(57) 1. Изолированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с VEGF и которое включает по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи (VH), которая включает три гипервариабельных участка (CDR), и по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи (VL), которая включает три гипервариабельных участка (CDR),
в котором указанная вариабельная область легкой цепи включает:
(a) CDR1 VL, который имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 8, или последовательность, по существу, гомологичную ей,
(b) CDR2 VL, который имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 9, или последовательность, по существу, гомологичную ей, и
(c) CDR3 VL, который имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 10, или последовательность, по существу, гомологичную ей,
и указанная вариабельная область тяжелой цепи включает:
(a) CDR1 VH, который имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 5, или последовательность, по существу, гомологичную ей,
(b) CDR2 VH, который имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 6, или последовательность, по существу, гомологичную ей, и
(c) CDR3 VH, который имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 7, или последовательность, по существу, гомологичную ей,
при этом указанная, по существу, гомологичная последовательность представляет собой последовательность, включающую 1, 2 или 3 консервативные замены аминокислот по сравнению с данной последовательностью гипервариабельного участка.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, отличающееся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит гипервариабельный участок CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), который имеет последовательность SEQ ID NO: 8, VL CDR2, который имеет последовательность SEQ ID NO: 9, VL CDR3, который имеет последовательность SEQ ID NO: 10, гипервариабельный участок CDR1 вариабельной области тяжелой цепи (VH), который имеет последовательность SEQ ID NO: 5, VH CDR2, который имеет последовательность SEQ ID NO: 6, VH CDR3, который имеет последовательность SEQ ID NO: 7.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, отличающееся тем, что указанная вариабельная область легкой цепи имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 4, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что указанная вариабельная область тяжелой цепи имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 3, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.3 или 4, отличающееся тем, что указанная вариабельная область легкой цепи имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 4, и указанная вариабельная область тяжелой цепи имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 3.
6. Антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что указанный антигенсвязывающий фрагмент имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 21, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью.
7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, отличающееся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой полностью человеческое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
8. Антитело по любому из пп.1-5 или 7, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой полноразмерное антитело, включающее константную область антитела.
9. Антитело по п.8, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой IgG антитело.
10. Антитело по п.8 или 9, отличающееся тем, что указанное антитело включает тяжелую цепь, которая имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 24, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью, и легкую цепь, которая имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 25, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью.
11. Антитело по п.10, отличающееся тем, что указанное антитело включает тяжелую цепь, которая имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 24, и легкую цепь, которая имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 25.
12. Антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что указанный антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab, Fab', F(ab')₂, scFv, Fv, dsFv, ds-scFv, димер TandAb, линейное антитело, миниантитело, диабоди или биспецифичный фрагмент антитела.
13. Антитело по любому из пп.1-5 или 8, отличающееся тем, что указанное антитело проявляет аффинность связывания с VEGF, которая соответствует Kd, равной менее чем 10 нМ, когда указанное антитело представляет собой IgG.
14. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-13, которое связывается, по меньшей мере, с VEGF человека и VEGF мыши.
15. Иммуноконъюгат, включающий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-14, присоединенное к терапевтическому или диагностическому агенту.
16. Иммуноконъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент присоединены к радиотерапевтическому агенту, химиотерапевтическому агенту, антиангиогенному агенту, индуцирующему апоптоз агенту, антитубулиновому лекарственному препарату, цитостатическому или цитотоксическому агенту, стероиду, цитокину, хемокину или коагулянту.
17. Иммуноконъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент присоединены к
(a) радиоактивному изотопу мышьяка;
(b) таксолу, доцетакселу, паклитакселу, цисплатину, гемцитабину, комбретастатину, доксорубицину или адриамицину;
(c) рицину, гелонину, абрину, дифтерийному токсину pseudomonas или коклюшному токсину;
(d) ингибитору АТФазы типа V;
(e) IL-2, IL-12, TNF-a, интерферону или LEC или
(f) усеченному тканевому фактору.
