(11)	019531 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	201071033
(22)	2009.03.05
(51)	A61K 31/713 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01)
(31)	61/034,019; 61/083,367; 61,086,381; 61/112,079; 61/150,664
(32)	2008.03.05; 2008.07.24; 2008.08.05; 2008.11.06; 2009.02.06
(33)	US
(43)	2011.04.29
(86)	PCT/US2009/036223
(87)	WO 2009/111658 2009.09.11
(71)	(73) ЭЛНИЛЭМ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72)	Бумкрот Дэвид, Сах Динах Вен-Йи (US), Тудьярска Иванка (BG)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ Eg5 И VEGF

(57) 1. Композиция, содержащая первую двухцепочечную рибонуклеиновую кислоту (дцРНК), ингибирующую экспрессию гена члена семейства человеческих кинезинов 11 (Eg5/KSP) в клетке, и вторую дцРНК, ингибирующую экспрессию человеческого VEGF в клетке, где

указанная первая и указанная вторая дцРНК получены в виде стабильных липидных частиц, содержащих нуклеиновую кислоту (SNALP);

и где указанная первая дцРНК состоит из первой смысловой цепи и первой антисмысловой цепи, причем указанная первая смысловая цепь содержит первую последовательность, а указанная первая антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, комплементарную по меньшей мере 15 смежным нуклеотидам 5'-UCGAGAAUCUAAACUAACU-3' (SEQ ID NO:1311), где указанная первая последовательность комплементарна указанной второй последовательности и где указанная первая дцРНК имеет длину 15-30 пар оснований, а указанная вторая дцРНК состоит из второй смысловой цепи и второй антисмысловой цепи, где указанная вторая смысловая цепь содержит третью последовательность, а указанная вторая антисмысловая цепь содержит четвертую последовательность, комплементарную по меньшей мере 15 смежным нуклеотидам 5'-GCACAUAGGAGAGAUGAGCUU-3' (SEQ ID NO:1538), где указанная третья последовательность комплементарна указанной четвертой последовательности и где каждая цепь имеет длину 15-30 пар оснований; и указанные SNALP содержат DLinDMA, холестерин, DPPC и PEG2000-C-DMA.

2. Композиция по п.1, где первая антисмысловая цепь содержит вторую последовательность, комплементарную 5'-UCGAGAAUCUAAACUAACU-3' (SEQ ID NO:1311), а вторая антисмысловая цепь содержит четвертую последовательность, комплементарную 5'-GCACAUAGGAGAGAUGAGCUU-3' (SEQ ID NO:1538).

3. Композиция по п.1, где указанная первая дцРНК состоит из смысловой цепи, состоящей из 5'-UCGAGAAUCUAAACUAACUTT-3' (SEQ ID NO:1534), и антисмысловой цепи, состоящей из 5'-AGUUAGUUUAGAUUCUCGATT-3' (SEQ ID NO:1535), и вторая дцРНК состоит из смысловой цепи, состоящей из 5'-GCACAUAGGAGAGAUGAGCUU-3' (SEQ ID NO:1536), и антисмысловой цепи, состоящей из 5'-AAGCUCAUCUCUCCUAUGUGCUG-3' (SEQ ID NO:1537).

4. Композиция по п.3, где каждая цепь модифицирована так, что она включает 2'-О-метилрибонуклеотид, обозначенный строчными буквами "с" или "u", и фосфортиоат, обозначенный строчной буквой "s":

причем первая дцРНК состоит из смысловой цепи, состоящей из 5'-ucGAGAAucuAAAcuAAcuTsT-3' (SEQ ID NO:1240) и антисмысловой цепи, состоящей из 5'-AGUuAGUUuAGAUUCUCGATsT (SEQ ID NO:1241); и вторая дцРНК состоит из смысловой цепи, состоящей из 5'-GcAcAuAGGAGAGAuGAGCUsU-3' (SEQ ID NO:1242), и антисмысловой цепи, состоящей из 5'-AAGCUcAUCUCUCCuAuGuGCusG-3' (SEQ ID NO:1243).

5. Композиция по пп.1, 2 или 3, где указанные первая и вторая дцРНК содержат по меньшей мере один модифицированный нуклеотид.

6. Композиция по п.5, где указанный модифицированный нуклеотид выбран из группы, состоящей из нуклеотида, модифицированного 2'-O-метилом, нуклеотида, содержащего 5'-фосфортиоатную группу, и концевого нуклеотида, связанного с холестериновым производным или с бисдециламидной группой додекановой кислоты, нуклеотида, модифицированного 2'-дезокси-2'-фтором, 2'-дезоксимодифицированного нуклеотида, блокированного нуклеотида, неосновного нуклеотида, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкилмодифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, имеющего неприродное основание.

7. Композиция по пп.1, 2 и 3, где указанные первая и вторая дцРНК содержат по меньшей мере один рибонуклеотид, модифицированный 2'-O-метилом, и по меньшей мере один нуклеотид, содержащий 5'-фосфортиоатную группу.

8. Композиция по пп.1-2 и 5-7, где каждая цепь каждой дцРНК имеет длину в 19-23 или 21-23 основания.

9. Композиция по пп.1-2 и 5-7, где каждая цепь первой дцРНК имеет длину в 21 основание и смысловая цепь второй дцРНК имеет длину в 21 основание, а антисмысловая цепь второй дцРНК имеет длину в 23 основания.

10. Композиция по пп.1-9, где первая и вторая дцРНК присутствуют в эквимолярном отношении.

11. Композиция по пп.1-10, содержащая указанные компоненты в количествах, приведенных в табл. 17.

12. Композиция по пп.1-11, где указанную композицию вводят в наномолярной концентрации.

13. Композиция по пп.1-12, дополнительно содержащая сорафениб.

14. Композиция по любому из предыдущих пунктов, где указанная первая дцРНК содержит два выступающих конца, а указанная вторая дцРНК содержит выступающий конец у 3'-конца антисмысловой цепи и тупой конец у 5'-конца антисмысловой цепи.

15. Способ ингибирования экспрессии Eg5/KSP и VEGF в клетке, включающий введение в указанную клетку любой из композиций по пп.1-14.

16. Способ профилактики роста опухоли, снижания роста опухоли или увеличения продолжительности жизни млекопитающего, нуждающегося в лечении рака, включающий введение указанному млекопитающему композиции по пп.1-14.

17. Способ по п.16, где указанное млекопитающее страдает раком печени.

18. Способ по п.16, где указанным млекопитающим является человек, страдающий раком печени.

19. Способ по п.15 или 16, который дополнительно включает введение сорафениба.