(11)	023674 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201290568
(22)	2010.12.29
(51)	C07K 16/46 (2006.01) A61K 39/395 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01) A61P 37/00 (2006.01)
(31)	61/290,840; 61/365,266; 61/366,743
(32)	2009.12.29; 2010.07.16; 2010.07.22
(33)	US
(43)	2013.02.28
(86)	PCT/US2010/062436
(87)	WO 2011/090762 2011.07.28
(71)	(73) ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ, ЛЛС (US)
(72)	Блэнкеншип Джон В., Тэн Филип (US)
(74)	Нилова М.И. (RU)
(54)	ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

(57) 1. Полипептидный гетеродимер, включающий:

(а) первый одноцепочечный полипептид (SCP-I), включающий от одного до четырех связывающих доменов, которые специфически связываются с 1-4 мишенями, шарнирный участок (Н-I), домен гетеродимеризации иммуноглобулина (HD-I), и домен СН2 иммуноглобулина, и домен СН3 иммуноглобулина IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD или любую их комбинацию (СН2СН3-1); и

(б) второй одноцепочечный полипептид (SCP-II), включающий от нуля до четырех связывающих доменов, которые специфически связываются с 0-4 мишени, шарнирный участок (Н-II), домен гетеродимеризации иммуноглобулина (HD-II), и домен СН2 иммуноглобулина, и домен СН3 иммуноглобулина IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD или любую их комбинацию (СН2СН3-II); где

(i) домен гетеродимеризации иммуноглобулина первого одноцепочечного полипептида (HD-I) и домен гетеродимеризации иммуноглобулина второго одноцепочечного полипептида (HD-II) преимущественно связываются друг с другом с образованием полипептидного гетеродимера, состоящего из первого одноцепочечного полипептида (SCP-I) и второго одноцепочечного полипептида (SCP-II), и

(1) домен гетеродимеризации иммуноглобулина первого одноцепочечного полипептида (HD-I) включает первый участок СН1 иммуноглобулина, и домен гетеродимеризации иммуноглобулина второго одноцепочечного полипептида (HD-II) включает первый участок CL иммуноглобулина, или

(2) домен гетеродимеризации иммуноглобулина первого одноцепочечного полипептида (HD-I) включает первый участок CL иммуноглобулина, и домен гетеродимеризации иммуноглобулина второго одноцепочечного полипептида (HD-II) включает первый участок иммуноглобулина СН1; и

(ii) при этом первый участок CL представляет собой участок Ck, который представляет собой измененный участок Сk иммуноглобулина человека, в котором одна или более аминокислот участка Сk человека дикого типа заменены в положениях N29, N30, Q52, V55, Т56, S68 или Т70,

при условии, что полипептидный гетеродимер включает по меньшей мере два связывающих домена (BD1 и BD2), которые специфически связываются по меньшей мере с двумя различными мишенями.

2. Полипептидный гетеродимер по п.1, отличающийся тем, что связывающие домены представляют собой одноцепочечные полипептиды Fv (scFv).

3. Полипептидный гетеродимер по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептидный гетеродимер включает три связывающих домена (BD1, BD2 и BD3), четыре связывающих домена (BD1, BD2, BD3 и BD4) или от пяти до восьми связывающих доменов.

4. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что по меньшей мере один связывающий домен представляет собой агонист ИЛ-10, HLA-G, HGF, ИЛ-35, PD-1, BTLA, TNFR1, TNFR2, DR4, DR5, TWEAKR или FAS.

5. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что по меньшей мере один связывающий домен специфически связывается с комплексом TCR или его компонентом и по меньшей мере один другой связывающий домен специфически связывается с ПСМА, CD79b, CD19, HLA-DR, CD20, RON, c-Met или СЕАСАМ-6.

6. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что по меньшей мере один связывающий домен специфически связывается с CD28 и по меньшей мере другой связывающий домен специфически связывается с или является антагонистом CD79b, гиперИЛ-6, PDL2, моноИЛ-10, CD86, LIGHT, GITRL, CD40, PDL1, HVEM или LTBR.

7. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что по меньшей мере один связывающий домен специфически связывается с CD28 и по меньшей мере другой связывающий домен является агонистом ИЛ-10, HLA-G, ГФР, ИЛ-35, PD-1 или BTLA.

8. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что домен гетеродимеризации иммуноглобулина первого одноцепочечного полипептида (HD-I) включает первый участок иммуноглобулина СН1 и домен гетеродимеризации иммуноглобулина второго одноцепочечного полипептида (HD-II) включает первый участок CL иммуноглобулина.

9. Полипептидный гетеродимер по п.8, отличающийся тем, что первый одноцепочечный полипептид дополнительно включает второй участок СН1 и второй одноцепочечный полипептид дополнительно включает второй участок CL, и при этом второй участок СН1 первого одноцепочечного полипептида и второй участок CL второго одноцепочечного полипептида ассоциируют друг с другом в полипептидном гетеродимере.

10. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что домен гетеродимеризации иммуноглобулина первого одноцепочечного полипептида (HD-I) включает первый участок CL иммуноглобулина и домен гетеродимеризации иммуноглобулина второго одноцепочечного полипептида (HD-II) включает первый участок СН1 иммуноглобулина.

11. Полипептидный гетеродимер по п.10, отличающийся тем, что первый одноцепочечный полипептид дополнительно включает второй участок CL и второй одноцепочечный полипептид дополнительно включает второй участок СН1, и при этом второй участок CL первого одноцепочечного полипептида и второй участок СН1 второго одноцепочечного полипептида ассоциируют друг с другом в полипептидном гетеродимере.

12. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.9 и 11, отличающийся тем, что второй участок CL представляет собой участок Сk или участок Сl.

13. Полипептидный гетеродимер по п.12, отличающийся тем, что второй участок CL представляет собой участок Сk иммуноглобулина человека дикого типа.

14. Полипептидный гетеродимер по п.12, отличающийся тем, что второй участок CL представляет собой измененный участок Сk иммуноглобулина человека, в котором одна или более аминокислот участка Сk человека дикого типа заменены в положениях N29, N30, Q52, V55, Т56, S68 или Т70.

15. Полипептидный гетеродимер по п.1 или 12, отличающийся тем, что участок СН1 представляет собой измененный участок СН1 иммуноглобулина человека, включающий аминокислотную замену, в результате которой Вал (V) в положении 68 заменен на Лиз (K), Арг (R) или Гис (Н), и при этом участок Ck представляет собой измененный участок Сk иммуноглобулина человека, включающий аминокислотную замену, в результате которой Лей (L) в положении 27 заменен на Асп (D) или Глу (Е).

16. Полипептидный гетеродимер по п.1 или 12, отличающийся тем, что участок СН1 представляет собой измененный участок СН1 иммуноглобулина человека, включающий аминокислотную замену, в результате которой Вал (V) в положении 68 заменен на Асп (D) или Глу (Е), и при этом участок Сk представляет собой измененный участок Сk иммуноглобулина человека, включающий аминокислотную замену, в результате которой Лей (L) в положении 27 заменен на Лиз (K), Арг (R) или Гис (Н).

17. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что первый участок СН1 или второй участок СН1, если присутствует, представляет собой измененный участок СН1 иммуноглобулина человека, при этом цистеин участка СН1 иммуноглобулина человека дикого типа, участвующий в образовании дисульфидной связи с участком CL иммуноглобулина человека дикого типа, удален или заменен.

18. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-17, отличающийся тем, что первый участок СН1 и второй участок СН1, если присутствует, представляет собой полипептид, включающий SEQ ID NO:114, 844 или 845.

19. Полипептидный гетеродимер по п.1, отличающийся тем, что участок Сk выбран из любого полипептида, включающего SEQ ID NO:142-178, 202 и 838-843.

20. Полипептидный гетеродимер по п.12, отличающийся тем, что участок Сl представляет собой полипептид, включающий SEQ ID NO:140.

21. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-20, отличающийся тем, что шарнирный участок как первого, так и второго одноцепочечных полипептидов представлен шарнирным участком иммуноглобулина.

