(11)	029334 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201270775
(22)	2011.05.03
(51)	C07K 14/78 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) A61K 38/39 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01)
(31)	61/330,672; 13/098,851
(32)	2010.05.03; 2011.05.02
(33)	US
(43)	2013.07.30
(86)	PCT/US2011/034998
(87)	WO 2011/140086 2011.11.10
(71)	(73) БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(72)	Госселин Майкл Л., Фабрицио Давид, Сваин Джоанна Ф., Митчелл Трейси С., Кампфаусен Рей, Клоад Шерон Т., Фурфайн Эрик, Морин Пол Е., Мухержи Ранжан, Тейлор Симеон И. (US)
(74)	Лыу Т.Н. (RU)
(54)	СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЫВОРОТОЧНЫЙ АЛЬБУМИН МОЛЕКУЛЫ

(57) 1. Полипептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (¹⁰Fn3), где домен ¹⁰Fn3 связывает домен 1 или 2 сывороточного альбумина человека с K_D 1 мкМ или менее, где домен ¹⁰Fn3 содержит модифицированную аминокислотную последовательность в одной или более из петель АВ, ВС, CD, DE, EF и FG по сравнению с доменом ¹⁰Fn3 дикого типа (SEQ ID NO: 1) и домен ¹⁰Fn3 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности домена ¹⁰Fn3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 и 24-44.

2. Полипептид по п.1, время полувыведения которого в присутствии альбумина по меньшей мере в 5 раз больше, чем время полувыведения полипептида в сыворотке крови в отсутствие сывороточного альбумина.

3. Полипептид по п.1 или 2, в котором домен ¹⁰Fn3 связывает сывороточный альбумин в диапазоне рН от 5,5 до 7,4.

4. Полипептид по любому из пп.1-3, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит одну или более из петель, выбранных из петли ВС, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, петли DE, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и петли FG, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.

5. Полипептид по любому из пп.1-3, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит одну или более из петель, выбранных из петли ВС, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, петли DE, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и петли FG, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.

6. Полипептид по любому из пп.1-3, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит одну или более из петель, выбранных из петли ВС, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, петли DE, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и петли FG, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.

7. Полипептид по любому из пп.1-3, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит одну или более из петель, выбранных из петли ВС, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, петли DE, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, и петли FG, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.

8. Полипептид по любому из пп.1-3, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит одну или более из петель, выбранных из петли ВС, содержащей аминокислотную последовательность в SEQ ID NO: 21, петли DE, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, и петли FG, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23.

9. Полипептид по п.1, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 и 24-44.

10. Полипептид по любому из пп.1-9, в котором домен ¹⁰Fn3 дополнительно содержит N-концевую последовательность, выбранную из любой из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 45-53.

11. Полипептид по любому из пп.1-9, в котором домен ¹⁰Fn3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 89-116 и 222-225.

12. Полипептид по п.1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

13. Полипептид по п.11, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90.

14. Полипептид по любому из пп.1-13, слитый с гетерологичным полипептидом.

15. Полипептид по п.14, в котором гетерологичный белок выбран из фактора роста фибробластов 21 (FGF21), инсулина, пептида рецептора инсулина, костного морфогенетического белка 9 (ВМР-9), амилина, пептида YY (PYY_3-36), панкреатического полипептида (РР), интерлейкина-21 (IL-21), глюкагон-подобного пептида 1 (GLP-1), плектазина, програнулина, атстррина, остеокальцина (OCN), апелина или полипептида, содержащего домен ¹⁰Fn3.

16. Полипептид по п.14, в котором гетерологичный белок содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 118, 132-174.

17. Полипептид по любому из пп.14-16, в котором гетерологичный белок содержит второй домен ¹⁰Fn3, который связывает белок-мишень, отличный от HSA.

18. Полипептид по п.14, дополнительно содержащий третий домен ¹⁰Fn3, который связывает белок-мишень.

19. Полипептид, содержащий десятый домен фибронектина III типа (¹⁰Fn3), где домен ¹⁰Fn3 (I) содержит модифицированную аминокислотную последовательность в одной или более из петель АВ, ВС, CD, DE, EF и FG по сравнению с доменом ¹⁰Fn3 дикого типа, (II) связывает молекулу-мишень, не связанную доменом ¹⁰Fn3 дикого типа, и (III) содержит С-концевую последовательность, имеющую последовательность (ED)_n, где n представляет собой целое число от 3 до 7 и домен ¹⁰Fn3 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности домена ¹⁰Fn3, состоящей из остатков 9-94 любой из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20 и 24-44.

20. Полипептид по п.19, в котором С-концевая последовательность на ее N-конце дополнительно содержит Е, I или EI.

21. Полипептид по п.19 или 20, в котором С-концевая последовательность повышает растворимость и/или уменьшает агрегацию полипептида.

22. Полипептид по любому из пп.19-21, в котором полипептид связывает мишень с K_D 1 мкМ или менее.

23. Фармацевтическая композиция для лечения диабета, инсулинорезистентности, ожирения, избыточного веса, дислипидемии, гипогликемии, расстройств пищевого поведения или сердечно-сосудистых заболеваний, содержащая полипептид по любому из пп.1-22.

24. Нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по любому из пп.1-22.

25. Нуклеиновая кислота по п.24, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в табл. 3.

26. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.24 или 25.

27. Клетка-хозяин для получения полипептида по любому из пп.1-22, содержащая нуклеиновую кислоту по п.24 или 25.