(11)	014157 (13) B1	Разделы: A B C D E F G H
(21)	200800159
(22)	2006.06.28
(51)	A61K 38/21 (2006.01) C07K 14/57 (2006.01)
(31)	60/694,810
(32)	2005.06.29
(33)	US
(43)	2008.10.30
(86)	PCT/IL2006/000754
(87)	WO 2007/000769 2007.01.04
(71)	(73) ЙЕДА РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ КО. ЛТД. (IL)
(72)	Шрайбер Гидеон, Ройсман Лайла К., Джайтин Диего, Калие Эйял (IL)
(74)	Медведев В.Н. (RU)
(54)	РЕКОМБИНАНТНЫЕ МУТАНТЫ ИНТЕРФЕРОНА a2 (IFNa2)

(57) 1. Рекомбинантный полипептид интерферона a2 (IFNa2), его активный фрагмент, аналог, производное и вариант, где указанный полипептид включает мутацию глутамина в положении 61 в остаток, выбранный из группы, состоящей из серина, лейцина и аланина, и по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутации гистидина в положении 57 в остаток, выбранный из группы, состоящей из аланина, тирозина и метионина, и мутации глутамата в положении 58 в остаток, выбранный из группы, состоящей из аспарагина, аспартата и аланина, где указанный полипептид обладает повышенной специфической агонистической или антагонистической активностью в сравнении с IFNa2 дикого типа (SEQ ID NO: 2).

2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает мутации во всех трех положениях 61, 57 и 58.

3. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из Н57А, Е58А, Q61A, H57Y, E58N, Q61S, Н57М, E58D, Q61L.

4. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает тройной мутант, выбранный из группы, состоящей из Н57А, Е58А, Q61A (SEQ ID NO: 5); Н57М, E58D, Q61L (SEQ ID NO: 10); H57Y, E58N, Q61S (SEQ ID NO: 11).

5. Рекомбинантный полипептид интерферона a2 (IFNa2), его активный фрагмент, аналог, производное и вариант, где указанный полипептид включает четверной мутант N65A, L80A, Y85A, Y89A (SEQ ID NO: 6), обладающий антагонистической активностью в сравнении с IFNa2 дикого типа (SEQ ID NO: 2).

6. Полипептид по п.1 или 5, отличающийся тем, что указанный полипептид дополнительно включает по меньшей мере одно аминокислотное замещение в С-концевых аминокислотных остатках 159-165.

7. Полипептид по п.6, включающий замещение С-концевой последовательности ESLRSKE на KRLKSKE (SEQ ID NO: 7).

8. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает сочетание тройного мутанта Н57А, Е58А, Q61A и замещение С-концевой последовательности ESLRSKE на KRLKSKE (SEQ ID NO: 8).

9. Полипептид по п.5, отличающийся тем, что указанный полипептид включает сочетание четверного мутанта N65A, L80A, Y85A, Y89A и замещение С-концевой последовательности ESLRSKE на KRLKSKE (SEQ ID NO: 9), обладающий антагонистической активностью в сравнении с IFNa2 дикого типа (SEQ ID NO: 2).

10. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает тройной мутант Н57М, E58D, Q61L (SEQ ID NO: 10).

11. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает тройной мутант H57Y, E58N, Q61S (SEQ ID NO: 11).

12. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает сочетание тройного мутанта Н57М, E58D, Q61L и замещение С-концевой последовательности ESLRSKE на KRLKSKE (SEQ ID NO: 12).

13. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает сочетание тройного мутанта H57Y, E58N, Q61S и замещение С-концевой последовательности ESLRSKE на KRLKSKE (SEQ ID NO: 13).

14. Полипептид по п.1 или 5, отличающийся тем, что указанный полипептид также подвергают конъюгации с ПЭГ.

15. Молекула ДНК, кодирующая полипептид по п.1 или 5.

16. Молекула ДНК по п.15, отличающаяся тем, что указанная молекула ДНК включает последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15-23 и SEQ ID NO: 30-35.

17. Вектор, включающий молекулу ДНК по любому из пп.15, 16, оперативно связанный с одним или более элементами контроля транскрипции.

18. Клетка-хозяин, включающая вектор по п.17.

19. Фармацевтическая композиция, включающая в качестве активного ингредиента рекомбинантный полипептид интерферона a2 (IFNa2), его активный фрагмент, аналог, производное и вариант по п.1 или 5, а также включающая фармацевтически приемлемый носитель.

20. Фармацевтическая композиция по п.19, включающая рекомбинантный полипептид интерферона a2 (IFNa2), содержащий любую из последовательностей SEQ ID NO: 5-13 и SEQ ID NO: 24-29, его фрагменты, аналоги, производные и варианты.

21. Фармацевтическая композиция по п.20, включающая рекомбинантный полипептид интерферона a2 (IFNa2), содержащий любую из последовательностей SEQ ID NO: 5, 7, 8, 10-13, его фрагменты, аналоги, производные и варианты, где указанный полипептид обладает повышенной специфической агонистической активностью.

22. Фармацевтическая композиция по п.20, включающая рекомбинантный полипептид интерферона a2 (IFNa2), содержащий любую из последовательностей SEQ ID NO: 6 и 9, его фрагменты, аналоги, производные и варианты, где указанный полипептид обладает повышенной специфической антагонистической активностью.

23. Способ лечения или предупреждения расстройства или заболевания, связанного с модуляцией интерферона (IFN), включающий введение субъекту, которому это необходимо, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.21, где указанное расстройство или заболевание выбирают из группы, состоящей из ракового заболевания, аутоиммунного заболевания и инфекционного заболевания.

24. Способ по п.23, где указанное раковое заболевание выбирают из группы, состоящей из лейкемического ретикулеза, саркомы Капоши, множественной миеломы, хронического миелогенного лейкоза, неходжкинской лимфомы и меланомы.

25. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное аутоиммунное заболевание представляет собой рассеянный склероз (PC).

26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанный PC выбирают из группы, состоящей из рецидивирующе-ремитирующего PC, вторичного прогрессирующего PC, первичного прогрессирующего PC и прогрессирующего рецидивирующего PC.

27. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанное инфекционное заболевание представляет собой инфекцию вирусом гепатита.

28. Способ по п.27, отличающийся тем, что указанный вирус гепатита выбирают из группы, состоящей из гепатита А, гепатита В и гепатита С.

29. Способ лечения или предупреждения расстройств, связанных с повышенной экспрессией IFNa2, включающий введение субъекту, которому это необходимо, эффективного количества фармацевтической композиции по п.22.

30. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанное расстройство представляет собой инсулинзависимый сахарный диабет.

31. Способ по п.29, отличающийся тем, что указанное расстройство представляет собой системную красную волчанку.

32. Применение рекомбинантного полипептида интерферона a2 (IFNa2), его активного фрагмента, аналога, производного и варианта по п.1 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения расстройств или заболеваний, связанных с модуляцией IFN.

33. Применение мутантного интерферона a2 (IFNa2) по любому из пп.1-14 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения расстройств или заболеваний, связанных с модуляцией IFN.