(11)	024755 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201291010
(22)	2011.05.20
(51)	A61K 38/00 (2006.01) C07K 7/00 (2006.01)
(31)	10163564.7; 61/428,016
(32)	2010.05.21; 2010.12.29
(33)	EP; US
(43)	2013.09.30
(86)	PCT/EP2011/058307
(87)	WO 2011/144756 2011.11.24
(71)	(73) ИксЭль-ПРОТЕИН ГМБХ (DE)
(72)	Скерра Арне, Биндер Ули, Шлапши Мартин (DE)
(74)	Поликарпов А.В. (RU)
(54)	БИОСИНТЕТИЧЕСКИЕ НЕРЕГУЛЯРНЫЕ СПИРАЛЬНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ ПРОЛИНА/АЛАНИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

(57) 1. Конъюгат лекарственного средства, включающий:

(1) биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую исключительно из аминокислотных остатков пролина и аланина, которая состоит по меньшей мере из 50 аминокислотных остатков пролина (Pro) и аланина (Ala);

(2) лекарственное средство, выбранное из группы, состоящей из (а) биологически активного белка или полипептида, который имеет или опосредует биологическую активность, и (b) низкомолекулярного лекарственного средства.

2. Конъюгат лекарственного средства по п.1, где указанный нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент содержит аминокислотную последовательность, состоящую из аминокислотных остатков в количестве от примерно 50 до примерно 3000.

3. Конъюгат лекарственного средства по п.1 или 2, где указанные остатки пролина составляют более чем примерно 10% и менее чем примерно 75% аминокислотной последовательности.

4. Конъюгат лекарственного средства по любому из пп.1-3, где указанный нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент содержит множество аминокислотных повторов, где указанный повтор состоит из остатков пролина и аланина и где не более чем шесть последовательных аминокислотных остатков идентичны.

5. Конъюгат лекарственного средства по любому из пп.1-4, где указанный нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из

либо вариантов с круговыми перестановками, либо мультимера(ов) этих последовательностей полностью, либо участков этих последовательностей.

6. Конъюгат лекарственного средства по любому из пп.1-5, где указанный полипептид с биологической активностью, указанный биологически активный белок или указанный полипептид, который содержит или представляет собой аминокислотную последовательность, которая имеет или опосредует биологическую активность, выбран из группы, состоящей из связывающих белков, фрагментов антител, цитокинов, факторов роста, гормонов или ферментов.

7. Конъюгат лекарственного средства по любому из пп.1-6, где указанный биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент опосредует повышенную стабильность in vivo и/или in vitro указанного конъюгата лекарственного средства.

8. Конъюгат лекарственного средства по п.7, где указанная повышенная стабильность in vivo представляет собой пролонгированный период полувыведения из плазмы указанного конъюгата лекарственного средства, который включает указанный биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую исключительно из аминокислотных остатков пролина и аланина, где указанная аминокислотная последовательность состоит по меньшей мере из 50 аминокислотных остатков пролина (Pro) и аланина (Ala), по сравнению со стабильностью контрольного полипептида или контрольного конъюгата без указанного нерегулярного спирального полипептида или полипептидного сегмента.

9. Фармацевтическая или диагностическая композиция, содержащая конъюгат лекарственного средства по любому из пп.1-8.

10. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, который содержится в конъюгате лекарственного средства, как он определен в любом из пп.1-9, или кодирующая белковый конъюгат, который содержит биологически активный белок, как он определен в п.6, и который содержит биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую исключительно из аминокислотных остатков пролина и аланина, где указанная аминокислотная последовательность состоит по меньшей мере из 50 аминокислотных остатков пролина (Pro) и аланина (Ala).

11. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая конъюгат лекарственного средства, как он определен в любом из пп.1-8, содержащая:

(1) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую транслируемую аминокислотную и/или лидерную последовательность;

(2) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую исключительно из аминокислотных остатков пролина и аланина, где указанная аминокислотная последовательность состоит по меньшей мере из 50 аминокислотных остатков пролина (Pro) и аланина (Ala);

(3) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую биологически активный белок или указанный полипептид, который имеет или опосредует биологическую и/или терапевтическую активность;

(4) последовательность нуклеиновой кислоты, которая представляет собой стоп-кодон трансляции.

