(57) 1. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя:
(a) приведение тест-соединения в контакт с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов;
(b) измерение уровня активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов;
(c) идентификацию тест-соединения, которое повышает или понижает уровень активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов по сравнению с уровнем активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, измеряемой в отсутствие тест-соединения; и
(d) анализ идентифицированного тест-соединения на предмет его тканезащитной активности.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов определяют путем измерения связывания тест-соединения с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что тест-соединение является меченым, и связывание меченого тест-соединения с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов измеряют путем детектирования метки, прикрепленной к тест-соединению.
4. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя:
(а) приведение тест-соединения в контакт с клеткой, экспрессирующей рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов; и
(b) измерение уровня активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в клетке;
(c) идентификацию тест-соединения, которое повышает или понижает уровень активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов по сравнению с уровнем активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, измеряемым в отсутствие тест-соединения; и
(d) анализ идентифицированного тест-соединения на предмет его тканезащитной активности.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов измеряют путем анализа клеточной пролиферации.
6. Способ по п.4, отличающийся тем, что клетка модифицирована с помощью рекомбинантных технологий генной инженерии таким образом, что в ней экспрессируется по меньшей мере один ЕРО-рецептор или общий b-рецептор.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что клетка эндогенно экспрессирует ЕРО-рецептор и трансформирована нуклеиновой кислотой, содержащей нуклеотидную последовательность, которая (i) оперативно связана с промотором и (ii) кодирует полипептид общего b-рецептора.
8. Способ по п.6, отличающийся тем, что клетка эндогенно экспрессирует общий b-рецептор и трансформирована нуклеиновой кислотой, содержащей нуклеотидную последовательность, которая (i) оперативно связана с промотором и (ii) кодирует полипептид ЕРО-рецептора.
9. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность получена из представителя того же вида, что и клетка.
10. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя:
(a) приведение тест-соединения в контакт с клеткой, которая модифицирована с помощью рекомбинантных технологий генной инженерии таким образом, что в ней экспрессируется ЕРО-рецептор, причем указанная клетка трансформирована нуклеиновой кислотой, содержащей нуклеотидную последовательность, которая (i) оперативно связана с промотором и (ii) кодирует полипептид общего b-рецептора;
(b) измерение уровня активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в клетке;
(c) идентификацию тест-соединения, которое повышает или понижает уровень активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в клетке по сравнению с уровнем активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, измеряемым в контрольной клетке, причем контрольная клетка является клеткой того же вида, что и клетка на стадии (а), и не является трансформированной нуклеиновой кислотой, содержащей нуклеотидную последовательность, которая (i) оперативно связана с промотором и (ii) кодирует полипептид общего b-рецептора; и
(d) анализ идентифицированного тест-соединения на предмет его тканезащитной активности.
11. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя:
(a) приведение тест-соединения в контакт с рекомбинантной клеткой, которая экспрессирует общий b-рецептор, причем указанная клетка трансформирована нуклеиновой кислотой, содержащей нуклеотидную последовательность, которая (i) оперативно связана с промотором и (ii) кодирует полипептид ЕРО-рецептора;
(b) измерение уровня активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в клетке;
(c) идентификацию тест-соединения, которое повышает или понижает уровень активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в клетке по сравнению с уровнем активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, измеряемым в контрольной клетке, причем контрольная клетка является клеткой того же вида, что и клетка на стадии (а), и не является трансформированной нуклеиновой кислотой, содержащей нуклеотидную последовательность, которая (i) оперативно связана с промотором и (ii) кодирует полипептид общего b-рецептора; и
(d) анализ идентифицированного тест-соединения на предмет его тканезащитной активности.
12. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя:
(а) приведение тест-соединения в контакт с клеткой, экспрессирующей рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов, причем указанная клетка трансформирована нуклеиновой кислотой, которая кодирует репортерный ген, оперативно связанный с регуляторным элементом, ассоциированным с активностью рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов;
(b) идентификацию тест-соединения, которое повышает или понижает уровень экспрессии репортерного гена по сравнению с уровнем экспрессии репортерного гена, измеряемым в отсутствие тест-соединения, и
(c) анализ идентифицированного тест-соединения на предмет его тканезащитной активности.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что регуляторный элемент является чувствительным к сыворотке.
14. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя:
(a) приведение тест-соединения в контакт с клеткой, содержащей:
(i) последовательность нуклеиновой кислоты, содержащей репортерный ген, оперативно связанный с сайтом связывания, специфичным в отношении ДНК-связывающего домена активатора транскрипции;
(ii) первый слитый белок, содержащий (А) ДНК-связывающий домен активатора транскрипции и (В) первый полипептид рецептора тканезащитных цитокинов или его фрагмент; и
(iii) второй слитый белок, содержащий (А) активационный домен активатора транскрипции и (В) второй рецептор тканезащитных цитокинов; и
(b) детектирование экспрессии репортерного гена, так что если экспрессия репортерного гена в (b) отличается от экспрессии репортерного гена, детектируемой в отсутствие тест-соединения, идентифицируют соединение, которое модулирует тканезащитную активность.
15. Способ по любому из пп.4, 10, 11, 12 или 14, отличающийся тем, что клетка представляет собой прокариотическую клетку.
16. Способ по любому из пп.4, 10, 11, 12 или 14, отличающийся тем, что клетка представляет собой эукариотическую клетку.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что эукариотическая клетка является клеткой человека.
18. Способ по любому из пп.4, 10, 11, 12 или 14, отличающийся тем, что клетка эндогенно экспрессирует по меньшей мере один рецептор рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
19. Способ по любому из пп.4, 10, 11, 12 или 14, отличающийся тем, что клетка представляет собой ВаF3-клетку.
20. Способ идентификации соединения, которое модулирует активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, включающий в себя:
(а) приведение тест-соединения в контакт с клеткой модифицированного дрожжевого штамма, которая содержит (i) нуклеотидную последовательность, кодирующую репортерный ген, который оперативно связан с промотором, чувствительным к рецепторному комплексу тканезащитных цитокинов, и (ii) экспрессирует рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов; и
(b) определение уровня активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов путем измерения уровня экспрессии репортерного гена, так что если уровень активности репортерного гена в присутствии соединения повышается или понижается по сравнению с уровнем активности репортерного гена в отсутствие соединения, тогда идентифицируют соединение, которое модулирует активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
21. Способ идентификации соединения, которое связывается с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов, включающий в себя:
(a) приведение рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в контакт (i) с лигандом рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, присоединенным к первой метке, и (ii) с эквивалентным количеством тест-соединения, присоединенного ко второй метке в условиях, способствующих связыванию;
(b) удаление не связавшегося материала из рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов и
(c) детектирование уровня первой и второй меток, причем если вторая метка присутствует, то соединение связывается с комплексом, и если уровень первой метки снижается по сравнению с уровнем первой метки, когда меченый лиганд приводят в контакт с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов в условиях, способствующих связыванию, в отсутствие тест-соединения после удаления не связавшегося материала, тогда идентифицируют соединение, которое связывается с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
22. Способ идентификации соединения, которое модулирует связывание лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов, включающий в себя:
(a) приведение в контакт лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов в присутствии одного или более тест-соединений в условиях, способствующих связыванию; и
(b) измерение количества лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, связанного с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов, так что если количество связанного лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, измеренного в (b), отличается от количества связанного лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, измеренного в отсутствие одного или более тест-соединений, тогда идентифицируют соединение, которое модулирует связывание лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что количество связанного лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов измеряют с помощью специфического антитела против лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
24. Способ по п.22, отличающийся тем, что лиганд рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов является меченым, и связывание лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов измеряют путем детектирования метки, присоединенной к лиганду рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
25. Способ по п.22, отличающийся тем, что лиганд рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов является меченым, и связывание меченого лиганда с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов измеряют путем детектирования метки, присоединенной к лиганду рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
26. Способ по п.24, отличающийся тем, что метка является флуоресцентной меткой.
27. Способ идентификации соединения, которое модулирует взаимодействие между рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов и лигандом рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, включающий в себя:
(a) приведение рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в контакт с одним или более тест-соединений; и
(b) измерение активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, так что если активность, измеренная в (b), отличается от активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов в отсутствие одного или более тест-соединений, тогда идентифицируют соединение, которое модулирует взаимодействие между рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов и лигандом рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
28. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11 или 27, отличающийся тем, что активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов измеряют по клеточной пролиферации или дифференцировке клеток.
29. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11 или 27, отличающийся тем, что измеренная активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов представляет собой способность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов взаимодействовать с лигандом рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
30. Способ по любому из пп.4, 10, 11, 12 или 27, отличающийся тем, что стадия анализа идентифицируемого соединения на предмет его тканезащитной активности включает в себя детектирование присутствия в клетке нуклеолина.
31. Способ по любому из пп.4, 10, 11, 12 или 27, отличающийся тем, что стадия анализа идентифицируемого соединения на предмет его тканезащитной активности включает в себя детектирование или измерение повышенного уровня активности нейроглобина или цитоглобина в клетке.
32. Способ по любому из пп.1, 21, 22 или 27, отличающийся тем, что рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов находится в растворе.
33. Способ по любому из пп.1, 21, 22 или 27, отличающийся тем, что рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов находится в клетке.
34. Способ по п.22 или 27, отличающийся тем, что соединение ингибирует связывание лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
35. Способ по п.22 или 27, отличающийся тем, что соединение усиливает связывание лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
36. Способ по любому из пп.1, 21, 22 или 27, отличающийся тем, что рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов, приводимый в контакт на стадии (а), находится на клеточной поверхности.
37. Способ по любому из пп.1, 21, 22 или 27, отличающийся тем, что рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов находится на изолированной клеточной мембране.
38. Способ по любому из пп.1, 21, 22 или 27, отличающийся тем, что рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов иммобилизован на твердой поверхности.
39. Способ по п.38, отличающийся тем, что твердая поверхность представляет собой микротитровальную чашку.
40. Способ по п.38, отличающийся тем, что твердая поверхность представляет собой чип.
41. Способ идентификации соединения, которое представляет собой лиганд рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, предусматривающий:
(a) приведение тест-соединения в контакт с лиганд-связывающим фрагментом тканезащитного рецепторного комплекса, включающим в себя по меньшей мере один внеклеточный домен ЕРО-рецептора и по меньшей мере один внеклеточный домен общего b-рецептора, слитый с Fc-фрагментом, присоединенным к твердой подложке;
(b) удаление не связавшихся тест-соединений из твердой подложки и
(c) идентификацию соединения, присоединенного к фрагменту рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов, так что соединение, связанное с твердой подложкой, идентифицируют как соединение, которое является лигандом рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
42. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11, 12, 14, 15, 21, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что тест-соединение представляет собой антитело, специфичное в отношении рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
43. Способ по любому из пп.15, 21, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что тест-соединение представляет собой антитело, специфичное в отношении лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
44. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11, 12, 14, 15, 21, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что тест-соединение представляет собой малую молекулу.
45. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11, 12, 14, 15, 21, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что тест-соединение представляет собой пептид.
46. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11, 12, 14, 15, 21, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что тест-соединение является членом библиотеки.
47. Способ по любому из пп.21, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что лиганд рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов представляет собой ЕРО.
48. Способ по любому из пп.1, 4, 10, 11, 12, 27 или 41, отличающийся тем, что соединение связывается с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
49. Способ по любому из пп.15, 22, 27 или 41, отличающийся тем, что соединение связывается с лигандом рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
50. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность у млекопитающего, включающий в себя:
(a) введение соединения первому млекопитающему непосредственно после нанесения травмы, где первое млекопитающее эндогенно экспрессирует рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов; и
(b) введение соединения второму млекопитающему непосредственно после нанесения такой же самой травмы, что и на стадии (а), где второе млекопитающее является дефицитным в отношении экспрессии рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов; так что если восстановление после повреждения у млекопитающего со стадии (а) отличается от такового у млекопитающего со стадии (b), идентифицируют соединение, которое модулирует тканезащитную активность.
51. Способ лечения или профилактики заболевания или нарушения у человека, включающий в себя введение терапевтически эффективного количества соединения, которое модулирует активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов у человека, в случае необходимости такого лечения или профилактики, при условии, что соединение не представляет собой ЕРО.
52. Способ по п.51, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой заболевание, или нарушение, или поражение возбудимой ткани.
53. Способ усиления функции возбудимых клеток, тканей или органов у человека, включающий в себя введение терапевтически эффективного количества соединения, которое модулирует активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов у человека, в случае необходимости, где указанное усиление функции возбудимых клеток, тканей или органов приводит к повышению ассоциативной обучаемости или памяти, при условии, что соединение не представляет собой ЕРО.
