|
| |
(11) | 019536 (13) B1 |
    Разделы: A B C D E F G H  |
(21) | 201100802 |
(22) | 2009.11.19 |
(51) | C07K 14/435 (2006.01)
C12P 21/02 (2006.01) |
(31) | 08169425.9 |
(32) | 2008.11.19 |
(33) | EP |
(43) | 2011.12.30 |
(86) | PCT/EP2009/065512 |
(87) | WO 2010/057961 2010.05.27 |
(71) | (73) ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL) |
(72) | Квадфлиг Петер Ян Леонард Марио, Нёйенс Тимо (NL), Кузан Клаудиа (DE), Шеперс Катарина Хюбертина Мария (NL) |
(74) | Саломатина И.С. (RU) |
(54) | СИНТЕЗ ПЕПТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭНЗИМАТИЧЕСКОЙ АКТИВАЦИИ И КОНДЕНСАЦИИ |
(57) 1. Способ энзиматического синтеза пептидов, включающий энзиматическое получение эфира или тиоэфира из (i) защищенной с N-конца аминокислоты, С-концевого эфира защищенной с N-конца аминокислоты, защищенного с N-конца пептида или С-концевого эфира защищенного с N-конца пептида и (ii) спирта, представленного формулой НО-CX2-Z, или же тиола, представленного формулой HS-CX2-Z, где каждый X независимо означает атом галогена или атом водорода; a Z выбирается из группы sp3-гибридизованных атомов углерода, содержащих по меньшей мере два заместителя, содержащих гетероатом, присоединенный непосредственно к sp3-гибридизованному углероду, и sp2-гибридизованных атомов углерода, содержащих один или два заместителя, содержащих гетероатом, присоединенный непосредственно к sp2-гибридизованному углероду,
причем получение эфира или тиоэфира осуществляется в реакционной среде, содержащей 2 мас.% или меньше воды, исходя из массы жидкости в реакционной среде;
и энзиматическое присоединение полученного эфира или тиоэфира к необязательно защищенной с С-конца аминокислоте или необязательно защищенному с С-конца пептиду, при этом пептид синтезируется в реакционной среде, содержащей 2 мас.% или меньше воды, исходя из общей массы реакционной среды.
2. Способ по п.1, в котором присоединение осуществляется в присутствии фермента, используемого для катализа получения эфира или тиоэфира.
3. Способ по п.1 или 2, в котором получение эфира или тиоэфира либо присоединение катализируется по меньшей мере одним ферментом, выбранным из числа липаз, эстераз и протеаз.
4. Способ по п.3, в котором используется протеаза и фермент, выбранный из числа липаз и эстераз, причем по меньшей мере один из этих ферментов катализирует получение эфира или тиоэфира, а другой катализирует присоединение.
5. Способ по п.3, в котором и получение эфира или тиоэфира и присоединение катализируется одним ферментом, выбранным из числа липаз, эстераз и протеаз.
6. Способ по любому из пп.3-5, в котором используется липаза, выбранная из числа липаз из Candida, предпочтительно из Candida antarctica, в частности липаза В Candida antarctica.
7. Способ по любому из пп.3-6, в котором протеаза выбирается из числа карбоксипептидаз серинового типа, металлокарбоксипептидаз, карбоксипептидаз цистеинового типа, сериновых эндопептидаз, цистеиновых эндопептидаз, аспартатных эндопептидаз и металлоэндопептидаз.
8. Способ по п.7, в котором протеаза является сериновой эндопептидазой, выбранной из числа субтилизинов, предпочтительно субтилизином Carlsberg.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором используется по меньшей мере один иммобилизованный фермент.
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором получение эфира и присоединение осуществляется в реакционной среде, содержащей 1,0 мас.% или меньше воды, в частности 0,5 мас.% воды или меньше, более предпочтительно 0,1 мас.% или меньше воды.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором Z означает карбамоил, трифторметильную группу или трихлорметильную группу.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором оба X означают водород.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором получение эфира или тиоэфира осуществляется в присутствии необязательно защищенной с С-конца аминокислоты или необязательно защищенного с С-конца пептида, с которым будет соединяться получаемый эфир или тиоэфир, и в присутствии фермента, катализирующего реакцию присоединения.
14. Способ по любому из пп.1-12, в котором необязательно защищенная с С-конца аминокислота или необязательно защищенный с С-конца пептид добавляются после того, как будет получен эфир или тиоэфир.
15. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором присоединение осуществляется без предварительного выделения полученного эфира или тиоэфира из реакционной среды.
|