12. Молекула нуклеиновой кислоты по п.11, где участки или сегменты молекулы нуклеиновой кислоты, как они определены в (2) и (3), взаимозаменяемы в своих положениях в указанной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей конъюгат лекарственного средства.

13. Молекула нуклеиновой кислоты по п.11 или 12, которая возможно содержит сайт расщепления протеазой, и/или сайт химического расщепления, и/или сайт распознавания между участками или сегментами, как они определены в (1) и в (2), и/или между участками или сегментами, как они определены в (2) и (3).

14. Нуклеиновая кислота, кодирующая биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую исключительно из аминокислотных остатков пролина и аланина, где указанная аминокислотная последовательность состоит по меньшей мере из 50 аминокислотных остатков пролина (Pro) и аланина (Ala), где указанная молекула нуклеиновой кислоты содержит:

(1) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую транслируемую аминокислотную и/или лидерную последовательность;

(2) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный биосинтетический нерегулярный спиральный полипептид или полипептидный сегмент, содержащий аминокислотную последовательность, состоящую исключительно из аминокислотных остатков пролина и аланина;

(3) последовательность нуклеиновой кислоты, которая представляет собой стоп-кодон трансляции.

15. Молекула нуклеиновой кислоты по п.14, которая возможно содержит между (1) и (2) сайт расщепления протеазой, и/или сайт химического расщепления, и/или сайт распознавания.

16. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.11-15.

17. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.11-15 или вектор по п.16.

18. Способ получения нерегулярного спирального полипептида или нерегулярного спирального полипептидного сегмента, который содержится в конъюгате лекарственного средства по любому из пп.1-6, для получения конъюгата биологически активного белка, либо лекарственного средства, либо пищевого продукта, содержащего указанный нерегулярный спиральный полипептид или указанный нерегулярный спиральный полипептидный сегмент, и/или для получения полипептида, который имеет или опосредует биологическую активность, как определено в любом из пп.1-8, и который дополнительно содержит указанный нерегулярный спиральный полипептид или нерегулярный спиральный полипептидный сегмент, включающий культивирование клетки по п.17 и выделение указанного нерегулярного спирального полипептида или биологически активного белка и/или указанного биологически активного белка или указанного полипептида из культуры или из указанной клетки.

19. Применение конъюгата лекарственного средства по любому из пп.1-8 для лечения расстройств, обусловленных гормональной недостаточностью, аутоиммунного заболевания, пролиферативных расстройств, рака, анемии, неоваскулярных заболеваний, инфекционных/воспалительных заболеваний, аллергических расстройств, тромбоза, инфаркта миокарда, рестеноза, диабета, бесплодия, болезни Гоше, хронического гепатита В, гепатита С, гипогликемии, акромегалии, дефицита аденозиндеаминазы, тромбоцитопении, гемофилии, анемии, ожирения, болезни Альцгеймера, липодистрофии, псориаза, метастатической меланомы, остеоартрита, дислипидемии, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, астмы, остеопороза и реперфузионного повреждения или других заболеваний почек.

20. Применение композиции по п.9 для лечения расстройств, обусловленных гормональной недостаточностью, аутоиммунного заболевания, пролиферативных расстройств, рака, анемии, неоваскулярных заболеваний, инфекционных/воспалительных заболеваний, аллергических расстройств, тромбоза, инфаркта миокарда, рестеноза, диабета, бесплодия, болезни Гоше, хронического гепатита В, гепатита С, гипогликемии, акромегалии, дефицита аденозиндеаминазы, тромбоцитопении, гемофилии, анемии, ожирения, болезни Альцгеймера, липодистрофии, псориаза, метастатической меланомы, остеоартрита, дислипидемии, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, астмы, остеопороза и реперфузионного повреждения или других заболеваний почек.

21. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15 для лечения расстройств, обусловленных гормональной недостаточностью, аутоиммунного заболевания, пролиферативных расстройств, рака, анемии, неоваскулярных заболеваний, инфекционных/воспалительных заболеваний, аллергических расстройств, тромбоза, инфаркта миокарда, рестеноза, диабета, бесплодия, болезни Гоше, хронического гепатита В, гепатита С, гипогликемии, акромегалии, дефицита аденозиндеаминазы, тромбоцитопении, гемофилии, анемии, ожирения, болезни Альцгеймера, липодистрофии, псориаза, метастатической меланомы, остеоартрита, дислипидемии, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, астмы, остеопороза и реперфузионного повреждения или других заболеваний почек.

22. Применение вектора по п.16 для лечения расстройств, обусловленных гормональной недостаточностью, аутоиммунного заболевания, пролиферативных расстройств, рака, анемии, неоваскулярных заболеваний, инфекционных/воспалительных заболеваний, аллергических расстройств, тромбоза, инфаркта миокарда, рестеноза, диабета, бесплодия, болезни Гоше, хронического гепатита В, гепатита С, гипогликемии, акромегалии, дефицита аденозиндеаминазы, тромбоцитопении, гемофилии, анемии, ожирения, болезни Альцгеймера, липодистрофии, псориаза, метастатической меланомы, остеоартрита, дислипидемии, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, астмы, остеопороза и реперфузионного повреждения или других заболеваний почек.

23. Применение клетки по п.17 для лечения расстройств, обусловленных гормональной недостаточностью, аутоиммунного заболевания, пролиферативных расстройств, рака, анемии, неоваскулярных заболеваний, инфекционных/воспалительных заболеваний, аллергических расстройств, тромбоза, инфаркта миокарда, рестеноза, диабета, бесплодия, болезни Гоше, хронического гепатита В, гепатита С, гипогликемии, акромегалии, дефицита аденозиндеаминазы, тромбоцитопении, гемофилии, анемии, ожирения, болезни Альцгеймера, липодистрофии, псориаза, метастатической меланомы, остеоартрита, дислипидемии, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, астмы, остеопороза и реперфузионного повреждения или других заболеваний почек.

24. Применение биологически активного белка или полипептида, который содержит указанный нерегулярный спиральный полипептид или нерегулярный спиральный полипептидный сегмент и который получен способом по п.18, для лечения расстройств, обусловленных гормональной недостаточностью, аутоиммунного заболевания, пролиферативных расстройств, рака, анемии, неоваскулярных заболеваний, инфекционных/воспалительных заболеваний, аллергических расстройств, тромбоза, инфаркта миокарда, рестеноза, диабета, бесплодия, болезни Гоше, хронического гепатита В, гепатита С, гипогликемии, акромегалии, дефицита аденозиндеаминазы, тромбоцитопении, гемофилии, анемии, ожирения, болезни Альцгеймера, липодистрофии, псориаза, метастатической меланомы, остеоартрита, дислипидемии, ревматоидного артрита, системной красной волчанки, рассеянного склероза, астмы, остеопороза и реперфузионного повреждения или других заболеваний почек.

25. Применение конъюгата лекарственного средства по любому из пп.1-8 в качестве лекарственного средства, которое обладает повышенной стабильностью in vivo и/или in vitro указанного нерегулярного спирального полипептида или полипептидного сегмента, биологически активного белка или конъюгата лекарственного средства.

26. Применение композиции по п.9 в качестве лекарственного средства, которое обладает повышенной стабильностью in vivo и/или in vitro указанного нерегулярного спирального полипептида или полипептидного сегмента, биологически активного белка или конъюгата лекарственного средства.

27. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.10-15 в качестве лекарственного средства, которое обладает повышенной стабильностью in vivo и/или in vitro указанного нерегулярного спирального полипептида или полипептидного сегмента, биологически активного белка или конъюгата лекарственного средства.

28. Применение вектора по п.16 в качестве лекарственного средства, которое обладает повышенной стабильностью in vivo и/или in vitro указанного нерегулярного спирального полипептида или полипептидного сегмента, биологически активного белка или конъюгата лекарственного средства.

29. Применение клетки по п.17 в качестве лекарственного средства, которое обладает повышенной стабильностью in vivo и/или in vitro указанного нерегулярного спирального полипептида или полипептидного сегмента, биологически активного белка или конъюгата лекарственного средства.