(57) 1. Способ получения карбамилированного белка эритропоэтина с менее чем приблизительно 40% агрегированного белка и менее чем приблизительно 40 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка, определенного ESI-масс-спектрометрией, при этом способ включает в себя взаимодействие количества эритропоэтина с количеством цианата при температуре, рН и в течение периода времени, необходимых для по меньшей мере приблизительно 90% карбамилирования аминогрупп в лизинах и N-концевой аминокислоте эритропоэтина.
2. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина представляет собой человеческий эритропоэтин.
3. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30% агрегированного белка.
4. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20% агрегированного белка.
5. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10% агрегированного белка.
6. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
7. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
8. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10 мac.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
9. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30 мас.% избыточно карбамилированного белка.
10. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20 мас.% избыточно карбамилированного белка.
11. Способ по п.1, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10 мас.% избыточно карбамилированного белка.
12. Способ по п.1, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10 мг/мл.
13. Способ по п.1, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 2 приблизительно до 5 мг/мл.
14. Способ по п.1, где концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10M.
15. Способ по п.1, где концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 2M.
16. Способ по п.1, где температурные диапазоны приблизительно от 0 приблизительно до 60°С.
17. Способ по п.1, где температурные диапазоны приблизительно от 30 приблизительно до 34°C.
18. Способ по п.1, где рН находится приблизительно от 7 приблизительно до 11.
19. Способ по п.1, где рН находится приблизительно от 8 приблизительно до 10.
20. Способ по п.1, где период времени составляет приблизительно от 10 мин приблизительно до 30 суток.
21. Способ по п.1, где период времени составляет приблизительно от 1 ч приблизительно до 5 суток.
22. Способ по п.1, где белок эритропоэтина взаимодействует с цианатом в присутствии буферного раствора.
23. Способ по п.22, где буферным раствором является борат.
24. Способ по п.22, где концентрация буферного раствора составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 2M.
25. Способ по п.22, где концентрация буферного раствора составляет приблизительно от 0,1 приблизительно до 1M.
26. Способ по п.22, где концентрация буферного раствора составляет приблизительно 0,5M.
27. Способ по п.1, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10 мг/мл, концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10M, температурные диапазоны приблизительно от 0 приблизительно до 60°С, рН находится приблизительно от 7 приблизительно до 11, а время составляет приблизительно от 10 мин приблизительно до тридцати суток.
28. Способ по п.1, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 2 приблизительно до 5 мг/мл, концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 2M, температурные диапазоны приблизительно от 30 приблизительно до 34°C, рН находится приблизительно от 8 приблизительно до 10, а время составляет приблизительно от 1 ч приблизительно до 5 суток.
29. Способ по п.1, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно 3 мг/мл, концентрация цианата составляет приблизительно 0,5M, температура составляет приблизительно 32°C, рН составляет приблизительно 9, а период времени составляет приблизительно 24 ч.
30. Способ получения карбамилированного белка эритропоэтина с менее чем приблизительно 3% агрегированного белка и менее чем приблизительно 40 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка, определенного ESI-масс-спектрометрией, включающий в себя очистку карбамилированного эритропоэтина с применением анионообменной, катионообменной, гидрофобной хроматографии, хроматографии с обращенными фазами, аффинной хроматографии или хроматографии с исключением по размеру.
31. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина представляет собой человеческий эритропоэтин.
32. Способ по п.30, где по меньшей мере 90% аминовых остатков на лизинах и N-концевой аминокислоте эритропоэтина карбамилированы.
33. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 2,5% агрегированного белка.
34. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет приблизительно 0,5% или менее агрегированного белка.
35. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
36. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
37. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
38. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30 мас.% избыточно карбамилированного белка.
39. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20 мас.% избыточно карбамилированного белка.
40. Способ по п.30, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10 мас.% избыточно карбамилированного белка.
41. Способ получения белка карбамилированного эритропоэтина с менее чем приблизительно 3% агрегированного белка и менее чем приблизительно 40 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка, определенного ESI-масс-спектрометрией, при этом способ включает в себя:
(a) взаимодействие количества эритропоэтина с количеством цианата при температуре, рН и в течение периода времени, необходимых для по меньшей мере приблизительно 90% карбамилирования аминовых остатков на лизинах и N-концевой аминокислоте эритропоэтина; и
(b) очистку белка карбамилированного эритропоэтина с применением анионообменной, катионообменной, гидрофобной хроматографии, хроматографии с обращенными фазами, аффинной хроматографии или размерно-эксклюзионной хроматографии.
42. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина представляет собой человеческий эритропоэтин.
43. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 2,5% агрегированного белка.
44. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет приблизительно 0,5% или менее агрегированного белка.
45. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
46. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
47. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка.
48. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 30 мас.% избыточно карбамилированного белка.
49. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 20 мас.% избыточно карбамилированного белка.
50. Способ по п.41, где белок карбамилированного эритропоэтина имеет менее чем приблизительно 10 мас.% избыточно карбамилированного белка.
51. Способ по п.41, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10 мг/мл.
52. Способ по п.41, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 2 приблизительно до 5 мг/мл.
53. Способ по п.41, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно 3 мг/мл.
54. Способ по п.41, где концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10M.
55. Способ по п.41, где концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 2M.
56. Способ по п.41, где концентрация цианата составляет приблизительно 0,5M.
57. Способ по п.41, где температурные диапазоны приблизительно от 0 приблизительно до 60°С.
58. Способ по п.41, где температурные диапазоны приблизительно от 30 приблизительно до 34°C.
59. Способ по п.41, где температура составляет приблизительно 32°C.
60. Способ по п.41, где рН находится приблизительно от 7 приблизительно до 11.
61. Способ по п.41, где рН находится приблизительно от 8 приблизительно до 10.
62. Способ по п.41, где рН составляет приблизительно 9.
63. Способ по п.41, где период времени составляет приблизительно от 10 мин приблизительно до 30 суток.
64. Способ по п.41, где период времени составляет приблизительно от 1 ч приблизительно до 5 суток.
65. Способ по п.41, где период времени составляет приблизительно 24 ч.
66. Способ по п.41, где белок эритропоэтина взаимодействует с цианатом в присутствии буферного раствора.
67. Способ по п.66, где буферным раствором является борат.
68. Способ по п.66, где концентрация буферного раствора составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 2M.
69. Способ по п.66, где концентрация буферного раствора составляет приблизительно от 0,1 приблизительно до 1M.
70. Способ по п.66, где концентрация буферного раствора составляет приблизительно 0,5M.
71. Способ по п.41, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10 мг/мл, концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 10M, температурные диапазоны приблизительно от 0 приблизительно до 60°С, рН находится приблизительно от 7 приблизительно до 11, а время составляет приблизительно от 10 мин приблизительно до 30 суток.
72. Способ по п.41, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно от 2 приблизительно до 5 мг/мл, концентрация цианата составляет приблизительно от 0,05 приблизительно до 2M, температурные диапазоны приблизительно от 30 приблизительно до 34°C, рН находится приблизительно от 8 приблизительно до 10, а время составляет приблизительно от 1 ч приблизительно до 5 суток.
73. Способ по п.34, где концентрация взаимодействующего с цианатом белка эритропоэтина составляет приблизительно 3 мг/мл, концентрация цианата составляет приблизительно 0,5M, температура составляет приблизительно 32°C, рН составляет приблизительно 9, а период времени составляет приблизительно 24 ч.
74. Способ получения карбамилированного белка эритропоэтина с менее чем приблизительно 40% агрегированного белка и менее чем приблизительно 40 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка, при этом способ включает в себя взаимодействие количества эритропоэтина с количеством цианата при температуре, рН и в течение периода времени, необходимых для по меньшей мере приблизительно 90% карбамилирования аминогрупп в лизинах и N-концевой аминокислоте эритропоэтина, причем эритропоэтин взаимодействует с цианатом в присутствии бората калия.
75. Способ получения карбамилированного белка эритропоэтина с менее чем приблизительно 40% агрегированного белка и менее чем приблизительно 40 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка, при этом способ включает в себя взаимодействие количества эритропоэтина с количеством цианата при температуре от 30 до 34°C, рН и в течение периода времени, необходимыми для по меньшей мере приблизительно 90% карбамилирования аминогрупп в лизинах и N-концевой аминокислоте эритропоэтина.
76. Способ получения карбамилированного белка эритропоэтина с менее чем приблизительно 40% агрегированного белка и менее чем приблизительно 40 мас.% избыточно и недостаточно карбамилированного белка, при этом способ включает в себя взаимодействие количества эритропоэтина с количеством цианата при температуре, рН и в течение периода времени, необходимых для по меньшей мере приблизительно 90% карбамилирования аминогрупп в лизинах и N-концевой аминокислоте эритропоэтина, причем карбамилированный белок эритропоэтина очищается с применением анионообменной хроматографии при поддержании рН 8,5±0,2 как разделяющего, так и элюирующего буферов.
| 
