(11)	024794 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201100312
(22)	2009.08.25
(51)	C12N 9/50 (2006.01) C12N 9/52 (2006.01) A61K 38/43 (2006.01) A61P 31/04 (2006.01)
(31)	0815484.1
(32)	2008.08.26
(33)	GB
(43)	2011.10.31
(86)	PCT/EP2009/060947
(87)	WO 2010/023207 2010.03.04
(71)	(73) КАТХОЛИКЕ УНИВЕРСИТЕЙТ ЛЁВЕН К.У. ЛЁВЕН Р ЭНД Д (BE)
(72)	Брирс Ивс (CH), Лавинь Роб, Волкарт Гёйдо (BE)
(74)	Гончаров В.В. (BY)
(54)	ВАРИАНТ ЭНДОЛИЗИНА СО ВСТРОЕННЫМ КАТИОННЫМ ПЕПТИДОМ С АКТИВНОСТЬЮ, РАЗРУШАЮЩЕЙ ЛИПОПОЛИСАХАРИД

(57) 1. Вариант эндолизина, в который встроен катионный пептид с активностью, разрушающей липополисахарид (ЛПС), в котором упомянутый катионный пептид состоит из 5-100 аминокислотных остатков и как минимум 70% аминокислотных остатков, содержащихся в катионном пептиде, представляют собой остатки аргинина и/или лизина, а от 0 до 30% - остатки серина и/или глицина.

2. Вариант эндолизина по п.1, в котором катионный пептид состоит из 5-50 аминокислотных остатков, а именно из 5-30 аминокислотных остатков.

3. Вариант эндолизина по п.1 или 2, в котором катионный пептид встроен в N-конец и/или С-конец эндолизина, в частности в N-конец эндолизина.

4. Вариант эндолизина по любому из предшествующих пунктов, в котором эндолизин обладает разрушающим действием на клеточные стенки грамотрицательных бактерий, в частности на клеточные стенки грамотрицательных бактерий следующих семейств: Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae, Spirochaetaceae, Leptospiraceae, Bacteroidaceae.

5. Вариант эндолизина по любому из пп.1-3, в котором эндолизин обладает разрушающим действием на клеточные стенки грамотрицательных бактерий, в частности на клеточные стенки грамотрицательных бактерий следующей группы: Escherichia, Salmonella, Shigella, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia, Yersinia, Pseudomonas, Burkholderia, Stenotrophomonas, Shewanella, Sphingomonas, Comamonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, Brucella, Francisella, Bordetella, Legionella, Bartonella, Coxiella, Haemophilus, Pasteurella, Mannheimia, Actinobacillus, Gardnerella, Treponema, Borrelia, Campylobacter, Helicobacter, Spirillum, Streptobacillus, Bacteroides, Fusobacterium, Prevotella, Porphyromonas и Acinetobacter, в частности A. Baumanii.

6. Вариант эндолизина по любому из предшествующих пунктов, в котором эндолизин выбирают из группы, состоящей из phiKZgp144 в соответствии с SEQ ID NO: 1, ELgp188 в соответствии с SEQ ID NO: 2, эндолизина Salmonella в соответствии с SEQ ID NO: 3, эндолизина Enterobacteria фага Т4 в соответствии с SEQ ID NO: 4, эндолизина Acinetobacter baumanii в соответствии с SEQ ID NO:5, эндолизина E.coli фага K1F в соответствии с SEQ ID NO: 6, эндолизина PSP3 Salmonella в соответствии с SEQ ID NO: 8 и эндолизина E.coli фага Р2 в соответствии с SEQ ID NO: 9.

7. Вариант эндолизина по любому из предшествующих пунктов, в котором катионный пептид содержит как минимум один KRK мотив.

8. Вариант эндолизина по пп.1-6, в котором катионный пептид содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10-30.

9. Вариант эндолизина по любому из предшествующих пунктов, в котором упомянутый вариант эндолизина содержит аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO: 35-49, 53, 57, 62-64 и 66-78.

10. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, состоящая из нуклеотидной последовательности, кодирующей вариант эндолизина по любому из пп.1-9.

11. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.10.

12. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.10 или вектор по п.11.

13. Клетка-хозяин по п.12, представляющая собой бактериальную клетку или дрожжевую клетку.

14. Способ получения варианта эндолизина по любому из пп.1-9, включающий экспрессию варианта эндолизина в клетке-хозяине по любому из пп.12, 13.

15. Применение варианта эндолизина по любому из пп.1-9 в качестве лекарственного препарата для лечения и/или профилактики дисфункций, заболеваний или симптоматики, ассоциируемых с заражением патогенными грамотрицательными бактериями.

16. Применение по п.15, в котором лекарственный препарат является ингредиентом косметических средств.

17. Применение варианта эндолизина по любому из пп.1-9 для устранения, уменьшения и/или предотвращения заражения грамотрицательными бактериями пищевых продуктов, загрязнения оборудования на предприятиях пищевой отрасли, различных поверхностей, контактирующих с пищевыми продуктами, изделий медицинского назначения, поверхностей в больницах и хирургических блоках.

18. Применение варианта эндолизина по любому из пп.1-9 в качестве диагностического средства для выявления заражения грамотрицательными бактериями.

19. Фармацевтическая композиция с улучшенной антимикробной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, содержащая вариант эндолизина по любому из пп.1-9.