|
| |
(11) | 024877 (13) B1 |
    Разделы: A B C D E F G H  |
(21) | 201170443 |
(22) | 2009.10.02 |
(51) | C07K 16/28 (2006.01) |
(31) | 61/102,288; 61/102,297; 61/102,307; 61/102,315; 61/102,319; 61/102,327; 61/102,331; 61/102,334; 61/102,336 |
(32) | 2008.10.02 |
(33) | US |
(43) | 2011.12.30 |
(86) | PCT/US2009/059446 |
(87) | WO 2010/040105 2010.04.08 |
(71) | (73) ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ, ЛЛС (US) |
(72) | Томпсон Питер Армстронг, Баум Питер Роберт, Тэн Филип, Блэнкеншип Джон В., Натараджан Сатиш Кумар (US) |
(74) | Нилова М.И. (RU) |
(54) | СВЯЗЫВАЮЩИЕ МНОЖЕСТВО МИШЕНЕЙ БЕЛКИ, ОБЛАДАЮЩИЕ АНТАГОНИСТИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ ПО ОТНОШЕНИЮ К CD86 |
(57) 1. Мультиспецифичный гибридный белок для ингибирования активности T-клеток или блокирования реакций, опосредуемых T-клетками, содержащий домен, связывающий CD86, соединенный с гетерологичным связывающим доменом посредством промежуточного домена, характеризующийся тем, что указанный гетерологичный связывающий домен представляет собой агонист IL-10.
2. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что домен, связывающий CD86, представляет собой эктодомен CTLA-4 или субдомен эктодомена CTLA4.
3. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что домен, связывающий CD86, представляет собой Fab, scFv, доменное антитело или антитело, состоящее только из тяжелой цепи, обладающее специфичностью по отношению к CD86.
4. Мультиспецифичный гибридный белок по п.3, отличающийся тем, что домен, связывающий CD86, содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела FUN1, направленного против CD86, или его гуманизированного варианта.
5. Мультиспецифичный гибридный белок по п.4, отличающийся тем, что домен, связывающий CD86, содержит аминокислоты 1-258 последовательности SEQ ID NO: 187 или 237.
6. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что домен, связывающий CD86, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 3-6, 410 и 412.
7. Мультиспецифичный гибридный белок по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что указанный агонист IL-10 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или ее вариант, содержащий точечную мутацию в положении 87 последовательности SEQ ID NO: 7, где аминокислотный остаток в положении 87 представляет собой аланин, глицин, валин, лейцин, пролин, фенилаланин, тирозин, триптофан, серин, треонин, цистеин, метионин, аспарагин, глютамин, лизин, аргинин, гистидин, аспартат или глютамат.
8. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что указанный промежуточный домен содержит константную область иммуноглобулина или фрагмент константной области иммуноглобулина, расположенные между указанными доменом, связывающим CD86, и гетерологичным связывающим доменом.
9. Мультиспецифичный гибридный белок по п.8, отличающийся тем, что указанная константная область иммуноглобулина или фрагмент константной области иммуноглобулина содержат домены СН2 и СН3 IgG1.
10. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что указанный промежуточный домен содержит константную область иммуноглобулина, расположенную между первым и вторым линкерами, причем указанные первый и второй линкеры содержат последовательности, независимо выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 43-166, 244, 307, 320, 355-379 и 383-398.
11. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что указанный промежуточный домен содержит следующую структуру, в направлении от N-конца к C-концу: -L1-X-L2-, где L1 и L2 независимо представляют собой линкер, содержащий от приблизительно 2 до приблизительно 150 аминокислот; и X выбран из группы, состоящей из константной области иммуноглобулина, фрагмента константной области иммуноглобулина, альбумина, трансферрина и каркасного домена, связывающего белок сыворотки.
12. Мультиспецифичный гибридный белок по п.11, отличающийся тем, что константная область иммуноглобулина или фрагмент константной области иммуноглобулина содержит домены СН2 и СН3 IgG1.