18. Фармацевтическая композиция, включающая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент согласно любому из пп.1-14 или иммуноконъюгат по любому из пп.15-17 в эффективном количестве и один или более эксципиентов, носителей, растворителей, буферов или стабилизаторов.
19. Композиция по п.18, где указанная композиция дополнительно включает терапевтический агент, выбранный из группы, включающей радиотерапевтический агент, химиотерапевтический агент, антиангиогенный агент, индуцирующий апоптоз агент, антитубулиновый лекарственный препарат, цитостатический или цитотоксический агент, стероид, цитокин, хемокин или коагулянт.
20. Композиция по п.19, отличающаяся тем, что указанный терапевтический агент является химиотерапевтическим агентом.
21. Композиция по п.20, отличающаяся тем, что указанный терапевтический агент выбран из группы, состоящей из аналогов пиримидина, координационных комплексов платины, камптотецинов, ингибиторов тирозинкиназ и ингибиторов рецепторных тирозинкиназ.
22. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что указанный терапевтический агент представляет собой фторурацил, капецитабин, оксалиплатин, цисплатин, карбоплатин, иринотекан, акситиниб, сунитиниб или паклитаксел.
23. Молекула нуклеиновой кислоты, включающая последовательность нуклеотидов, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-14.
24. Молекула нуклеиновой кислоты по п.23, отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеотидов кодирует антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое имеет последовательность аминокислот scFv, указанную в SEQ ID NO: 21, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью.
25. Молекула нуклеиновой кислоты по п.24, отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеотидов представлена в SEQ ID NO: 20.
26. Молекула нуклеиновой кислоты по п.23, отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеотидов кодирует антитело, включающее тяжелую цепь, которая имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 24, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью, и легкую цепь, которая имеет последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 25, или последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью.
27. Молекула нуклеиновой кислоты по п.26, отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеотидов, кодирующая SEQ ID NO: 24, представлена в SEQ ID NO: 22, и отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеотидов, кодирующая SEQ ID NO: 25, представлена в SEQ ID NO: 23.
28. Вектор экспрессии, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.23-27.
29. Клетка-хозяин для получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.23-27 или вектор экспрессии по п.28.
30. Вирусная частица, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.23-27 или вектор экспрессии по п.28.
31. Набор для лечения заболевания, связанного с ангиогенезом или лимфоангиогенезом, включающий, по меньшей мере, в первом контейнере:
(a) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-14;
(b) иммуноконъюгат по любому из пп.15-17;
(c) фармацевтическую композицию по любому из пп.18-22;
при этом указанный набор также содержит инструкцию по применению компонентов набора.
32. Набор для применения в визуализации или диагностике заболевания, связанного с ангиогенезом или лимфоангиогенезом, включающий, по меньшей мере, в первом контейнере:
(a) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-14;
(b) иммуноконъюгат по любому из пп.15-17;
(c) фармацевтическую композицию по любому из пп.18-22;
при этом указанный набор также содержит инструкцию по применению компонентов набора.
33. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14, включающий:
(a) культивирование клетки-хозяина, которая включает вектор экспрессии по п.28, при условиях, эффективных для экспрессии кодируемого антитела; и
(b) выделение экспрессированного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из указанной клетки-хозяина.
34. Способ обнаружения VEGF в образце, включающий приведение во взаимодействие образца, тестируемого на наличие VEGF, с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп.1-14 или иммуноконъюгатом по любому из пп.15-17 при условиях, эффективных для образования комплексов VEGF/антитело или VEGF/антигенсвязывающий фрагмент, причем обнаружение комплексов, полученных таким образом, свидетельствует о наличии VEGF в указанном образце.
35. Способ диагностики заболевания, связанного с ангиогенезом или лимфоангиогенезом, у животного, включающий:
(а) приведение во взаимодействие in vitro тестируемого образца, полученного от указанного животного, с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп.1-14 или иммуноконъюгатом по любому из пп.15-17 при условиях, эффективных для обеспечения образования комплексов VEGF/антитело или VEGF/антигенсвязывающий фрагмент;
(b) обнаружение комплексов VEGF/антитело или VEGF/антигенсвязывающий фрагмент, полученных таким образом, и определение количества VEGF в указанном тестируемом образце и
(c) сравнение количества VEGF в указанном тестируемом образце с количеством VEGF в соответствующем контрольном образце, при этом повышенное количество VEGF в указанном тестируемом образце по сравнению с количеством VEGF в указанном контрольном образце свидетельствует о наличии заболевания, связанного с ангиогенезом или лимфоангиогенезом.