22. Полипептидный гетеродимер по п.21, отличающийся тем, что шарнирный участок:

(а) расположен ближе к аминоконцу относительно домена СН2 и СН3,

(б) расположен между связывающим доменом и доменом гетеродимеризации иммуноглобулина,

(в) расположен между доменом гетеродимеризации иммуноглобулина и доменом СН2 и СН3 или

(г) расположен на аминоконце первого или второго одноцепочечного полипептида.

23. Полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-22, отличающийся тем, что шарнирные участки первого и второго одноцепочечных полипептидов идентичны или различны.

24. Гетеродимер по п.1, отличающийся тем, что первый и второй одноцепочечные полипептиды включают SEQ ID NO:10 и 12, SEQ ID NO:14 и 16, SEQ ID NO:18 и 20, SEQ ID NO:20 и 22, SEQ ID NO:30 и 32, SEQ ID NO:29 и 31, SEQ ID NO:29 и 32, SEQ ID NO:30 и 72, SEQ ID NO:53 и 72, SEQ ID NO:54 и 72, SEQ ID NO:55 и 72, SEQ ID NO:70 и 72, SEQ ID NO:71 и 72, SEQ ID NO:63 и 56, SEQ ID NO:64 и 57, SEQ ID NO:65 и 60, SEQ ID NO:66 и 58, SEQ ID NO:67 и 59, SEQ ID NO:68 и 61, SEQ ID NO:69 и 62, SEQ ID NO:54 и 811, SEQ ID NO:54 и 812, SEQ ID NO:54 и 813, SEQ ID NO:814 и 818, SEQ ID NO:815 и 818, SEQ ID NO:816 и 818, SEQ ID NO:817 и 818, SEQ ID NO:814 и 820, SEQ ID NO:814 и 821, SEQ ID NO:54 и 819, SEQ ID NO:814 и 826, SEQ ID NO:814 и 822, SEQ ID NO:814 и 823, SEQ ID NO:814 и 824, SEQ ID NO:859 и 862, SEQ ID NO:860 и 863, SEQ ID NO:861 и 864, SEQ ID NO:874 и 825, SEQ ID NO:875 и 879, SEQ ID NO:876 и 880, SEQ ID NO:877 и 881 или SEQ ID NO:878 и 882.

25. Композиция, включающая полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-24 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

26. Вектор экспрессии, способный экспрессировать полипептидный гетеродимер по любому из пп.1-24, включающий первый полинуклеотид, кодирующий первый одноцепочечный полипептид, и второй полинуклеотид, кодирующий второй одноцепочечный полипептид.

27. Клетка-хозяин, включающая вектор экспрессии по п.26.

28. Клетка-хозяин, включающая первый и второй векторы экспрессии, способные экспрессировать первый и второй одноцепочечные полипептиды соответственно полипептидного гетеродимера по любому из пп.1-24.

29. Способ получения полипептидного гетеродимера, включающий

(а) культивирование клетки-хозяина по п.27 или 28 в условиях, подходящих для экспрессии первого и второго одноцепочечных полипептидов, и

(б) необязательно, выделение или очистку гетеродимеров, образованных из первого и второго одноцепочечных полипептидов из культуры.

30. Способ направления активации Т-клеток, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества полипептидного гетеродимера по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что полипептидный гетеродимер включает связывающий домен, который специфически связывает TCRα, TCRβ, CD3γ, CD3δ, CD3e или их комбинацию, и второй связывающий домен, который специфически связывает другую мишень.

31. Способ ингибирования роста метастазов или метастатического роста злокачественного новообразования, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества полипептидного гетеродимера по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что полипептидный гетеродимер включает связывающий домен, который специфически связывает TCRα, TCRβ, CD3γ, CD3δ, CD3e, c-Met или Ron.

32. Способ лечения аутоиммунного или воспалительного состояния, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества полипептидного гетеродимера по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что полипептидный гетеродимер включает связывающий домен, который специфически связывает TCRα, TCRβ, CD3γ, CD3δ, CD3e или CD28.

33. Способ лечения ассоциированного с В-клетками нарушения или заболевания, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества полипептидного гетеродимера по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что полипептидный гетеродимер включает связывающий домен, который специфически связывает TCRα, TCRβ, CD3γ, CD3δ или CD3e, и второй связывающий домен, который специфически связывает CD19, CD20, CD79b или HLA-DR.