13. Мультиспецифичный гибридный белок по п.11, отличающийся тем, что L1 представляет собой шарнирный участок иммуноглобулина человека и, необязательно, один или более остатков цистеина в составе указанного шарнирного участка иммуноглобулина человека заменены на другую аминокислоту.
14. Мультиспецифичный гибридный белок по п.11, отличающийся тем, что X представляет собой Fc-фрагмент IgG1 человека или по меньшей мере один домен СН из его состава.
15. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что указанный промежуточный домен содержит домен димеризации.
16. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, имеющий следующее строение:
N-BD1-X-L2-BD2-C,
где BD1 представляет собой домен, связывающий CD86, причем указанный домен, связывающий CD86, по меньшей мере приблизительно на 90% идентичен эктодомену CTLA-4;
-Х- представляет собой -L1-CH2CH3-, где L1 представляет собой шарнирный участок IgG1 и -СН2СН3- представляет собой домены СН2СН3 Fc-фрагмента IgG1;
L2 представляет собой линкер, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 43-166, 244, 307, 320, 355-379 и 383-398; и
BD2 представляет собой агонист IL-10.
17. Мультиспецифичный гибридный белок по п.16, где L1 представляет собой шарнирный участок IgG1, подвергнутый мутации замены первого остатка цистеина.
18. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что указанный гибридный белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 9, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 237, 239, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 276, 302, 330, 334, 350, 352 и 354.
19. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что домен, связывающий CD86, содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где тяжелая цепь содержит CDR1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 308, CDR2, имеющий последовательность SEQ ID NO: 309, и CDR3, имеющий последовательность SEQ ID NO: 310, и где легкая цепь содержит CDR1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 311, CDR2, имеющий последовательность SEQ ID NO: 312, и CDR3, имеющий последовательность SEQ ID NO: 313.
20. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что агонист IL-10 представляет собой моно-IL-10.
21. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что агонист IL-10 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 380-382.
22. Мультиспецифичный гибридный белок по п.1, отличающийся тем, что промежуточный домен содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 409 и 415-417.
23. Мультиспецифичный гибридный белок по п.10, отличающийся тем, что первый линкер выбран из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 89, 100 и159-164.
24. Полинуклеотид, кодирующий мультиспецифичный гибридный белок по п.1.
25. Полинуклеотид по п.24, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 8, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 236, 238, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 265, 275, 301, 329, 333, 349, 351 и 353.
26. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п.24, функционально связанный с последовательностью, контролирующей экспрессию.
27. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.26.
28. Способ лечения заболевания, ассоциированного с CD86, IL-10 или их комбинацией, у субъекта, включающий введение терапевтически эффективного количества мультиспецифичного гибридного белка по п.1.
29. Способ лечения субъекта с аутоиммунным заболеванием, выбранным из группы, состоящей из ревматоидного артрита, юношеского ревматоидного артрита, астмы, системной красной волчанки, воспалительного заболевания кишечника (включая болезнь Крона и язвенный колит), реакции трансплантат-против-хозяина, псориаза, множественного склероза, дерматомиозита, полимиозита, злокачественной анемии, первичного билиарного цирроза, острого диссеминированного энцефаломиелита, болезни Аддисона, анкилозирующего спондилита, антифосфолипидного синдрома, аутоиммунного гепатита, диабетического миелита 1 типа, синдрома Гудпасчера, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, тиреоидита Хашимото, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, красной волчанки, обыкновенной пузырчатки, синдрома Шегрена, темпорального артрита (также известного как "узелковый периартериит"), аутоиммунной гемолитической анемии, буллезного пемфигоида, васкулита, глютеновой энтеропатии, эндометриоза, гнойного гидраденита, интерстициального цистита, очаговой склеродермии, склеродермии, нарколепсии, нейромиотонии, витилиго и аутоиммунного заболевания внутреннего уха, или применения в ходе подавления неблагоприятной иммунной реакции на аллотрансплантат органа, включающий введение терапевтически эффективного количества мультиспецифичного гибридного белка по п.1.
|