36. Способ по п.35, отличающийся тем, что указанное заболевание, связанное с ангиогенезом или лимфоангиогенезом, представляет собой рак, офтальмологическое неоваскулярное заболевание, дистрофию желтого пятна, возрастную дистрофию желтого пятна, артрит, ревматоидный артрит, атеросклероз, диабетическую ретинопатию, гиперплазию щитовидной железы, болезнь Грейвса, гемангиому, неоваскулярную глаукому или псориаз.
37. Способ ингибирования ангиогенеза или лимфоангиогенеза, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14 или иммуноконъюгата по любому из пп.15-17 животному.
38. Способ по п.37, отличающийся тем, что указанное животное страдает от рака или офтальмологического неоваскулярного заболевания.
39. Способ по п.37 или 38, отличающийся тем, что указанное животное представляет собой человека.
40. Способ лечения заболевания, связанного с ангиогенезом, включающий введение животному, страдающему от указанного заболевания, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14 или иммуноконъюгата по любому из пп.15-17.
41. Способ по п.40, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой офтальмологическое неоваскулярное заболевание, дистрофию желтого пятна, возрастную дистрофию желтого пятна, артрит, ревматоидный артрит, атеросклероз, диабетическую ретинопатию, гиперплазию щитовидной железы, болезнь Грейвса, гемангиому, неоваскулярную глаукому или псориаз.
42. Способ по п.40, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой рак.
43. Способ по любому из пп.40-42, дополнительно включающий введение второго терапевтического агента, выбранного из группы, включающей радиотерапевтический агент, химиотерапевтический агент, антиангиогенный агент, индуцирующий апоптоз агент, антитубулиновый лекарственный препарат, цитостатический или цитотоксический агент, стероид, цитокин, хемокин или коагулянт, указанному животному.
44. Способ по п.43, отличающийся тем, что указанный второй терапевтический агент определен в любом из пп.20-22.
45. Способ по любому из пп.40-44, отличающийся тем, что указанное животное представляет собой человека.
46. Способ лечения заболевания, связанного с лимфоангиогенезом, включающий введение животному, страдающему от указанного заболевания, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14 или иммуноконъюгата по любому из пп.15-17.
47. Способ по п.46, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой рак.
48. Способ по п.46 или 47, отличающийся тем, что указанное животное представляет собой человека.
49. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-14 в производстве лекарственного средства для лечения заболевания, связаного с ангиогенезом или лимфоангиогенезом.
50. Применение иммуноконъюгата по любому из пп.15-17 в производстве лекарственного средства для лечения заболевания, связаного с ангиогенезом или лимфоангиогенезом.
51. Применение по любому из пп.49, 50, отличающееся тем, что указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из рака, офтальмологического неоваскулярного заболевания, дистрофии желтого пятна, возрастной дистрофии желтого пятна, артрита, ревматоидного артрита, атеросклероза, диабетической ретинопатии, гиперплазии щитовидной железы, болезни Грейвса, гемангиомы, неоваскулярной глаукомы и псориаза.
52. Применение по любому из пп.49-51, где лекарственное средство дополнительно включает второй терапевтический агент, выбранный из группы, включающей радиотерапевтический агент, химиотерапевтический агент, антиангиогенный агент, индуцирующий апоптоз агент, антитубулиновый лекарственный препарат, цитостатический или цитотоксический агент, стероид, цитокин, хемокин или коагулянт.
53. Применение по п.52, отличающееся тем, что указанный второй терапевтический агент определен в любом из пп.20-22.
54. Применение по любому из пп.49-52, отличающееся тем, что указанное лечение осуществляют в отношении человека.

---