1, где последовательность(ти) смыслового сегмента и/или антисмыслового сегмента дополнительно содержит(ат) нуклеотидный фрагмент, имеющий последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную 5'-концевой нетранслируемой последовательности (5' UTR), находящейся рядом с нуклеотидной последовательностью гена Р0 из генома BMYV.

3. Конструкция РНК по п.1, где последовательности смыслового сегмента и антисмыслового сегмента дополнительно содержат нуклеотидный фрагмент, имеющий последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности гена Р1 генома BMYV.

4. Конструкция РНК по любому из пп.1-3, где смысловой сегмент содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO:1 и антисмысловой сегмент содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO:3.

5. Конструкция РНК по любому из пп.1-4, где обе последовательности сегментов дополнительно содержат нуклеотидный фрагмент по меньшей мере из 20 нуклеотидов, имеющий последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности генома BNYVV (вирус некротического пожелтения жилок свеклы).

6. Конструкция РНК по п.5, где смысловой сегмент содержит фрагмент SEQ ID NO:5 и антисмысловой сегмент содержит фрагмент SEQ ID NO:6.

7. Конструкция РНК по любому из пп.1-3 или 5, где указанные сегмент(ы) и фрагмент(ы) содержат более чем 25 нуклеотидов.

8. Конструкция ДНК, транскрибируемая в конструкцию РНК по любому из пп.1-7.

9. Вектор, содержащий конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-8.

10. Молекула двухцепочечной самокомплементарной РНК, экспрессируемая конструкцией ДНК по п.8 или вектором по п.9, для придания устойчивости к вирусу BMYV, несущему ген Р0 (SEQ ID NO:17), или к другому вирусу, несущему ген, ортологичный гену Р0.

11. Способ индуцирования у растения или у растительной клетки толерантности или резистентности к вирусу BMYV, включающий получение конструкции нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-8, функционально связанной с одной или более чем одной регуляторной последовательностью, активной в растении или растительной клетке, или вектора по п.9, и трансформацию растительной клетки указанной конструкцией нуклеиновой кислоты или указанным вектором.

12. Способ по п.11, где резистентность представляет собой полную резистентность.

13. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения, толерантные или резистентные к вирусу BMYV и содержащие конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-8, функционально связанную с одной или более чем одной регуляторной последовательностью, активной в растении или растительной клетке, и/или содержащие вектор по п.9, и/или молекулу двухцепочечной самокомплементарной РНК по п.10.

14. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по п.13, где резистентность представляет собой полную резистентность.

15. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по любому из пп.13 и 14, где конструкция нуклеиновой кислоты представляет собой конструкцию ДНК по п.8.

16. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по любому из пп.13-15, выбранные из группы, состоящей из салата-латука, огурца, картофеля, сахарного тростника, гороха, ячменя и сахарной свеклы.

17. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по п.16, представляющие собой сахарную свеклу или клетку сахарной свеклы.

18. Воспроизводящаяся структура трансгенного растения, происходящая из клетки трансгенного растения по любому из пп.13-17, где указанная воспроизводящаяся структура выбрана из группы, состоящей из каллусов, почек или зародышей.