(11)	021009 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201171449
(22)	2010.05.21
(51)	C12N 15/85 (2006.01)
(31)	61/216,919
(32)	2009.05.21
(33)	US
(43)	2012.05.30
(86)	PCT/IB2010/001332
(87)	WO 2010/133964 2010.11.25
(71)	(73) НОВАРТИС АГ (CH)
(72)	Дормитцер Филип, Франти Майкл, Суфафифат Пирада, Мейсон Питер, Кайнер Бьерн (US), Кротта Стефания (IT)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	ОБРАТНАЯ ГЕНЕТИКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НЕЭНДОГЕННЫХ ПРОМОТОРОВ pol I

(57) 1. Способ продуцирования рекомбинантного вируса, включающий стадию роста клеток-хозяев собаки, содержащих по меньшей мере один экспрессирующийся конструкт, кодирующий молекулу вирусной РНК, в которой экспрессия молекулы вирусной РНК из конструкта контролируется промотором pol I приматов в условиях, когда молекула вирусной РНК экспрессируется, чтобы продуцировать вирус.

2. Способ получения вируса, включающий следующие стадии:

(i) продуцирование рекомбинантного вируса способом по п.1;

(ii) инфицирование культуры-хозяина вирусом, полученным на стадии (i);

(iii) культивирование хозяина со стадии (ii) для продуцирования дополнительного количества вируса и

(iv) очистка вируса, полученного на стадии (iii).

3. Способ получения вакцины, включающий стадии (а) получения вируса способом по п.2 и (b) получения из вируса вакцины.

4. Способ по одному из пп.1-3, в котором промотор pol I представляет собой промотор pol I человека.

5. Способ по одному из пп.1-4, в котором клетки представляют собой клетки MDCK.

6. Способ по п.5, в котором клетки MDCK представляют собой клеточную линию MDCK 33016 (DSM ACC2219).

7. Способ по одному из пп.1-6, в котором клетки включают по меньшей мере один двунаправленный экспрессирующийся конструкт.

8. Способ по одному из пп.1-7, в котором экспрессирующийся конструкт представляет собой вектор экспрессии или конструкт линейной экспрессии.

9. Способ по одному из пп.4-8, в котором промотор pol I человека содержит последовательность SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2.

10. Способ по одному из пп.1-9, в котором вирус представляет собой сегментированный вирус.

11. Способ по одному из пп.1-10, в котором вирус представляет собой несегментированный вирус.

12. Способ по одному из пп.1-11, в котором вирус представляет собой вирус, содержащий отрицательную цепь РНК.

13. Способ по п.12, в котором вирус представляет собой вирус гриппа.

14. Клетки-хозяева собаки, продуцирующие вирус, содержащие по меньшей мере один экспрессирующий конструкт, кодирующий молекулу вирусной РНК, причем экспрессия молекулы вирусной РНК из конструкта контролируется промотором pol I приматов.

15. Клетки собаки, продуцирующие вирус, имеющие по меньшей мере один эндогенный промотор (промоторы) pol I, который контролирует (которые контролируют) экспрессию эндогенной рРНК, и по меньшей мере один неэндогенный промотор (промоторы) pol I приматов, который контролирует (которые контролируют) экспрессию вирусной РНК или комплементарную ей.