54. Способ модуляции активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов у человека, включающий в себя введение человеку соединения, которое модулирует активность указанного комплекса, в случае необходимости такой модуляции, при условии, что соединение не представляет собой ЕРО.
55. Способ лечения или профилактики заболевания или нарушения у человека, включающий в себя модуляцию рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов у человека.
56. Способ усиления функции возбудимых клеток, тканей или органов у человека, включающий в себя модуляцию рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов у человека.
57. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение идентифицируют способом по любому из пп.1-4, 10-14, 20-22, 27 и 41.
58. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение представляет собой антитело, специфичное в отношении рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
59. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение представляет собой антитело, специфичное в отношении лиганда рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
60. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение представляет собой малую молекулу, пептид или член библиотеки.
61. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение связывается с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов.
62. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение усиливает активность рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
63. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение препятствует активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов.
64. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что соединение вводят в сочетании с ЕРО.
65. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой нарушение настроения, беспокойство, депрессию, аутизм, нарушение, связанное с гиперактивностью и дефицитом внимания, болезнь Альцгеймера, старение или нарушение когнитивной способности.
66. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболевание или нарушение вызвано гипоксией, расстройствами, связанными с припадками, нейродегенеративными заболеваниями, отравлением нейротоксином, множественным склерозом, гипотонией, остановкой сердца, радиацией или гипогликемией.
67. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболеванием или нарушением является ишемия или инсульт.
68. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболеванием или нарушением является нейродегенеративное состояние.
69. Способ по п.68, отличающийся тем, что нейродегенеративное состояние представляет собой инсульт, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральный паралич, травму головного или спинного мозга, деменцию, связанную со СПИДом, связанную со старением потерю когнитивной функции, потерю памяти, амиотрофический боковой склероз, расстройства, связанные с припадками, алкоголизм, старение или утрату нервных клеток.
70. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболеванием или нарушением является нервно-мышечное или мышечное расстройство.
71. Способ по п.70, отличающийся тем, что нервно-мышечное или мышечное расстройство является расстройством сердечной ткани.
72. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболеванием или нарушением является заболевание или нарушение сердца.
73. Способ по п.72, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой застойную сердечную недостаточность, заболевание коронарной артерии, ишемию, инфаркт миокарда, стенокардию, врожденный порок сердца, стенокардию Принцметала, разрыв сердца, ангиит, аритмию, тахи-брадиаритмию, нарушения суправентрикулярной, внутрижелудочковой проводимости, миокардит, corpulmonale или нанесенное тупым предметом и проникающее ранение.
74. Способ по любому из пп.51, 52 или 55, отличающийся тем, что заболеванием или нарушением является заболевание или нарушение глаза.
75. Способ по п.72, отличающийся тем, что заболевание или нарушение представляет собой неврит зрительного нерва, нанесенные тупым предметом и проникающие ранения, инфекции, саркоид, серповидно-клеточное заболевание, отслоение сетчатки, преходящий артериит, ишемию сетчатки, дегенерацию желтого пятна, пигментный ретинит, артериосклеротическую ретинопатию, гипертоническую ретинопатию, блокаду сетчаточной артерии, блокаду сетчаточной вены, гипотонию, диабетическую ретинопатию или отек желтого пятна.
76. Способ по п.53 или 56, отличающийся тем, что возбудимая ткань представляет собой ткань центральной нервной системы или ткань периферической нервной системы.
77. Способ по п.76, отличающийся тем, что ткань периферической нервной системы представляет собой ткань плаценты, ткань сетчатки или сердечную ткань.
78. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что введение представляет собой оральное, местное, внутричерепное, интралюминальное введение, ингаляцию, парентеральное, внутривенное, периферическое, внутриартериальное, подкожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, подслизистое или внутрикожное введение.
79. Способ по любому из пп.51, 52, 53 или 54, отличающийся тем, что введение производят перед лечебной, хирургической или природной процедурой.
80. Способ по п.79, отличающийся тем, что хирургическая процедура представляет собой резекцию опухоли, репарацию аневризмы или процедуру шунтирования коронарной артерии.
81. Способ по п.79, отличающийся тем, что лечебная процедура представляет собой химиотерапию.
82. Способ по п.79, отличающийся тем, что природная процедура представляет собой схватки или роды.
|
