(57) 1. Полицистронный вектор для экспрессии функциональных антител в эукариотических хозяйских клетках, причем указанный вектор содержит полицистронную транскрипционную систему, включающую в себя следующие элементы, оперативно связанные в ориентации от 5' к 3':
(i) промотор, оперативный в эукариотической клетке;
(ii) первый цистрон, содержащий первую последовательность ДНК, кодирующую легкую цепь антитела, которая необязательно содержит на своем 5'-конце сигнальную последовательность, кодирующую пептид, оперативную в эукариотических клетках, где указанная первая последовательность ДНК не содержит на своем 3'-конце поли-А-последовательность и где указанная первая последовательность ДНК содержит 5'-инициирующий кодон и терминирующий 3'-стоп-кодон;
(iii) IRES (internal ribosome entry site), полученный из члена, выбранного из группы, состоящей из кардиовируса, вируса герпеса и полиовируса; и
(iv) по меньшей мере второй цистрон, содержащий следующие элементы: (а) вторую последовательность ДНК, кодирующую тяжелую цепь антитела, где указанная вторая ДНК содержит на своем 5'-конце кодирующую сигнальный пептид последовательность, оперативную в эукариотических клетках, и где указанная вторая последовательность ДНК содержит на своем 3'-конце поли-А-последовательность только в случае, если последовательность ДНК является наиболее приближенной к 3'-концу полицистрона кодирующей последовательностью, и дополнительно содержит инициирующий кодон и стоп-кодон соответственно на 5'- и 3'-концах указанной второй последовательности ДНК;
где первая последовательность ДНК экспрессируется по отношению ко второй последовательности ДНК в соотношении, варьирующем от 10:1 до 1:1 в эукариотической хозяйской клетке, содержащей полицистронный вектор.
2. Полицистронный вектор по п.1, где первая и вторая последовательности ДНК кодируют константные области соответственно тяжелой и легкой цепей антитела, источником которых являются приматы.
3. Полицистронный вектор по п.2, где указанным приматом является человек.
4. Полицистронный вектор по п.1, где первая и вторая последовательности ДНК кодируют вариабельные области соответственно тяжелой и легкой цепей антитела, источником которых являются приматы.
5. Полицистронный вектор по п.4, где указанным приматом является человек.
6. Полицистронный вектор по п.5, где вариабельные области тяжелой и легкой цепей гуманизированы.
7. Полицистронный вектор по п.1, где первая и вторая последовательности ДНК кодируют константные области соответственно тяжелой и легкой цепей антитела, источником которых являются грызуны.
8. Полицистронный вектор по п.7, где указанным грызуном является мышь.
9. Полицистронный вектор по п.1, где первая и вторая последовательности ДНК кодируют вариабельные области соответственно тяжелой и легкой цепей антитела, источником которых являются грызуны.
10. Полицистронный вектор по п.9, где последовательности ДНК, кодирующие вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела, имеют мышиную природу.
11. Полицистронный вектор по п.1, где эукариотический промотор является промотором млекопитающих или вирусным промотором.
12. Полицистронный вектор по п.11, где промотором является промотор CMV.
13. Полицистронный вектор по п.1, где IRES получен из кардиовируса.
14. Полицистронный вектор по п.13, где кардиовирус представляет собой вирус энцефаломиокардита человека.
15. Полицистронный вектор по п.1, где функциональные антитела, экспрессируемые полицистронным вектором, специфически связываются с ассоциированным с опухолью антигеном, антигеном, экс-прессированным на В-клетке, или антигеном, экспрессированным на Т-клетке.
16. Полицистронный вектор по п.15, где функциональные антитела, экспрессируемые полицистронным вектором, специфически связываются с антигеном, выбранным из группы, состоящей из TAG-72, CD4, CD11, CD19, CD20, CD22, CD23, CD37, CD40, CD45, CD80, CD86 и CD154.
17. Полицистронный вектор по п.16, где антигеном является TAG-72.
18. Полицистронный вектор по п.16, где функциональное антитело представляет собой человеческое, гуманизированное, приматизированное или химерное антитело, специфичное в отношении TAG-72.
19. Полицистронный вектор по п.15, где антитело представляет собой ритуксимаб или ибритумомаб.
20. Полицистронный вектор по п.1, где последовательность ДНК, кодирующая легкую цепь антитела, экспрессируется в соотношении, варьирующем между 3:1 и 1:1 по отношению к тяжелой цепи антитела.
21. Эукариотическая клетка, содержащая полицистронный вектор по любому из пп.1-20, где эукариотическая клетка секретирует приблизительно от 5 до 100 пг функционального антитела в день .
22. Эукариотическая клетка по п.21, где эукариотическая клетка представляет собой клетку млекопитающего или дрожжевую клетку.
23. Клетка млекопитающего по п.22, где клетка млекопитающего является членом, выбранным из группы, состоящей из клетки почки хомячка, фибробластной, миеломной клетки и клеток яичника китайского хомячка (клетки СНО).
24. Клетка млекопитающего по п.22, которая представляет собой клетку СНО.
25. Дрожжевая клетка по п.23, где указанная дрожжевая клетка выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces, Schizosacchoriomyces, Hansenula, Yarrowia, Pichia и Candida.
26. Дрожжевая клетка по п.25, где указанный штамм Pichia представляет собой Pichia pastoris.
27. Способ продуцирования функциональных антител, включающий в себя культивирование эукариотических клеток по п.21 в клеточной культуре для получения функциональных антител и изъятие функциональных антител из культуры эукариотических клеток.
28. Способ по п.27, где культивируемые эукариотические клетки продуцируют по меньшей мере приблизительно от 1 до 5 пг антител на клетку в день.
29. Способ по п.28, где указанная эукариотическая клетка представляет собой клетку млекопитающего или дрожжевую клетку.
30. Способ по п.28, где функциональные антитела извлекают из среды культивирования клеток.
31. Способ по п.28, где функциональные антитела специфически связываются с TAG-72.
32. Способ по п.31, где указанное функциональное антитело включает в себя гуманизированное человеческое или химерное антитело HuCC49 против СН2-домена с удаленным доменом.
33. Способ по п.28, где указанное химерное антитело представляет собой ритуксимаб или ибритумомаб.
34. Способ по п.27, где продуцирование функциональных антител дополнительно включает в себя стадию гомологической рекомбинации.
35. Способ по п.28, где функциональные антитела продуцируются в клеточных культурах с подпиткой.
| 
